凝胶排阻色谱-多角度激光散射法测定破伤风类毒素相对分子质量分布

为更好地表征精制破伤风类毒素(精制TT)相对分子质量分布的情况,利用凝胶排阻色谱与多角度激光散射仪联用法(SEC-MALS法)对精制破伤风类毒素分子质量及其分布进行了初步探索。通过优化实验参数,确定了最佳实验条件:流动相为0.2 mol/L磷酸盐缓冲液-1%异丙醇(pH=7.0)(PBS),样品浓度为2.0 mg/mL,柱温为25℃,流速为0.5mL/min。与聚丙烯酰胺凝胶电泳法相比,SEC-MALS法能够提供准确的精制TT单体分子质量测量值。此外,SEC-MALS法能够得到质均相对分子质量Mw、数均相对分子质量Mn以及二者的比值——多分散性Mw/Mn等重要物理参数,可以更加准确地反映精制TT溶液中单聚体、二聚体、多聚体分布状态,可以量化分子大小批间差异情况,有利于评价精制TT生产过程中的工艺调整或变化对蛋白单体收率的影响,当作为多糖蛋白结合疫苗常用的载体蛋白时,有利于以准确可量化的质量参数参与结合物的关键工艺控制。

高效凝胶色谱法同时测定眼用粘弹剂中透明质酸钠和硫酸软骨素钠的含量

样品经50mmol·L^(-1) NaH_2PO_4-0.1mol·L^(-1) NaCl混合溶液溶解后,首先采用凝胶渗透色谱与多角度激光光散射联用仪确定透明质酸钠和硫酸软骨素钠的分子量,依据分子量分布确定水凝胶色谱柱(OH pak SB-806HQ L012028与OH pak p8514-804L102028串联)为分离柱,OH pak SB-G G008146为保护柱,流动相采用50mmol·L^(-1) NaH_2PO_4-0.1mol·L^(-1) NaCl混合溶液,流量为0.5mL·min^(-1),以示差折光检测器进行测定。透明质酸钠和硫酸软骨素钠的质量浓度在0.10~1.0g·L^(-1)内与其峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)分别为0.051,0.059g·L^(-1)。加标回收率在83.3%~110%之间,测定值的相对标准偏差(n=6)小于2.2%。

糖谱法结合多元色谱分析比较铁皮石斛功能性多糖结构特征

目的:比较不同产地铁皮石斛功能性多糖结构特征,为其质量控制奠定基础。方法:高效凝胶色谱联用多角度激光散射和示差折光仪法(HPSEC-MALLS-RID法)用于测定多糖的重均相对分子质量、回旋半径及含量,色谱柱为TSK-GEL G5000 PWXL串联TSK Gel G3000PWXL,柱温35℃,流动相为9 mg·mL^(-1)氯化钠水溶液,流速0.5 mL·min^(-1)。气相色谱联用质谱法用于分析单糖组成及糖苷键,毛细管色谱柱为Agilent HP-5MS(30 m×0.25 mm×0.25μm),进样量2μL,用于单糖组成分析的程序升温条件为起始温度165℃,保持7 min,以5℃·min^(-1)升温至185℃,保持5 min,以4℃·min^(-1)升温至200℃,以20℃·min^(-1)升至280℃;用于糖苷键分析的程序升温条件为起始温度120℃,以5℃·min^(-1)升温至200℃,以8℃·min^(-1)升温至250℃,以20℃·min^(-1)升至280℃。基于荧光辅助凝胶电泳、高效薄层色谱-糖谱法分析功能性多糖部分酸水解和酶解产物特征,荧光辅助凝胶电泳采用200 V分离10 min,再调整电压至700 V分离40 min,凝胶在UV 365 nm下成像;TLC展开剂为正丁醇-异丙醇-水-醋酸(7∶5∶2∶1),显色剂为苯胺-二苯胺。结果:不同产地铁皮石斛多糖重均相对分子质量、回旋半径和含量分别为0.533×105~4.575×105、19.8~71.7 nm和6.28%~28.72%;铁皮石斛功能性多糖的单糖组成主要为(乙酰)甘露糖和葡萄糖,摩尔比(3.86~6.99)∶1.00,糖苷键类型主要为1,4-Manp和1,4-Glcp,摩尔比(4.51~7.89)∶1.00;不同铁皮石斛多糖的部分酸水解和酶解产物糖谱特征相似。结论:不同产地铁皮石斛功能性多糖结构具有较高的一致性,功能性多糖是铁皮石斛较好的质量控制指标。

HTPB窄分布标准物质制备和相对分子质量及其分布测定

采用沉淀分级方法,以四氢呋喃作为溶剂、甲醇作为沉淀剂,将自由基聚合的宽分布HTPB样品制备成5个窄分布的标样。采用GPC-MALLS法,测定了HTPB标样的相对分子质量及其分布。实验结果表明,HTPB标样色谱峰峰形对称,峰窄,相对分子量分布均匀,分散指数D<1.3。与VPO法测定结果对照,数均相对分子量相对偏差<10%。以窄分布HTPB作为标样,采用GPC法测定了HTPB相对分子质量及其分布,获得的数均、重均相对分子质量及分散指数与GPCMALLS法结果基本一致,相对偏差<10%;数均相对分子质量与VPO法相对偏差<12%。

微流体流变仪法测定不同型号聚维酮K值及K值与重均分子量关系的初步探讨

本文运用微流体流变仪和乌氏毛细管黏度计,分别测定7种型号56批次聚维酮样品的K值。采用SPSS软件,对两种方法测得的K值进行配对样本T检验,结果表明两种方法测定的K值无显著性差异(P>0.05)。以乌氏毛细管黏度计测得K值(Ku)为横坐标,微流体流变仪测得K值(Km)为纵坐标,得到方程,Km=0.8939Ku+4.6176R2=0.9862,拟合程度良好。微流体流变仪法具有耗样量少、耗时短、准确的特点,能实现高通量全自动化采集为不同型号聚维酮K值的测定提供了更便捷的手段。接着采用高效凝胶色谱-多角度激光散射仪联用法(GPC-MALLS)测得各型号聚维酮重均分子量(Mw),探究其与Km关系,得到lg Mw=-0.0004 Km2+0.0727 Km+2.791R2=0.9901,拟合情况良好,故可将Km带入上述关系式估算Mw。

眼用硅油重均相对分子质量及其寡聚硅氧烷含量分析

采用凝胶渗透色谱与多角度激光光散射联用仪测定眼用硅油的重均相对分子质量,用气相色谱–质谱联用仪对其低聚物(寡聚硅氧烷类物质)进行定性定量分析。以八甲基环四硅氧烷(D4)、十甲基环五硅氧烷(D5)作为寡聚硅氧烷代表进行检测研究。硅油的重均相对分子质量(Mw)为31KD,相对分子质量分布系数Mw/Mn为2.9。D4,D5的质量浓度分别在1~50μg/mL,2~60μg/mL范围内与其色谱峰面积呈良好的线性,线性相关系数(r^2)分别为0.999,0.998,检出限分别为0.10,0.23μg/mL,D4,D5的加标回收率分别为90.7%~96.7%,87.3%~94.1%。重均相对分子质量及D4,D5测定结果的相对标准偏差均小于5%(n=6)。该方法干扰少,准确度高,可用于眼用硅油质量控制。

PGN相对分子质量及其分布测定

采用GPC-MALLS法测定了聚缩水甘油醚硝酸酯(PGN)6个窄分布标样的相对分子质量(M_r)及其分布。实验结果表明,PGN标样色谱峰峰形对称,峰窄,M_r分布均匀,分散指数D<1.12。与VPO法测定结果对照,数均分子质量(M_n)相对偏差小于6%。以窄分布PGN作标样,采用GPC法测定了PGN的M_r及其分布,获得的M_n、重均分子质量(M_w)以及分散指数与GPC-MALLS法结果基本一致,相对偏差小于4%;M_n与VPO法相对偏差小于6%。

霸王花不同部位粗多糖的结构组成及体外抗氧化活性

目的研究霸王花不同部位粗多糖的结构组成和体外抗氧化活性。方法利用水提醇沉法制备霸王花4个不同部位(花瓣、花萼、雌蕊、雄蕊)的粗多糖,通过苯酚-硫酸法、考马斯亮蓝法、凝胶排阻色谱联用多角度激光光散射和示差折光仪法[size exclusion chromatography(SEC) coupled with multiangle laser light scattering(MALLS)and refractive index detector(RID),SEC-MALLS-RID]、高效液相色谱法、傅里叶红外光谱法(Fourier transform infrared spectrometer,FTIR)分析比较霸王花不同部位粗多糖结构特征;以对2,2-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除作用为指标,评价霸王花不同部位粗多糖的体外抗氧化活性。结果霸王花不同部位粗多糖中多糖含量为52.20%~61.52%,蛋白质含量为1.17%~3.21%;霸王花不同部位粗多糖均含有D-甘露糖、L-鼠李糖、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸、葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、D-阿拉伯糖,但单糖的比例有差异;4个不同部位粗多糖的SEC色谱图、重均分子质量及其分布、FTIR色谱图具有相似性;霸王花不同部位粗多糖具有体外抗氧化活性。结论霸王花不同部位粗多糖结构组成具有较高的相似性,均具有良好的抗氧化活性,在保健食品和药品等领域具有良好的开发利用前景。

肝素钠相对分子质量对照品国际协作标定Ⅰ

目的协作标定肝素钠待标品的相对分子质量。方法高效凝胶色谱和多角度激光光散射仪联用(HGPC-MALLS)法,色谱柱和流动相等色谱条件各实验室自定,本实验采用的流速为0.5 m L·min-1,柱温为35℃,检测器为多角度激光光散射仪联用和示差折光检测器联用。结果本实验采用4种色谱条件,不同的进样体积,分别测定了待标品的相对分子质量,结果在报告值中间。结论不同实验室之间的结果存在较大差异,建议组织方进一步优化实验方法。

反复冻融对23价肺炎球菌荚膜多糖稳定性的影响

目的:考察反复冻融对23种血清型(1,2,3,4,5,6B,7F,8,9N,9V,10A,11A,12F,14,15B,17F,18C,19A,19F,20,22F,23F和33F)肺炎球菌荚膜多糖的影响。方法:各型多糖由-20℃至室温(约25℃)反复冻融1~3次,每个时间点抽取样品进行多糖抗原性(速率比浊法)、分子大小(HPSEC-MALLS/RI分析法)和特异性基团含量(糖醛酸、甲基戊糖、氨基己糖和O-乙酰基含量等4项指标)的检测,将检测结果与正常使用水平数据(冻融1次)进行比较分析。结果:反复冻融1~3次,23种血清型肺炎球菌荚膜多糖的抗原性、分子量分布、特异性基团含量均未发生显著变化(P>0.05或含量与初始值相差<5%)。结论:反复冻融3次以内不会导致荚膜多糖的降解,各型多糖均表现出较高的稳定性。