甲醇酵母表达系统高拷贝数整合型表达载体的构建

以甲醇酵母（Ｈａｎｓｅｎｕｌａｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）表达系统的ＹＩｐ型表达载体ｐＪＦ５１为基础，通过引入宿主来源的一个ｒＤＮＡ随机顺序和由ＳＶ４０早期启动子控制的Ｇ４１８抗性基因（ｎｅｏ）及对野生型标记基因Ｈｐｌｅｕ２启动子大部分上游序列的缺失，构建了一个高拷贝整合型表达载体ｐＭＩＲＨ。有关转化、筛选和拷贝分析等试验结果表明，由ｐＭＩＲＨ可产生含高拷贝数载体的转化子，并可通过由ｌｅｕ２＋筛选和Ｇ４１８抗性筛选所组成的二级筛选方法富集这些含高拷贝数载体的转化子。有关完整ＤＮＡ和消化ＤＮＡＳｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析结果进一步表明，上述高拷贝数的载体以串联重复排列的方式整合于宿主基因组。