人胎盘CD133^＋细胞具有高增殖潜能集落形成细胞特性

目的通过对人胎盘CD133+细胞群中高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)检测与生物学特性的分析,证明人胎盘存在早期造血干/祖细胞(HSPC)。方法采用机械法制备人胎盘组织(PT)单细胞悬液,用Histopaque-1007分离出单个核细胞(MNC),经磁式分选(MACS)富集CD133+细胞,培养28d后观察HPP-CFC集落形成能力,用流式细胞仪(FCM)对分选的细胞组份和HPP-CFC进行表型分析,实验全程用脐带血(UCB)作平行比较分析。结果培养28d后,PT-CD133+与UCB-CD133+细胞组份分别扩增了266和362倍,前者低于后者(P<0.01);PT-CD133+与UCB-CD133+细胞中HPP-CFC分别为(32.4±11.2)/5×103、(17.7±5.7)/5×103,前者形成的HPP-CFC数量明显高于后者(P<0.01);PT-CD133+、UCB-CD133+细胞培养至28d时,除UCB-CD133+组的CD133+CD34-亚群比例无明显改变外,CD133+CD34+、CD133-CD34+和CD133+CD34-(PT-CD133+组)亚型均比培养前减少。结论人胎盘组织CD133+细胞中存在HPP-CFC,说明胎盘CD133+细胞群中存在早期HSPC。

银屑病患者骨髓高增殖潜能集落形成细胞P16基因mRNA表达的研究

目的:研究银屑病患者骨髓高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)的集落形成能力及P16基因mRNA表达,探讨银屑病患者骨髓造血干细胞体外增殖活性及原因。方法:密度梯度离心法分离银屑病患者及正常对照骨髓单个核细胞,培养于含人干细胞因子(SCF)、人粒-巨噬细胞系集落剌激因子(GM-CSF)、白介素(IL)-3、IL-6细胞因子组合的甲基纤维素半固体培养基,培养14d时计数HPP-CFC集落,然后收集集落。提取纯化集落细胞的总RNA,应用反转录(RT)-PCR方法检测HPP-CFC集落细胞的P16基因mRNA的表达。结果:①在甲基纤维素半固体培养基中,银屑病患者骨髓HPP-CFC集落数显著低于正常对照组,且集落形态较小;②银屑病患者骨髓HPP-CFC集落细胞的P16基因mRNA表达高于正常对照组,差异有统计学意义。结论:银屑病患者骨髓HPP-CFC集落形成能力降低;银屑病患者骨髓HPP-CFC的P16基因mRNA表达阳性率增高,推测P16基因可能参与了银屑病患者骨髓造血干细胞体外增殖活性异常的发生。

人胎盘CD133^+、CD133^-细胞组份中高增殖潜能集落形成细胞及其表型特征的初步探讨

目的研究人胎盘CD133+、CD133-细胞亚群中高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)频率及表型特征。方法采用机械法制备人胎盘组织(PT)游离细胞悬液,用Histopaque-1077分离出单个核细胞(MNCs),经磁式分选(MACS)分离纯化CD133+和CD133-细胞。将分选的CD133+和CD133-细胞分别使用H4435培养基培养4wk后观察HPP-CFC集落形成能力,用流式细胞仪(FCM)对分选的细胞组份和HPP-CFC进行表型分析。结果培养4wk后,PT-CD133+、CD133-细胞生成的HPP-CFC集落分别为32.4±11.2/5×103、2.0±2.3/5×103,前者细胞中HPP-CFC数量明显高于后者(P<0.01);PT-CD133+、CD133-细胞培养至28d时CD133+CD34+、CD133+CD34-和CD133-CD34+亚型均比培养前减少。结论人胎盘组织CD133+与CD133-细胞群中均存在HPP-CFC,但CD133+细胞群中的HPP-CFC明显多于CD133-细胞群,说明胎盘CD133+细胞群中存在更多的早期HSPC。

锂对小鼠高增殖潜能集落形成细胞和粒巨噬系祖细胞体外增殖的影响

本文观察了锂对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨髓高增殖潜能集落形成细胞（ＨＰＰ－ＣＦＣ）和粒巨噬系祖细胞ＣＦＵ－ＧＭ体外增殖的影响。ＨＰＰ－ＣＦＣ集落由ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＷＥＨＩ３条件培养液（ＷＥＨＩ３－ＣＭ，含有ＩＬ－３）及Ｌ９２９条件培养液（Ｌ９２９－ＣＭ，含有Ｍ－ＣＳＦ）所支持，而ＣＦＵ－ＧＭ由ＷＥＨＩ３－ＣＭ所支持。结果显示，ＬｉＣｌ浓度在０．４－２ｍｍｏｌ／Ｌ时呈现剂量依赖性抑制ＨＰＰ－ＣＦＣ增殖；而在０．４－１ｍｍｏｌ／Ｌ的浓度范围内，则对ＣＦＵ－ＧＭ的增殖起剂量依赖性促进作用。这些结果提示ＬｉＣｌ对ＨＰＰ－ＣＦＣ和ＣＦＵ－ＧＭ的作用不同。

高增殖潜能集落形成细胞的分类、富集与调控

高增殖潜能集落形成细胞（ＨＰＰ－ＣＦＣ）是存在于小鼠和人骨髓及入胎肝、脐血中的一类较为原始的造血祖细胞。它在体外培养中可产生直径大于０．５ｍｍ，５００００细胞／集落的巨大集落；对５－氟尿嘧啶有相对耐受性；对多种造血生长因子的刺激有反应性。

高增殖活性集落形成细胞的研究进展

高增殖活性集落形成细胞(HPP-CFC)是一类较接近原始造血干细胞的造血祖细胞,有HPP-CFC-1、HPP-CFC-2和HPP-CFC-3三种类型。本文就HPP-CFC培养方法的建立、特性及调控等作一简要综述。

胚胎干细胞来源的BL-CFC可产生高增殖潜能造血祖细胞

小鼠胚胎干细胞 (embryonicstemcell,EScell)体外分化 2 .5 - 3.5天形成的拟胚体 (embryoidbody ,EB)中可产生原始细胞集落形成细胞 (blastcolony formingcell,BL CFC) ,后者具有造血和内皮细胞双向分化潜能 ,是目前体外实验可检测到的最早期的定向造血分化的细胞。本研究建立BL CFC培养体系 ,并通过造血祖细胞集落培养、免疫荧光标记以及巢式RT PCR鉴定单个原始细胞集落来源的贴壁细胞和非贴壁细胞的分化特点。结果表明 :部分贴壁细胞吞噬DiI Ac LDL ,并表达CD31,UEA I ,VE cadherin等内皮细胞特异性的表面分子 ;非贴壁细胞具有原始造血 (primitivehematopoiesis)和 (或 )永久造血 (definitivehematopoiesis)活性 ,其中 2 0 %的原始细胞集落含有高增殖潜能集落形成细胞 (highproliferativepotentialcolony formingcell,HPP CFC) ,后者能形成次级造血集落。结论 :胚胎干细胞来源的BL CFC可产生高增殖潜能造血祖细胞 ,但原始细胞集落来源的HPP

银屑病患者骨髓CFU-HPP集落形成及集落细胞p16基因启动子甲基化的研究

本研究检测银屑病患者骨髓高增殖潜能集落形成单位(CFU-HPP)的集落形成能力及集落细胞p16基因启动子甲基化状态,并探讨两者之间的关系。收集了24例银屑病患者及正常对照者骨髓,采用密度梯度离心法分离单个核细胞,并于含SCF/GM-CSF/IL-3/IL-6细胞因子组合的甲基纤维素半固体培养液中,培养14天计数CFU-HPP集落,然后收集集落。提取纯化集落细胞的DNA,经亚硫酸盐修饰后,采用甲基化特异PCR(MSP)检测CFU-HPP集落细胞的p16基因启动子甲基化状态。结果发现:在甲基纤维素半固体培养基中,银屑病患者骨髓CFU-HPP集落数显著低于正常对照(t=5.91,p<0.01),且集落形态较小;正常对照骨髓CFU-HPP集落细胞的p16基因启动子甲基化阳性率较高(66.7%),而银屑病患者骨髓CFU-HPP集落细胞p16基因启动子甲基化阳性率(37.5%)低于正常人。结论:银屑病患者骨髓CFU-HPP细胞集落形成能力降低;银屑病患者骨髓CFU-HPP集落细胞的p16基因甲基化降低可能与其相对较低的CFU-HPP集落形成能力密切相关。

银屑病患者骨髓HPP-CFC集落形成及p21基因启动子甲基化的研究

目的:研究银屑病患者骨髓高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)集落形成能力及集落细胞p21基因启动子甲基化状态,探讨银屑病患者骨髓造血前体细胞的活性。方法:密度梯度离心法分离银屑病患者及正常对照骨髓单个核细胞,培养于含SCF+GM-CSF+IL-3+IL-6细胞因子组合的甲基纤维素半固体培养基,培养14天时计数HPP-CFC集落,然后收集集落。提取纯化集落细胞DNA,经亚硫酸盐修饰后,采用甲基化特异性PCR(MSP)检测HPP-CFC集落细胞p21基因启动子甲基化状态。结果:(1)在甲基纤维素半固体培养基中,银屑病患者骨髓HPP-CFC集落数显著低于正常对照组,且集落形态较小;(2)正常对照骨髓HPP-CFCp21基因启动子甲基化阳性率较高,而银屑病患者骨髓HPP-CFCp21基因启动子甲基化阳性率低于正常对照组。结论:银屑病患者骨髓造血前体细胞活性有异常;银屑病患者骨髓HPP-CFCp21基因甲基化降低可能与其相对较低的HPP-CFC集落形成能力密切相关。

单一核细胞条件培养液与细胞因子组合培养体系对骨髓HPP-CFC集落形成影响的研究

目的:观察两种培养体系对骨髓高增殖潜能集落形成细胞(high proliferative potential colony forming cell,HPP-CFC)集落形成的影响。方法:密度梯度离心法分离骨髓单一核细胞,分别在植物血凝素(PHA)刺激的单一核细胞条件培养液(phytohemagglutinin monocyte medium,PHA-MCM)及细胞因子组合支持下进行甲基纤维素半固体培养,14d时倒置显微镜下观察并计数两种培养体系中形成的集落数目及直径。结果:PHA-MCM与细胞因子组合均可支持HPP-CFC的集落形成,但细胞因子组合培养体系的集落数目明显高于PHA-MCM体系(P<0.05),而且集落直径明显大于后者。结论:在HPP-CFC的体外培养中,细胞因子组合培养体系明显优于PHA-MCM体系,是骨髓HPP-CFC较理想的体外培养体系,为银屑病及其它皮肤病的骨髓造血细胞研究奠定了一定的实验基础。

银屑病患者骨髓造血细胞体外增殖活性研究

目的进一步了解银屑病患者骨髓造血细胞是否有异常。方法采用密度梯度离心法分离银屑病患者及正常对照组骨髓单一核细胞,然后在含有甲基纤维素的半固体细胞因子培养体系中进行体外高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)、粒-巨噬细胞系集落形成单位(CFU-GM)及红系集落形成单位(CFU-E)集落形成实验,培养一定时期后计数集落。结果与正常对照比较,银屑病患者的HPP-CFC及CFU-GM的集落形成数显著减少,而CFU-E形成的集落数无统计学意义。结论银屑病患者骨髓造血细胞体外增殖能力明显降低,这种异常的造血细胞可能在银屑病的免疫发病机制中发挥一定作用。

外周血多潜能间充质基质细胞在骨组织工程中的应用进展

外周血来源的多潜能间充质基质细胞数量较少,它们表达骨髓来源的多潜能间充质基质细胞的大部分表面标记物,具有多样复杂的基因表达特征。虽然它们的起源和生理病理机制不清,但成人外周血间充质基质细胞的存在使其在组织工程领域备受争议和关注。本文就外周血来源的多潜能间充质基质细胞在骨组织工程中的应用作一综述。

巨细胞病毒感染对淋巴系祖细胞增殖的影响及其干预措施

目的探讨人类巨细胞病毒(HCMV)对淋巴系祖细胞(CFU-TL)体外增殖的影响、作用机制及其干预措施。方法本实验共分为空白对照组、灭活对照组、HCMV感染组、更昔洛韦(GCV)干预组、黄芪注射液(AMI)干预组5组。采用甲基纤维素半固体培养CFU-TL集落,不同浓度HCMV-AD169 持续攻击CFU-TL,用AMI、GCV粉剂干预,观察CFU-TL集落形成;用四甲基偶氮唑盐法测HCMV对宿主细胞增殖活性的影响;用PCR检测CFU-TL集落细胞内HCMV-AD169DNA。结果 1．与空白对照组及灭活对照组比较,各病毒感染组CFU-TL集落产率明显减少、维持时间明显缩短(P均<0．01),抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系;2．HCMV感染48、72、96、120 h对宿主细胞增殖活性的影响与对照组比较均有显著差异(F分别为11．412, 18．058,13．259,56．360 P均<0．01)。3．PCR检测到HCMV感染组CFU-TL集落细胞内HCMV-AD169DNA。4.与HCMV感染组比较,HCMV+AMI组、HCMV+GCV组CFU-TL集落产生率明显增加,集落维持时间均显著延长(P均<0.01)。结论 HCMV在体外能抑制CFU-TL集落的增殖和分化;HCMV感染患儿免疫功能低下可能与HCMV直接抑制CFU-TL有关;GCV、 AMI在体外能有效干预HCMV感染所致的CFU-TL增殖抑制的发生。

单克隆来源的小鼠胎肝HPP-CFC肝上皮分化潜能的研究

为研究胎肝中造血和肝上皮发育的关系,建立了小鼠胎肝高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)培养体系,并进行了单克隆培养以及诱导分化实验.在造血和肝诱导因子的共同作用下,对单克隆来源的HPP集落细胞向造血和肝上皮细胞进行诱导分化,采用透射电镜(TEM)、巢式RT-PCR、细胞免疫荧光检测,从细胞形态、超微结构、上皮细胞分化标志等方面对分化后的细胞进行检测.检测结果显示,诱导后的部分细胞具有肝细胞特异性的超微结构,并不同程度地表达白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白(CK8,CK18)等肝上皮分化标志,同时还表达间质标志α-SMA和血管内皮细胞标志Flk-1.免疫磁珠分选表明:胎肝来源的HPP-CFC主要来自于CD45+细胞,CD45-细胞不具有形成造血细胞克隆的能力.在肝上皮细胞分化潜能上,流式分选获得的CD49f+/Sca-1+细胞与未分选细胞无明显差异.该模型的克隆源性通过细胞混合实验进行证明.研究结果表明,改进的胎肝来源的HPP-CFC可能代表了一个新的造血细胞向肝上皮细胞分化的单克隆模型,为研究胎肝中造血和非造血细胞的发育关系提供了一个新的切入点.

小鼠高增殖潜能混合巨核细胞集落的鉴别

小鼠高增殖潜能混合巨核细胞集落的鉴别万海英，韩忠朝，阮长耿巨核细胞和血小板的生成过程是极其复杂的。在人类或小鼠的巨核细胞培养时已可识别三组巨核祖细胞，包括混合细胞集落（ｍＣＦＵ－ＭＫ）；爆式细胞集落（ＢＦＵ－ＭＫ）及集落形成单位（ＣＦＵ－ＭＫ）［Ｉｎ...

灵芝复方对人正常骨髓粒单系造血祖细胞及HL-60细胞增殖的影响

以往研究发现灵芝复方(GLC)在一定浓度范围内能促进小鼠正常骨髓粒单系集落形成单位(CFU-GM)增殖,并对小鼠白血病细胞系 WEHI-3细胞集落生长呈剂量依赖性抑制。为进一步了解灵芝复方的骨髓保护及抗白血病作用,为其临床应用奠定基础,本研究以人正常骨髓细胞、人急性髓系白血病细胞系HL-60细胞为研究对象,进行了较系统的研究。材料与方法1 材料1.1 标本肋骨来自湖南医科大学湘雅医院、湖南医科大学附属第二医院非血液病胸外手术患者。1.2 细胞系 HL-60细胞系由北京军事医学科学院提供,

非黏附骨髓间充质干细胞的体外培养与鉴定

目的探讨小鼠骨髓中是否存在非黏附间充质干细胞(BM-NA-MSC),体外能否形成成纤维细胞集落形成单位(CFU-F),能否在适当的条件下分化为脂肪细胞、软骨细胞和成骨细胞。方法分离小鼠总骨髓细胞,体外培养,每天转移未贴壁的非黏附骨髓细胞(NA-BMC)到新培养环境中继续培养,每组细胞长满12 d后,亚甲基蓝染色显示形成的克隆,计数克隆个数;在总骨髓细胞培养到第4天时收集未贴壁的NA-BMC到新的培养皿中,待细胞贴壁生长达融合后传代纯化,取第5代细胞接种于向脂肪细胞、软骨细胞和成骨细胞诱导分化的培养液中,2周后分别进行油红染色、抗Ⅱ型胶原的免疫组织化学染色及茜素红染色检测脂肪滴、Ⅱ型胶原和钙化结节的形成和表达。结果小鼠骨髓细胞体外培养条件下不仅总骨髓细胞可以形成CFU-F,而且反复转移的NA-BMC也能不断形成CFU-F;给予适当的诱导条件,非黏附来源的骨髓细胞体外能够分化为产生油滴的脂肪细胞、表达Ⅱ型胶原的软骨和具有钙化能力的成骨细胞。结论小鼠骨髓中存在一类NA-MSC,体外可以形成CFU-F,还可分化为脂肪、软骨和成骨细胞,表现出一定的多分化潜能,为下一步作为种子细胞用于移植实验的研究提供了前提。

黄药子醇提物抑制胃癌细胞功能的研究

目的研究黄药子醇提物对人胃癌细胞增殖、克隆形成和迁移能力的影响。方法制备黄药子醇提物,根据细胞培养液所含黄药子醇提物的不同浓度,将实验分为黄药子醇提物高浓度组（120 mg/L）、低浓度组（60 mg/L）和对照组（等量无菌水）。通过体外MTT、克隆形成实验、细胞迁移实验,分别检测黄药子醇提物对人胃癌细胞系MGC803增殖、克隆形成和迁移能力的影响。结果与对照组相比,黄药子醇提物高浓度组和低浓度组胃癌细胞体外增殖速度明显减慢（培养第2-6天时,F分别为29.130、21.864、67.826、36.015、43.656,均P〈0.01）、平板克隆形成率明显减少（F=11.918,P〈0.01）,黄药子醇提物高浓度组的细胞迁移能力明显降低（F=4.258,P〈0.05）。结论黄药子醇提物可以显著抑制胃癌细胞增殖、克隆形成和迁移能力,具有潜在的抑制胃癌细胞转移的能力。