高效凝胶排阻色谱法测定牛血清白蛋白相对分子质量及其分布

建立了一种高效凝胶排阻色谱快速测定牛血清白蛋白的相对分子质量及其分布的方法。使用凝胶色谱仪，TSKgelG3000SWXL型（300mm×7．8mrn）高效凝胶排阻色谱柱，以0．05mol／L磷酸盐缓冲溶液（pH6．8）-0.3mol／L氯化钠溶液为流动相，流速为1mL／min，DAD检测器，检测波长为220nm，选择300-330nm作为参比波长，信号采集时间为15min。测得质控样牛血清白蛋白相对分子质量标准物质峰值相对分子质量的均值为7．160×10^4Da，与参考值的相对误差为7．76％，组间相对标准偏差为0．49％。采用该法对市售牛血清白蛋白样品的相对分子质量分布进行测试，组内相对标准偏差为0．004％-0．014％，组间相对标准偏差为1．89％。该法可以满足一般实验室对牛血清白蛋白样品的分子量分布测定的要求。

高效凝胶排阻色谱法测定大豆多肽相对分子质量分布及不确定度评估

采用高效凝胶排阻色谱法测定大豆多肽保健品的肽相对分子质量分布。通过优化标准物质的选择和流动相组成比例等测定条件，考察方法的日内和日间精密度。以相对分子质量标准物质制作标准曲线，对大豆多肽中100～1000分子量范围的多肽分布进行了测定，测定结果的扩展不确定度为9.2，测量结果可表示为（63．3±9．2）％。

高效凝胶排阻色谱法测定玉竹多糖分子量及其分布

采用高效凝胶排阻色谱法(HPGPC)测定了40份玉竹样品中多糖的分子量与分布,结合性状检查结果,分析了玉竹多糖分子量及其分布的质量控制作用。结果表明,所测样品的高效凝胶排阻色谱图大部分出现3个色谱峰,采用GPC软件计算其重均分子量(Mw)、数均分子量(Mn)及分子量分布指数D。峰1、峰2分子量存在稳定的区间,峰1的 Mw在50000~125000 Da,峰2 Mw在2500~5000 Da;D值均在1.02~1.56。性状不合格样品与合格样品存在差异。玉竹高效凝胶排阻色谱峰的数量和分子量及其分布,可以用于表征玉竹质量状况。

胰蛋白酶水解全酪蛋白反应过程中的色谱分析

将高效凝胶排阻色谱 (HPSEC)技术与水解度 (DH)概念相结合 ,对酪蛋白 胰蛋白酶水解体系的酶解反应过程进行色谱分析 ,得到定量表征复杂酶解反应进程和不同DH值时多样性酶解产物相对分子质量分布的二维图线 ;依据蛋白质结构信息 ,结合HPSEC实验谱图 ,对胰蛋白酶作用于酪蛋白时的酶解断裂位点进行剖析 ,初步推断反应历程 ,并得到理论酶解肽段的相对分子质量分布图及酶解物中活性多肽酪蛋白磷酸肽 (CPPs)肽谱。

酪蛋白酶解反应复杂产物的色谱定量分析

根据酪蛋白酶解产物的高效凝胶排阻色谱(HPSEC)定性分析结果,选取不同截留相对分子质量的超滤膜对酶解产物进行截分,制得 3种相对分子质量分布相对集中的区间组分;建立各组分峰面积与质量浓度之间的线性关系,由此定量计算不同反应时间的酶解产物中相应相对分子质量区间组分的质量浓度。研究表明,将膜分离方法与色谱分析相结合可实现对蛋白质、多肽等复杂体系相对精确的定量分析。

酶解反应与膜分离耦合连续制备酪蛋白磷酸肽

采用酶解反应与膜分离耦合新工艺连续水解全酪蛋白制备酪蛋白磷酸肽(CPPs)。考察了超滤膜对胰蛋白酶及底物溶液的截留效果;研究了初始底物质量浓度、初始酶质量浓度、反应体积、膜渗透通量等参数对反应器性能和反应转化率的影响规律;利用高效凝胶排阻色谱系统(HPSEC)对酶解产物进行检测分析;建立了酶膜反应器连续水解动力学模型,并对间歇与连续酶解过程进行比较分析,证明反应-分离耦合技术可使酶解效率及蛋白酶利用率大幅提高,并使产物得到调控与富集,为CPPs的酶法制备提供了一种更为有效的方法。

脲或盐酸胍溶液中变性溶菌酶复性过程中集聚体的研究

建立在蛋白质变性-复性三态模型的基础上,给出了一个描述在变性液中变性蛋白质复性时蛋白质浓度和其复性率的关系式.通过这个关系式,可以获得两个重要的描述蛋白质变性-复性体系特征的参数,一个是包含在一个集聚体分子中的变性蛋白质的分子数目n,另一个是蛋白质从原始态到形成集聚体过程中的表观集聚平衡常数K.以三种溶菌酶在脲和盐酸胍溶液中的变性-复性过程对此方程进行了验证,结果表明所给出的方程能够很好地描述三种溶菌酶在这两种变性液中的复性结果,三种溶菌酶在两种变性液中有形成二分子集聚体的趋势.变性溶菌酶在复性过程中的电泳和高效凝胶排阻色谱也同时能够监测到复性过程中集聚体的形成,并且监测结果与上述方程所得的结果一致.

基于蛋白质结构知识解析活性多肽的酶解制备反应行为(Ⅰ)酶解反应动态特性的3-D图形表征

提出了一种基于生物信息学知识与凝胶排阻色谱技术及图形拟合处理相结合的生物大分子复杂酶解反应行为定量分析、直观表征及模拟解析的新方法.研究中以全酪蛋白胰蛋白酶为模式水解体系,根据完整的HPSEC实验谱图,经分子模拟多肽结构,获得了大量产物多肽信息;绘制了表征酶解反应动态特性的3D曲面图与21/2维伪彩色图,并对拟合曲面方程进行了数学分析,为调控酶解反应、定向和定量地高效获取目标活性多肽提供了理论依据.

PEG和PEO混标法测定中空纤维超滤膜切割分子量方法的研究

采用聚乙二醇（PEG）和聚环氧乙烷（PEO）制成相对分子质量范围为2 000~230 000的混合截留物质溶液（混标）,在参考截留操作条件下,使用高效凝胶排阻色谱对中空纤维超滤膜切割分子量（MWCO）的检测方法进行了研究.该方法对同一样品测量结果的相对误差为5.1%~5.6%.参考截留操作条件为：温度（25±1）℃;跨膜压差（100±5）kPa;测试系统的雷诺数控制为1 600~1 800,膜面错流速度为1.4~2.3m/s;回收率不大于5%;模型组件中膜丝根数为20~30根、长度为170~180 mm;截留实验操作后要采用150kPa跨膜压差进行15min以上的反冲洗,使之纯水透过率恢复到初始纯水透过率的70%以上.

HPSEC法测定PEG和PEO相对分子质量及其分布

建立了一种高效凝胶排阻色谱（HPSEC）法测定聚乙二醇（PEG）、聚环氧乙烷（PEO）的相对分子质量及其分布的方法。采用系列PEG和PEO相对分子质量标准物质，色谱条件为：TSKGMPWXL13uM（300mm×7．8mm）色谱柱，流动相为0．2mol／LNaNO3（含0．02％w／vNaN3），流速为1mL／min，RID检测器，柱温箱温度40℃，信号采集时间为15min。测得标称重均分子量（Mw）为2．044×10^4和标称分子量分布系数（D）为1．06的PEG质控样的Mw和D分别为2．012×10^4和1．11，相对误差分别为1．6％和4．7％，测量重复性误差分别为0．24％和1．5％，测量准确度和精密度满足一般检测实验室的要求。采用该方法可以进行PEG和PEO样品的相对分子质量和相对分子量分布进行测定，从而对评定超滤膜的截留标准物质进行质量控制。

氧化甘油三酯聚合物含量在冷榨油鉴别中的应用研究

以氧化甘油三酯聚合物(TGP)为内源性指标依据,对多个不同品牌的冷榨芝麻油和不同来源的精炼芝麻油、特级初榨橄榄油和精炼橄榄油中TGP含量进行比较研究。结果发现,冷榨油与精炼油在TGP上有极显著性差异(P<0.01),冷榨油的TGP含量均小于0.15%,而精炼油中的TGP含量均大于1.0%,用TGP的含量来鉴别冷榨油和精炼油具有可行性。

压榨芝麻油和精炼芝麻油的氧化甘油三酯聚合物含量差异研究

现有的传统技术一般难以区分压榨芝麻油和精炼芝麻油。本研究以氧化甘油三酯聚合物为内源性指标依据,通过对多个不同品牌的正常压榨芝麻油和多个不同来源的精炼芝麻油进行比较研究,发现正常的压榨芝麻油和精炼芝麻油在氧化甘油三酯聚合物的含量上有极显著性差异(ρ<0.01),压榨芝麻油中氧化甘油三酯聚合物的含量一般均小于0.5%,其中氧化甘油三酯寡聚物均小于或等于0.1%,而精炼芝麻油中的氧化甘油三酯聚合物的含量均大于0.8%,其中氧化甘油三酯寡聚物均大于0.1%。用氧化甘油三酯聚合物的含量来鉴别压榨芝麻油和精炼芝麻油具有可行性。

头孢他啶原料及制剂的聚合物杂质分析

建立头孢他啶原料及制剂中聚合物杂质的分析方法。通过强制聚合法制备富含聚合物杂质的头孢他啶降解溶液;然后采用高效凝胶色谱法和柱切换-LC-MSn法对降解溶液中的聚合物杂质进行分离和结构鉴定;采用Phenomenex Gemini-C18型色谱柱,以0.02 mol·L-1磷酸盐缓冲液-甲醇-乙腈为流动相,进行梯度洗脱,建立RP-HPLC法分析头孢他啶聚合物,并进行方法学验证。结果表明高效凝胶排阻色谱法分离头孢他啶聚合物杂质时,部分小分子杂质与聚合物共出峰,方法专属性差、定量准确性差;RP-HPLC法分析头孢他啶聚合物杂质时,在25~45 min内检出头孢他啶二聚体及其衍生物、三聚体等4种聚合物杂质峰,专属性好、灵敏度高、方法耐用性好,因此RP-HPLC法可用于头孢他啶的聚合物杂质质控。头孢他啶降解溶液可作为分析头孢他啶聚合物的系统适用性溶液。

头孢克肟原料及制剂的聚合物杂质分析

建立头孢克肟原料及制剂中聚合物杂质的分析方法。通过强制聚合法制备富含聚合物杂质的头孢克肟降解溶液;然后采用高效凝胶色谱法和柱切换-LC-MSn法对降解溶液中的聚合物杂质进行分离和结构鉴定;采用Phenomenex Gemini-C18型色谱柱,以0.5%甲酸水溶液-0.5%甲酸乙腈溶液为流动相,进行梯度洗脱,建立RP-HPLC法分析头孢克肟聚合物,并进行方法学验证。结果表明,高效凝胶排阻色谱法分离头孢克肟聚合物杂质时,部分小分子杂质与聚合物共出峰,方法专属性差、定量准确性差;RP-HPLC法分析头孢克肟聚合物杂质时,能够检出2种头孢克肟二聚体、脱水二聚体等3种聚合物杂质峰,专属性好、灵敏度高、方法耐用性好,因此RP-HPLC法可用于头孢克肟的聚合物杂质的质量控制。头孢克肟降解溶液可作为分析头孢克肟聚合物的系统适用性溶液。

反复冻融对23价肺炎球菌荚膜多糖稳定性的影响

目的:考察反复冻融对23种血清型(1,2,3,4,5,6B,7F,8,9N,9V,10A,11A,12F,14,15B,17F,18C,19A,19F,20,22F,23F和33F)肺炎球菌荚膜多糖的影响。方法:各型多糖由-20℃至室温(约25℃)反复冻融1~3次,每个时间点抽取样品进行多糖抗原性(速率比浊法)、分子大小(HPSEC-MALLS/RI分析法)和特异性基团含量(糖醛酸、甲基戊糖、氨基己糖和O-乙酰基含量等4项指标)的检测,将检测结果与正常使用水平数据(冻融1次)进行比较分析。结果:反复冻融1~3次,23种血清型肺炎球菌荚膜多糖的抗原性、分子量分布、特异性基团含量均未发生显著变化(P>0.05或含量与初始值相差<5%)。结论:反复冻融3次以内不会导致荚膜多糖的降解,各型多糖均表现出较高的稳定性。