高效凝胶排阻色谱法测定胸腺肽粉针剂中α-1的含量

目的 建立高效凝胶排阻色谱法测定胸腺肽粉针剂中α-1的含量。方法 以GEL．SW2000为色谱柱，三氟醋酸-乙腈-水(0．1：45：54．9)为流动相，用追加法于214nm波长处检测。结果 制剂中胸腺肽α-1在2．5～100μg／ml范围内呈良好的线性关系(r=0．9999)，平均回收率为97．2％。RSD=1．2％。结论 方法简便、准确、灵敏度高、重复性好，可用于该制剂的质量控制。

中空纤维离心超滤-高效凝胶排阻色谱法测定青霉素V钾中蛋白杂质

建立了一种采用中空纤维离心超滤(HFCF-UF)-高效凝胶排阻色谱法(HPSEC)对青霉素V钾中的残留蛋白进行检测的方法。样品用HFCF-UF进行富集,采用HPSEC进行分析,色谱柱为TSK gel Super SW2000凝胶色谱柱(300×4.6mm,4μm),流动相为0.06mol/L NaCl-0.02mol/L NaH_2PO_4(pH=7.0),流速为0.3mL/min,紫外检测波长为220nm,柱温为室温。对照品牛血清白蛋白(BSA)在1.0~100.0μg/mL内线性关系良好(R2=0.999),回收率均大于87%,检测限为3.03ng/mL,经HFCF-UF富集处理后,富集倍数(EF)高达99倍。结果表明,该方法操作简便、结果准确、灵敏度高,为同类药物中的大分子蛋白检测提供了有效手段。

青稞提取物溶解性及分子量分布研究

采用沉淀法和指标成分溶解量法,分析青稞提取物在不同溶剂中的溶解率和β-葡聚糖的溶解量;采用高效凝胶排阻色谱法测定青稞醇不溶物和醇溶物中β-葡聚糖的分子量分布情况。结果表明,青稞提取物在水和10%乙醇中有较好的溶解性,乙醇体积分数越高溶解性越差,几乎不溶。青稞醇不溶物中β-葡聚糖分子量分布主要在6万~20万Da;青稞醇溶物中不同溶剂里的β-葡聚糖分子量分布差异较大。青稞提取物在水和10%乙醇中有较好的溶解性,青稞醇不溶物中β-葡聚糖分子量分布在6万~20万Da,青稞醇溶物分子量分布在1万~20万Da,为青稞提取物应用提供借鉴意义。

TSK柱测定盐酸头孢替安聚合物的方法学研究

目的建立盐酸头孢替安聚合物的检测方法。方法采用高效排阻凝胶色谱法,流动相p H7. 0的磷酸缓冲液[0. 005 mol/L磷酸氢二钠-0. 005 mol/L磷酸二氢钠(60∶40)-乙腈(92∶8)],λ=254 nm,色谱柱TSKgelG2000SWXL柱球状蛋白色谱用亲水硅胶(分子量范围1 000~10 000)为填充剂,7. 5 mm I. D.×300 mm,孔径10μm。结果不同批号盐酸头孢替安聚合物含量均超过70. 0%。结论该方法准确、灵敏,简便易行,且分析时间较短,可用于头孢替安聚合物的测定。

阿莫西林胶囊热降解聚合物杂质的2D-HPLC分析及质谱裂解机理探讨

目的:建立阿莫西林胶囊中热降解聚合物杂质的分析方法。方法:采用高效凝胶排阻色谱法(HPSEC法),使用Shimpack Bio Diol-60(4.6 mm×300 mm,3μm)二醇基高纯硅胶色谱柱,进样量为20μL并以254 nm为检测波长,进行阿莫西林和聚合物杂质的分离。通过优化HPSEC中流动相pH、缓冲盐浓度、有机相比例等色谱条件,结合阿莫西林13个杂质对照品,考察不同杂质的出峰规律。采用高效二维液相色谱法(2D-HPLC法),使用500μL样品环将HPSEC分离所得聚合物杂质通过中心切割转移到二维反相色谱中脱盐,二维采用质谱兼容流动相,高分辨质谱分析确认结构。结果:HPSEC法中流动相pH是影响阿莫西林与聚合物峰分离的关键因素。杂质对照品在HPSEC的保留时间研究表明色谱分离未严格按照相对分子质量大小的顺序进行。通过对聚合物杂质K和J的质谱裂解行为研究揭示了β-内酰胺类抗生素的一般裂解规律。2D-HPLC法对阿莫西林热降解溶液深入分析,主峰前聚合物峰在二维进一步分离出14个化合物,为阿莫西林二聚体、三聚体、四聚体及其异构体。结论:HPSEC与RP-HPLC结合组成的二维色谱高分辨质谱系统可作为更精准的聚合物发现的手段。

阿莫西林克拉维酸钾复方制剂中聚合物杂质的分析

目的:建立阿莫西林克拉维酸钾复方制剂中聚合物杂质的分析方法。方法:采用使用TSK-gel G2500PWxl色谱柱的高效凝胶排阻色谱法(HPSEC)进行色谱分离,采用二维高效液相色谱法(2D-HPLC法)对其分离的聚合物杂质进行定性,评价色谱系统的专属性;同时使用中国药典2015年版的RP-HPLC有关物质测定方法,通过扩展洗脱梯度范围进行聚合物分析;并比较2种分析方法对阿莫西林钠克拉维酸钾聚合物混合溶液中聚合物杂质的分离情况,确定理想的分析方法。结果:HPSEC法分析阿莫西林克拉维酸钾系统适用性对照品,共检出7个色谱峰;2D-HPLC法证明在HPSEC色谱图中阿莫西林开环二聚体与克拉维酸共出峰,阿莫西林闭环二聚体在阿莫西林主峰后出峰;HPSEC法分析实际样品,聚合物杂质峰展宽严重,无法准确进行定量分析。优化后的RP-HPLC法分析聚合物混合溶液,保留时间最长的聚合物杂质经LC-MS解析推断为阿莫西林闭环四聚体,各类聚合物杂质均在中国药典2015年版规定的梯度范围内被洗脱。结论:HPSEC法不能对阿莫西林克拉维酸钾中的聚合物杂质进行有效质控,中国药典2015年版二部收载的RP-HPLC有关物质方法分析聚合物杂质准确,专属性强。

不同来源银耳多糖的质量评价

目的:建立银耳多糖及其组成单糖的含量测定方法,分析不同产地和不同栽培方法的银耳中多糖含量差异,为银耳品质判定提供参考依据。方法:采用高效凝胶排阻色谱法联用多角度激光光散射和示差折光法(HPSEC-MALLS-RID)测定银耳多糖的含量及其相对分子质量分布;利用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生法结合高效液相色谱法对银耳多糖的组成单糖类型和比例进行分析。结果:不同产地段木银耳多糖的重均相对分子质量(Mw)在2.618×10^6~3.503×10^6 Da,质量分数处于307.12~609.06 g·kg^-1;不同产地代料银耳多糖的Mw在2.723×10^6~3.886×10^6 Da,质量分数处于366.38~647.37 g·kg^-1。银耳组成单糖主要由甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖和岩藻糖组成,段木和代料银耳多糖的上述组成单糖比例分别为4.4∶0.7∶1.0∶0.2∶1.4∶1.6和4.4∶0.8∶1.0∶0.1∶1.5∶1.5。39批银耳样品中多糖的组成单糖质量分数范围分别为甘露糖36.71~191.31 g·kg^-1,葡萄糖醛酸9.74~32.12 g·kg-1,葡萄糖10.46~76.10 g·kg^-1,半乳糖1.00~6.72 g·kg^-1,木糖16.73~70.54 g·kg^-1,岩藻糖17.16~68.20 g·kg^-1。结论:不同来源的银耳多糖及其组成单糖含量存在一定差异,通过建立的分析方法能够准确、稳定的测定其含量,对于银耳品质判定和质量控制具有重要参考价值。