高尔基体基质蛋白130、14-3-3ζ、整合素α3在中、低分化胃癌组织的表达及意义

目的:检测高尔基体基质蛋白130(Golgi matrix protein 130,GM130)、14-3-3 zeta(14-3-3ζ)、整合素α3(integrin alpha3,Integrinα3)在正常胃组织和中、低分化胃癌组织中的表达,并由此探讨其与胃癌的关系。方法:运用免疫组织化学检测(strept avidin-biotin complex,SABC)法分别检测临床收集的84例胃癌患者的胃癌组织和正常胃组织(距癌肿边缘5 cm以上的胃组织)GM130、14-3-3ζ、Integrinα3的表达情况,并结合临床病理资料进行分析;用RT-PCR和Western blot分别检测42例胃癌(低分化胃癌24例,中分化胃癌18例)和42例正常胃组织GM130、14-3-3ζ、Integrinα3的m RNA和蛋白表达情况。结果:(1)GM1301、14-3-3ζ2、Integrinα33在胃癌组织中的表达阳性率分别为88.1%、90.5%、95.2%,明显高于上述各指标在正常胃组织上的阳性表达率(52.4%、27.4%、42.9%);低分化胃癌组上述3个指标的表达较中分化胃癌组高,且2组间差异有统计学意义(P1=0.000、P2=0.007、P3=0.000)。Spearman等级相关性分析显示,胃癌中GM130、14-3-3ζ、Integrinα3之间表达呈两两正相关(P<0.05)。(2)GM130、14-3-3ζ、Integrinα3的表达均与年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤直径、肿瘤浸润深度、有无淋巴结转移无关(P>0.05);而与肿瘤病理组织学分级及临床分期有关(P<0.05)。(3)RT-PCR及Western blot结果显示GM130、14-3-3ζ、Integrinα3 m RNA和蛋白质的表达在胃癌组较正常胃组织组高,低分化胃癌组较中和分化胃癌组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:GM130的异常表达可能在胃癌的发生发展中发挥重要作用。

高尔基体基质蛋白130、14-3-3ζ和整合素β3在卵巢上皮恶性肿瘤组织中的表达及其临床意义

目的:探讨高尔基体基质蛋白130(Golgi matrix protein 130,GM130)、14-3-3ζ和整合素β3在卵巢上皮恶性肿瘤组织中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组织化学法检测49例卵巢上皮恶性肿瘤、30例卵巢上皮良性肿瘤和23例正常卵巢上皮组织中GM130、14-3-3ζ和整合素β3的表达,RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测卵巢上皮恶性肿瘤、卵巢上皮良性肿瘤和正常卵巢上皮组织中GM130、14-3-3ζ和整合素β3 mRNA及蛋白的表达。结果:GM130、14-3-3ζ和整合素β3在卵巢上皮恶性肿瘤组织中的阳性表达率明显高于卵巢上皮良性肿瘤和正常卵巢上皮组织,差异有统计学意义(P<0.05)。卵巢上皮恶性肿瘤组织中GM130与14-3-3ζ的表达、14-3-3ζ与整合素β3的表达和GM130与整合素β3的表达均呈正相关(r=0.517,P<0.05;r=0.415,P<0.05;r=0.384,P<0.05)。GM130、14-3-3ζ和整合素β3的表达与卵巢上皮恶性肿瘤患者的临床分期和组织分化程度有关(P<0.05),与年龄、肿瘤大小和病理类型无关(P>0.05)。卵巢上皮恶性肿瘤组织中GM130、14-3-3ζ和整合素β3 mRNA及蛋白的表达水平明显高于卵巢上皮良性肿瘤和正常卵巢上皮组织(P<0.05)。结论:GM130、14-3-3ζ和整合素β3在卵巢上皮恶性肿瘤中的高表达可能在其恶性进程中发挥重要作用,GM130有望成为判断卵巢癌患者预后的指标及治疗靶点。

顺式高尔基体蛋白GM130影响小鼠卵母细胞减数不对称分裂的研究

目的确定顺式高尔基体蛋白(GM130)对小鼠卵母细胞纺锤体迁移及减数不对称分裂的影响。方法免疫荧光法检测GM130在小鼠卵母细胞的定位,活细胞工作站延时拍摄系统捕捉纺锤体在降调GM130表达后的的动态变化。结果降调GM130的表达后,第一极体排出率下降,在排出的极体中,大极体的比率升高;但对微丝网络及微丝帽的影响不明显。向卵母细胞内注射β5-tubulin--GFP mRNA和GM130特定的寡聚核苷酸(morpholino,MO)的混合物后,用活细胞工作站延时拍摄系统证实了降调GM130会影响卵母细胞纺锤体的迁移,纺锤体单极拉长,并能与该侧的皮质接触,产生胞质分裂环,导致大极体排出。若拉长的纺锤体尚不能与皮质接触,则细胞阻滞在分裂中期I(MI期),没有极体排出。另外,降调GM130的表达也会影响磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶1/2(p-MEK1/2)在纺锤体极的定位,用丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)的抑制剂U0126处理MI期的卵母细胞则发现GM130不再在纺锤体两极聚集,而是散在分布于胞浆。结论 GM130可能参与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在小鼠卵母细胞纺锤体迁移及不对称分裂中起重要作用。

高尔基体基质蛋白GM130的研究现状与分析

GM130蛋白参与高尔基体结构的维持,并在有丝分裂过程中主导高尔基体装置的拆卸和组装。当GM130减少的细胞进入有丝分裂后,形成多极纺锤体,在中期停止并死亡。GM130还参与糖基化的控制,细胞周期变化,细胞极化和细胞定向迁移。它还参与细胞自噬与凋亡。GM130与肿瘤的发生有关。它的减少显著降低CVB3病毒的复制。GM130失活可以引起雄性模型小鼠的不育。可见,它是一种显著影响动物多种生命活动的重要蛋白。

高尔基体基质蛋白GM130的研究现状

GM130蛋白参与高尔基体结构的维持,并在有丝分裂过程中主导高尔基体装置的拆卸和组装。当GM130减少的细胞进入有丝分裂后,形成多极纺锤体,在中期停止并死亡。GM130参与糖基化的控制,细胞周期变化,细胞极化和细胞定向迁移,还参与细胞自噬与凋亡。GM130与肿瘤的发生有关,它的减少显著降低CVB3病毒的复制。GM130失活可以引起雄性模型小鼠的不育。可见,它是一种显著影响动物多种生命活动的重要蛋白。

GM130通过14-3-3ζ对卵巢癌细胞增殖的影响及机制研究

目的探讨高尔基体基质蛋白130(GM130)通过14-3-3ζ对卵巢癌细胞增殖的影响及可能机制。方法采用免疫组化法检测在20例正常卵巢上皮组织和42例卵巢上皮恶性肿瘤中GM130和14-3-3ζ的表达,分析二者相关性。采用Western blot和RT-PCR法检测卵巢癌SKOV3/A2780细胞株GM130和14-3-3ζ蛋白及其mRNA表达情况,筛选出高表达细胞株。采用免疫荧光染色法检测GM130与14-3-3ζ在卵巢癌细胞中的共表达情况。将设计好的重组表达质粒shRNA-GM130片段稳转进入卵巢癌细胞中,采用Western blot和RT-PCR筛选出降低GM130的最佳片段。细胞分为三组:空白组(WT)、对照组(NC)、低表达组(313),采用CCK法和流式细胞术分别检测各组卵巢癌细胞生殖情况及周期变化情况,采用Western blot法检测各组14-3-3ζ、GRASP65、P115及增殖相关蛋白表达水平。结果GM130和14-3-3ζ在卵巢恶性肿瘤组织中的表达水平高于正常卵巢组织(P<0.001)。在卵巢恶性肿瘤组织中,GM130和14-3-3ζ呈正相关关系(r=0.873,P<0.001)。GM130蛋白及其mRNA在SKOV3细胞中的表达量高于A2780细胞(P<0.05),14-3-3ζ蛋白及其mRNA在SKOV3细胞和A2780细胞中比较差异无统计学意义(P>0.05)。后续实验选用SKOV3细胞。免疫荧光共定位染色显示,GM130与14-3-3ζ主要在胞质表达,前者近核膜部分呈堆叠样表达量较高,后者胞核中表达较少,二者可能存在共定位关系。转染313组片段后,对GM130的抑制效果最好。转染质粒313组细胞增殖能力降低,细胞在G1期阻滞的数量增多,G2期阻滞数量减少,S期阻滞的细胞数量稍减少,GM130、14-3-3ζ、P115、Cyclin A、Cdc25A蛋白相对表达水平降低,P21蛋白相对表达水平升高(P<0.05)。结论抑制GM130可抑制卵巢癌细胞增殖,其机制可能与抑制14-3-3ζ表达,影响卵巢癌细胞周期有关。

HT22细胞氧糖剥夺再灌注及Grasp65过表达干预后高尔基体的形态变化及其可能机制研究

目的探讨HT22细胞氧糖剥夺再灌注及Grasp65过表达干预后高尔基体的形态变化及其可能机制。方法利用小鼠海马神经元细胞系HT22为研究对象,HT22细胞经氧糖剥夺再灌注损伤及Grasp65过表达干预后,采用MTT法检测细胞存活率;Hoechest33258荧光染色法评估细胞凋亡;并应用细胞免疫荧光技术观察高尔基体的形态;应用Western blot技术检测GM130和GAAP蛋白的表达。结果氧糖剥夺再灌注可导致HT22细胞的活性显著降低(P<0.05),凋亡率显著增高(P<0.05);并可导致高尔基体形态的异常,随着再灌注时间的延长,高尔基体逐渐发生碎裂,尤其以再灌注12 h和24 h最为明显;GM130、GAAP的表达水平在氧糖剥夺再灌注后出现下降,特别是在再灌注12 h、24 h后出现了显著下降(P<0.05)。过表达Grasp65后,HT22细胞在氧糖剥夺再灌注所致高尔基体碎裂出现减少(P<0.05),碎裂程度减轻,同时GM130和GAAP的表达均显著增加(P<0.05),HT22细胞的存活率大大提高(P<0.05),凋亡率显著降低(P<0.05)。结论缺血再灌注损伤的细胞模型中,同样发生了高尔基体的碎裂;过表达Grasp65可以减轻氧糖剥夺再灌注损伤所致的高尔基体碎裂,并可以减少HT22细胞的凋亡,其机制可能与上调GM130和GAAP的表达有关。

外源性精胺抑制高尔基体应激减轻高糖诱导的心肌损伤

目的:观察糖尿病心肌病(DCM)是否有高尔基体应激(GAS)参与及外源性精胺心肌保护作用是否与调控GAS有关。方法:60只Wistar大鼠随机分为正常对照组(Control),糖尿病组(T1D,STZ 60 mg/kg一次性腹腔注射)和精胺组(T1D+Sp,精胺5 mg/(kg·d)腹腔注射),饲养12周。H9C2系大鼠心肌细胞随机分为正常对照组(Control,10%的FBS-DMEM培养)、高糖组(HG,10%FBS-DMEM+40 mmol/L葡萄糖)和精胺组(HG+Sp,10%FBS-DMEM+40 mmol/L葡萄糖+5μmol/L精胺)。ELISA检测大鼠血清心肌肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白T(cTnT);Western blot测定高尔基体蛋白GOLPH3,GM130以及Cleaved Caspase3蛋白表达;免疫荧光检测GOLPH3细胞定位。结果:动物模型中,与正常组相比,糖尿病组大鼠血糖,血清心肌酶CK-MB和cTnT显著升高明显升高;体重,射血分数(EF)显著降低;心肌超微结构损伤明显(肌丝断裂,润盘消失等);同时GOLPH3和Cleaved Caspase3表达上调,GM130表达下调。细胞模型与大体结果一致,免疫荧光显示高尔基体出现应激性碎片化。外源性精胺处理可显著干预上述改变。结论:给予外源性精胺对糖尿病,诱导的心肌损伤具有干预作用,其机制与减轻高尔基体应激有关。

CVB3损伤HeLa细胞高尔基体结构的机制研究

目的研究CVB3损伤HeLa细胞高尔基体结构的机制,为进一步探讨CVB3的致病机制奠定基础。方法采用MOI为5的CVB3感染HeLa细胞,免疫荧光双标法检测病毒感染后不同时间点VP1和GM130在细胞中的定位情况,观察细胞高尔基带的变化;同时,选择CVB3感染后不同时间点收集细胞,Bradford法蛋白定量后,Western blot测定VP1、GM130和GRASP65蛋白的表达变化。结果正常HeLa细胞中GM130和GRASP65免疫荧光呈带状分布,高尔基体结构正常;而CVB3病毒感染HeLa细胞3h后,GM130的荧光呈现散点状分布,高尔基体结构损伤。与此同时,GM130和GRASP65蛋白表达量逐渐下降;而VP1蛋白表达量持续上升,且6h后一直维持在较高水平。结论 CVB3感染引起HeLa细胞蛋白GM130和GRASP65表达量下调,导致GM130和GRASP65荧光带弥散,高尔基带断裂,这可能是CVB3感染导致宿主细胞高尔基体结构损伤的机制之一。

高尔基体基质蛋白GM130的生物学功能研究进展

GM130是第一个被报道的能够调控高尔基体结构维持的基质蛋白,其相关生物学功能研究已经积累了大量的成果,证实了GM130在细胞中涉及多种生物学功能,包括囊泡运输、糖基化修饰、微管发生、有丝分裂、细胞凋亡、自噬、细胞极性和定向迁移以及溶酶体功能维持等等。目前对GM130的生物学功能的研究多数是在细胞水平进行的,得到验证的生理功能还较少。该文旨在总结以往对GM130生物学功能的研究,为GM130功能异常相关的疾病检测和治疗提供理论依据。

GM130对胃癌细胞O-糖基化及细胞粘附能力的影响

目的:初步探讨沉默高尔基体基质蛋白130(golgi matrix protein 130,GM130)基因对胃癌细胞MKN-45 O-糖基化及细胞粘附能力的影响。方法:通过si RNA干扰胃癌细胞中GM130的表达水平,用Lipofectamine 2000将GM130-si RNA转染入MKN-45细胞。实验分为GM130-si RNA组、阴性对照组和空白对照组。分别用q RT-PCR和Western blot检测转染后各组中GM130、N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(polypeptide N-acetylgalactosaminyl transferase 2,pp Gal NAc-T2)、核心1β3半乳糖基转移酶(core 1 synthase,glycoprotein-N-acetylgalactosamine 3-β-galactosyltransferase1,C1Gal-T1)、β-半乳糖α-2,3-唾液酸转移酶1(beta-galactoside alpha-2,3-sialyltransferase,ST3Gal-1)m RNA和蛋白表达的变化。应用凝集素流式细胞术检测3组细胞中α2,3唾液酸残基糖链结构的表达水平。肿瘤细胞与内皮细胞粘附实验及基质胶粘附实验检测细胞粘附能力。结果:q RT-PCR和Western blot结果显示GM130基因与蛋白水平明显受到抑制,表明转染成功;GM130-Si RNA组C1Gal-T1、ST3Gal-1的m RNA和蛋白表达水平均明显降低(P均<0.05),pp Gal NAc-T2在3组中无明显变化(P>0.05),α2,3唾液酸糖链结构的表达量降低(P<0.05),细胞粘附能力下降(P<0.05)。结论:在MKN-45细胞中,下调GM130后,可能通过下调C1Gal-T1、ST3Gal-1的表达影响胃癌细胞O-糖基化,降低肿瘤细胞粘附能力。

PRMT5 regulates Golgi apparatus structure through methylation of the golgin GM130

Golgi 仪器(GA ) 的维护结构和功能取决于 Golgi 矩阵蛋白质。象 golgin 和掌握家庭的成员的 phosphorylation 那样的 Golgi 蛋白质的 posttranslational 修正为决定 Golgi 建筑学是重要的。包括 golgin-84 的一些 Golgi 蛋白质也被知道是 methylated，但是 golgin methylation 的功能仍然保持不清楚。这里，我们证明蛋白质精氨酸 methyltransferase (PRMT5 ) 5 本地化到 GA 和形式建筑群，几个部件在拴住的 GA 带子形成和泡包含了。PRMT5 在 Golgi 带子形成与 PRMT5 原因缺点的 golgin GM130，和弄空交往。而且，在 GM130 的 PRMT5 甲醇化物 N 终端精氨酸，和如此的精氨酸 methylation 为 GA 显得批评带子形成。我们的调查结果揭示 GM130 的 PRMT5 依赖的精氨酸 methylation 由控制 GA 建筑学的维护的分子的机制。

丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的通过建立脑缺血再灌注损伤模型并以丹红注射液进行干预,观察损伤区域脑组织细胞形态学及高尔基体形态学变化,检测高尔基矩阵蛋白130(GM130)表达情况,探讨丹红注射液对脑缺血再灌注损伤保护作用的机制。方法健康成年SD大鼠72只,随机分为正常对照组(6只)、假手术组(6只)、缺血再灌注组(30只)和丹红干预组(30只),缺血再灌注组和丹红干预组根据缺血2 h后再灌注时间的长短分为6 h、24 h、48 h、72 h、7天共5个亚组,每个亚组6只。脑缺血再灌注模型成功后,丹红干预组从恢复再灌注开始(即缺血2 h后)腹腔注射丹红注射液(8 mL/kg,每天一次),直至各时间点处死;缺血再灌注组在相同时间点腹腔注射同等剂量生理盐水。结果形态学结果显示丹红干预7天组较其它各组皮质神经细胞存活数量明显增多,损伤程度最轻;在缺血再灌注7天组中,高尔基体形态发生明显受损改变,网状结构缺失,淡染,颗粒减少或消失,甚至有些出现断裂,而丹红干预7天组高尔基体形态基本正常。GM130表达随缺血再灌注时间的延长而递减,随丹红注射液干预时间的延长而递增,丹红干预7天组GM130表达明显高于其余各时间点组(P<0.05)。结论丹红注射液可能通过上调GM130表达而维持高尔基体稳定性,从而发挥神经保护作用。