糖基化终产物促进U937巨噬细胞高密度脂蛋白受体的表达

目的 研究糖基化终产物对U937巨噬细胞高密度脂蛋白受体表达的影响。方法 将糖基化终产物与诱导分化4 8h后的U937细胞共同孵育,用免疫细胞化学法和半定量逆转录聚合酶链反应检测细胞清道夫受体BI蛋白及mRNA的表达。结果 免疫细胞化学法检测10 0、2 0 0和4 0 0mg/L糖基化终产物刺激后U937巨噬细胞清道夫受体BI蛋白表达的平均积分光密度值分别为18.94±3.5 6、2 7.86±4 .39及35 .0 8±2 .37,较牛血清白蛋白组明显升高(13.76±3.74 ,P <0 .0 5 ) ;4 0 0mg/L糖基化终产物作用6、12、2 4及4 8h后,细胞清道夫受体BI表达的平均积分光密度值分别为16 .87±5 .6 5、2 5 .6 8±6 .97、35 .0 8±8.37及39.6 8±9.37,较0h组明显升高(12 .0 2±3.4 7,P <0 .0 5 )。半定量逆转录聚合酶链反应结果显示,4 0 0mg/L牛血清白蛋白及10 0、2 0 0和4 0 0mg/L糖基化终产物刺激后细胞清道夫受体BImRNA相对表达量分别是0 .32±0 .0 3、0 .5 3±0 .0 5、0 .6 4±0 .0 4和0 .89±0 .0 5 ;4 0 0mg/L糖基化终产物作用0、6、12、2 4及4 8h后,U937巨噬细胞清道夫受体BImRNA相对表达量分别为0 .4 1±0 .0 1、0 .6 2±0 .0 5、0 .80±0 .0 8、0 .87±0 .0 5、1.2 4±0 .13。

人高密度脂蛋白受体CLA-1上调剂9179D的分离、结构鉴定和活性研究

目的从微生物代谢产物中分离能够上调人高密度脂蛋白受体(CLA-1)表达的新型活性化合物,并对其活性进行研究。方法应用已建立的CLA-1表达上调剂的模型,对阳性菌株链霉菌104A-9179发酵产物的活性成分进行分离纯化,获得活性化合物9179D;通过理化性质、质谱、紫外和核磁等波谱学数据进行结构鉴定;利用RT-PCR和Western Blot方法检测9179D对HepG2中CLA-1表达的影响;利用流式细胞仪检测其对小鼠巨噬细胞RAW264.7结合DiI-HDL的影响。结果从链霉菌104A-9179发酵产物中得到活性化合物9179D,并确定了其结构为曲占柳菌素D(Trichostatin D);9179D在CLA-1上调剂模型上的EC_(50)为46.02μmol/L,表达活性最高值为934%;9179D能增加HepG2中CLA-1的mRNA和蛋白表达;增加RAW264.7对DiI-HDL的结合。结论得到一个微生物来源的具有强的上调CLA-1的表达活性的化合物-9179D(曲古柳菌素D),属首次报道。

人高密度脂蛋白受体表达上调剂筛选模型的建立

目的 建立靶向人高密度脂蛋白受体基因(CLA-1)调控序列的药物筛选模型,为筛选人高密度脂蛋白受体表达上调剂奠定基础。方法 PCR扩增CLA-1上游调控序列,构建重组报告基因质粒pGL3-CLAP,瞬时转染人肝癌细胞BEL-7402,通过检测荧光素酶报告基因表达水平的变化筛选人高密度脂蛋白受体表达上调剂。结果 建立了CLA-1表达上调剂筛选模型,pGL3-CLAP与阴性对照pGL3-Basic组间差异显著(P<0.001),变异系数(CV)不超过10％。对124个化合物和800个微生物次级代谢产物进行初筛和复筛,1个化合物和3个菌株发酵液为阳性。结论 该系统可有效地应用于人高密度脂蛋白受体表达上调剂的高通量筛选。

高密度脂蛋白受体(SR-BI)和胆固醇逆转运

近十几年来对小鼠的B类I型清道夫受体 (SR BI)的研究 ,发现它是一种高亲和力的高密度脂蛋白受体 ,主要在肝脏和类固醇源性组织中表达。该受体能介导胆固醇酯的选择性吸收 ,在高密度脂蛋白 (HDL)的代谢和胆固醇的“逆转运”中起重要作用。动物实验证明SR BI的表达可减少动脉粥样硬化的发生。如果SR BI对人有相似的作用 。

化痰活血方拆方对高脂血症大鼠肝脏高密度脂蛋白受体基因表达的影响

目的:拆方观察化痰活血方中化痰与活血药对高脂血症大鼠肝脏高密度脂蛋白受体(SR-BⅠ)基因表达的影响,从分子水平明确该方防治高脂血症的有效作用部位。方法:Wistar大鼠50只,随机分为空白组、模型组、全方组、化痰药组、活血药组,采用高脂饲料建立大鼠高脂血症模型。连续灌胃给药30 d后,应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定各组大鼠肝脏SR-BImRNA水平。结果:模型组大鼠肝SR-BImRNA表达明显低于空白组,化痰活血全方组和化痰药组大鼠肝SR-BImRNA水平明显高于模型组,而活血药组和模型组无明显差异,结论:化痰药是化痰活血方中促进高脂血症模型大鼠肝脏SR-BImRNA水平表达的主要组分,因而也是调节脂质代谢的主要作用部位。

人高密度脂蛋白受体CLA-1表达上调剂4776B和4776C的分离、结构鉴定及生物活性研究

目的从微生物代谢产物中筛选和分离能够上调人高密度脂蛋白受体(CLA-1)表达的新型活性化合物。方法应用本实验室已经建立的CLA-1表达上调剂的高通量筛选模型,从6000多株微生物中筛选出8株能使CLA-1表达上调的阳性菌株。对其中一株阳性菌株放线菌04-4776发酵产物的活性成分进行活性跟踪分离纯化,从中获得CLA-1表达上调的化合物4776B和4776C,并测定了化合物的理化特性和波谱学数据及相关的生物活性。结果通过理化性质、质谱、紫外和核磁等波谱学数据的分析,确定了化合物4776B和4776C的结构;4776B和4776C对CLA-1的上调率分别在2.08和3.26μm ol/L时达到最大,与对照相比分别上调了60%和78%。结论放线菌04-4776产生的两个活性化合物分别与文献报道的红车轴草素和(9R,13S)-7-脱氧-13-二氢道诺霉素酮结构一致;两个化合物均具有强的上调CLA-1的表达活性,属首次报道。

高密度脂蛋白受体SR-BI对细胞内胆固醇外流的影响

胆固醇逆向转运（RCT）是清除内源性胆固醇的重要途径,该过程指高密度脂蛋白（HDL）将多余的胆固醇从外周组织、细胞（包括泡沫细胞）通过载体血浆脂蛋白转运至肝脏,以胆酸的形式排泄或形成类固醇激素等再循环的过程。主要包括细胞胆固醇的流出、酯化及清除,

抗动脉粥样硬化的新靶位─高密度脂蛋白受体SR-BI

B族I型清道夫受体 (SR BI)是惟一确认的高密度脂蛋白 (HDL)受体 ,介导胆固醇逆转运的起始和终止步骤 ,即外周组织中胆固醇的流出和肝脏及类固醇激素生成组织中胆固醇的选择性摄取 ,在胆固醇逆转运中起着关键作用。不同组织中SR BI的表达调控研究表明其对心血管疾病具有明显保护作用 ,可以作为筛选新型抗动脉粥样硬化药物的新型分子靶位或用于动脉粥样硬化的基因治疗。

橄榄降脂胶囊对高脂血症大鼠血脂及其肝脏高密度脂蛋白受体基因表达的影响

目的在基因水平上探讨中药橄榄降脂胶囊的降脂作用机制,为中药新药开发提供科学依据。方法将48只雄性SD大鼠根据血总胆固醇水平随机分为:正常组、模型组、血脂康组,及橄榄降脂胶囊低、中、高剂量组,每组各8只。正常组普通饲料喂养,其余各组予高脂饲料,自由饮水。模型组灌胃生理盐水,血脂康组灌胃血脂康胶囊0.09g/kg,橄榄降脂胶囊低、中、高剂量组分别灌胃橄榄降脂胶囊0.675g/kg、1.35g/kg、2.7g/kg。1次/d,连续给药6周。采用酶法检测大鼠血清TC、TG;采用磷钨酸-镁沉淀法检测HDL-c、LDL-c,RT-PCR法测定高脂血症大鼠肝脏高密度脂蛋白受体基因表达。结果模型组大鼠血清胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇均显著高于正常组,高密度脂蛋白胆固醇显著低于正常组(P<0.05)。模型组大鼠肝SR-B1mRNA表达降低,与正常组比较P<0.05。经橄榄降脂胶囊治疗后肝SR-B1mRNA表达升高与模型组比较P<0.05,与正常组P>0.05。结论橄榄降脂胶囊可调节脂质代谢紊乱、治疗高脂血症,其作用机理可能与上调肝SR-B1mRNA表达水平有关。

糖基化终产物AGEs对U937巨噬细胞高密度脂蛋白受体(SR-BI)蛋白表达的影响(英文)

目的研究诱导分化及糖基化终产物对人单核/巨噬细胞(U937细胞)高密度脂蛋白受体(SR-BI)蛋白表达的影响。方法U937细胞经PMA诱导分化,并将不同浓度或同一浓度AGEs与诱导分化48h后的U937细胞共同孵育,用免疫细胞化学法和Western印迹法检测SR-BI蛋白的表达。结果诱导分化后U937细胞SR-BI表达在24、48h逐渐升高,72h下降;100、200和400mg/LAGEs刺激后细胞表面SR-BI蛋白表达量分别是BSA组的1.44、2.38和2.77倍(P<0.05);400mg/L的AGEs作用6、12、24、48h后,U937巨噬细胞SR-BI蛋白表达量分别为0h的1.38、2.49、3.76和4.25倍(P<0.05)。结论诱导分化24及48hSR-BI蛋白表达逐渐增加,而分化72h蛋白表达下降;AGEs可增加U937巨噬细胞SR-BI蛋白表达且呈浓度和时间依赖性。

糖基化终产物对U937巨噬细胞高密度脂蛋白受体蛋白表达的影响

目的 研究诱导分化及糖基化终产物 (AGEs)对人单核 /巨噬细胞 (U937细胞 )高密度脂蛋白受体 (SR BI)蛋白表达的影响 ,探讨AGEs和巨噬细胞SR BI在动脉粥样硬化中的作用。方法 U937细胞经PMA诱导分化 ,并将不同浓度或同一浓度AGEs与诱导分化 48h后的U937细胞共同孵育 ,用免疫细胞化学法和Western印迹法检测SR BI蛋白的表达。结果 诱导分化后U937细胞SR BI表达在 2 4、48h逐渐升高 ,72h下降 ;1 0 0、2 0 0和 40 0 μg/mlAGEs刺激后细胞表面SR BI蛋白表达量分别是BSA组的 1 44、2 38和 2 77倍 (P <0 0 5) ;40 0 μg/ml的AGEs作用 6、1 2、2 4、48h后 ,U937巨噬细胞SR BI蛋白表达量分别为 0h的 1 38、2 49、3 76和 4 2 5倍 (P <0 0 5)。结论 AGEs可增加U937巨噬细胞SR BI蛋白表达且呈浓度和时间依赖性。

Ang-(1-7)和Ang Ⅱ对肌源性泡沫细胞高密度脂蛋白受体、ATP结合盒转运子A1表达的影响

目的观察血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对肌源性泡沫细胞高密度脂蛋白受体(SRBI)、ATP结合盒转运子A1(ABCA1)表达的影响。方法在小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)中加入100 mg/L的ox LDL,培养72 h,使VSMC转化为泡沫细胞,建立肌源性泡沫细胞模型后随机分为:control组,AngⅡ组,Ang-(1-7)组,Ang-(1-7)+AngⅡ组、AngⅡ+Ang-(1-7)+A-779组及A-779组。A-779为Ang-(1-7)受体特异性阻滞剂。分别用Western blot及RT-PCR法检测SR-BI mRNA、ABCA1 mRNA及其蛋白的表达。结果与control组相比,AngⅡ组SR-BI mRNA、ABCA1 mRNA及其蛋白的表达均明显减弱(P<0.05),与AngⅡ组比较,Ang-(1-7)+AngⅡ组SR-BI mRNA、ABCA1 mRNA及其蛋白的表达增加(P<0.05);与Ang-(1-7)组比较,AngⅡ+Ang-(1-7)+A-779组SR-BI mRNA、ABCA1mRNA及其蛋白的表达减弱(P<0.05),但与AngⅡ组比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论 AngⅡ可抑制肌源性泡沫细胞SR-BI、ABCA1的表达,而Ang-(1-7)通过其特异性MAS受体可拮抗AngⅡ的上述作用。

氨氯地平联合辛伐他汀对高脂饮食兔肝脏高密度脂蛋白受体的影响

目的探讨高脂饮食及氨氯地平、辛伐他汀对兔肝脏高密度脂蛋白受体的影响。方法日本长耳兔50只随机分为对照组、模型组、氨氯地平组、辛伐他汀组、联合用药组,各10只。分别给予普通饲料及高脂饲料并加用药物。于实验开始、24周末测血脂水平,测定肝脏高密度脂蛋白受体(HDLR)的表达。结果模型组兔血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。氨氯地平组TC、TG、LDL-C高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。辛伐他汀组TC、TG、LDL-C降低,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)升高,较模型组差异具有统计学意义(P<0.01)。联合用药组TC、LDL-C、TG降低,HDL-C升高,较对照组差异有统计学意义(P<0.05),较模型组差异具有统计学意义(P<0.01)。结论氨氯地平不影响血脂水平,增加肝脏HDLR表达;辛伐他汀可明显调节血脂,增加肝脏HDLR表达;辛伐他汀、氨氯地平联合应用较单药更明显增加肝脏HDLR表达。

菊藤胶囊对高脂血症大鼠血脂及肝脏高密度脂蛋白受体基因表达的影响

目的:观察菊藤胶囊对高脂血症大鼠血脂及肝脏高密度脂蛋白受体(SR-BI)基因表达的影响,从分子水平上探讨其作用机制,为其临床应用提供依据.方法:将60只雄性SD大鼠以普通饲料喂养1 wk后测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)基础值.根据TC水平随机分为:空白对照组、模型组、血脂康组及菊藤胶囊低、中、高剂量组,每组各10只.空白对照组普通饲料喂养,其余各组予高脂饲料;自由饮水.模型组灌胃生理盐水,血脂康组灌胃血脂康胶囊0.090 g/kg,菊藤胶囊低、中、高剂量组分别灌胃菊藤胶囊1.175,2.350,4.700 g/kg·1次/d,连续给药6 wk.采用酶法检测大鼠TC,TG,HDL-C和LDL-C;分别以RT-PCR技术和Western Blot法,对肝SR-BI在mRNA及蛋白水平进行检测.结果:模型组大鼠血TC,TG,LDL-C均显著高于空白对照组(P<0.05),HDL-C显著低于空白对照组(P<0.05),肝SR-BI mRNA及SR-BI蛋白含量与空白对照组比较显著降低(P<0.05).血脂康组及菊藤胶囊中、高剂量组大鼠血TC,TG,LDL-C均显著低于模型组(P<0.05),HDL-C显著高于模型组(P<0.05),菊藤胶囊高剂量组与血脂康组比较差异显著(P<0.05),血脂康组及菊藤胶囊中、高剂量组大鼠肝SR-BI mRNA及SR-BI蛋白含量与模型组比较显著升高(P<0.05).结论:菊藤胶囊可明显降低TC,TG,LDL-C,升高HDL-C,调节脂质代谢紊乱、治疗高脂血症,其作用机制可能与上调肝SR-BI的表达相关.

人高密度脂蛋白受体胞外片段在甲醇酵母中的表达

高密度脂蛋白受体在胆固醇逆向运输中起重要作用 ,并且其可以做为动脉粥样硬化的新型治疗靶点。为了构建以竞争性受体 -配体相互作用为基础的体外高通量药物筛选模型 ,在甲醇酵母中表达了高密度脂蛋白受体胞外结构域。应用RT -PCR方法从人肝癌Bel- 740 2总RNA中扩增了编码高密度脂蛋白受体胞外结构域的基因片段 ,此基因片段经测序证实后亚克隆至甲醇酵母分泌表达质粒pPIC9K中。经测序验证读码框正确后将重组质粒电转至PichiapastorisGS115中。应用PCR方法确定目的基因的整合和Mut+ 表型。重组菌株用 1%甲醇诱导 5天后取发酵上清进行SDS -PAGE和Westernblot分析。结果表明 ,在分子量约 64 5kDa处有sHDLR表达。随后应用DiI-AcLDL为配体证明了表达的sHDLR具有结合其配体AcLDL的生物学活性。

决明子和山楂组分配伍对兔肝细胞膜高密度脂蛋白受体活性的影响

目的:观察决明子蒽醌苷与山楂总三萜酸配伍对实验性高血脂症兔血清低密度脂蛋白胆固醇(low densit ylipoprotein-cholesterol LDL-C)及肝细胞膜高密度脂蛋白受体(high density lipoprotein receptor HDLR)活性的影响。方法:雄性新西兰兔高脂饲养2周形成实验性高血脂症,继续给予高脂饮食,然后采用均匀设计法,分别给予决明子和山楂有效部位不同的比例配伍灌服,4周后高脂给量减半,继续服药至6周,免疫比浊法测定血清LDL-C变化,以125I标记的兔HDL3作为配体,用放射受体分析法对肝细胞膜HDLR活性进行测定。结果:决明子蒽醌苷与山楂总三萜酸按1∶2.63配伍,可使血清LDL-C含量明显降低(P<0.01),肝细胞膜HDLR活性增加(P<0.05)。结论:决明子蒽醌苷与山楂总三萜酸最佳配比降低高血脂兔血清LDL-C的作用明显强于单一组分及原药对配伍,对肝细胞膜HDLR的影响呈现以受体数目显著增加为特征的受体结合活性升高。

B族I型清道夫受体研究进展

B族I型清道夫受体(SR-BI)是第一个在分子水平上得到证实的HDL受体,能与HDL以高亲和力结合,参与HDL胆固醇酯的选择性摄取,并通过多种机制对动脉粥样硬化的发生起保护性作用。本文主要对SR-BI的分子结构、表达调控以及在胆固醇选择性摄取和动脉粥样硬化保护方面进了阐述。

动物脂肪代谢与控制

脂肪代谢受多种因素影响 ,体内的某些代谢途径介入脂肪组织合成与分解的调控。众多研究表明 ,高密度脂蛋白 -胆固醇在高密度脂蛋白 -受体的介导下使细胞内源性胆固醇合成下降 ,具有清除细胞内脂肪的作用 ;同时在 β-肾上腺素能受体和 Ca2 +的参与下 ,加快脂肪进入 β-氧化和三羧酸循环的速度 ,最终使脂肪分解代谢增强 ;上述整个过程都有神经和内分泌系统的参与 ,如肾上腺素能受体、生长激素、胰岛素。