TNF受体(P55)胞外区和IgGFc嵌合蛋白高效原核表达载体的构建

目的 构建TNF受体 (P5 5 )胞外区和IgGFc嵌合蛋白的高效原核表达载体。方法 以人心肌cDNA文库为模板 ,PCR扩增TNF受体 (P5 5 )胞外区全基因 (sTNFR ED) ,亚克隆入pGEM T/IgGFc中构建 pGEM T/sTNFR ED∶Ig GFc重组子 ,然后以其为模板 ,在上游引物中引入原核细胞高频密码子 ,再次PCR扩增去信号肽TNF受体 (P5 5 )胞外区和IgGFc嵌合基因 (TNFR ED∶IgGFc) ,亚克隆入 pUC19载体 ,经序列测定正确后克隆入原核表达载体 pBV2 2 0中。结果 成功构建了TNF受体 (P5 5 )胞外区和IgGFc嵌合蛋白高效原核表达载体 ,命名为 pBV2 2 0 /TNFR ED∶IgGFc。结论 pBV2 2 0 /TNFR ED∶IgGFc表达载体的构建 ,为进一步表达TNF受体 (P5 5 )胞外区和IgGFc嵌合蛋白及其在中和TNF毒副作用。

γ-干扰素原核高效表达体系的建立

用基因重组的方法，将γ－ＩＦＮｃＤＮＡ 片段用ＥｃｏＲＩ单酶插入到原核表达载体ｐＢＶ２２０ 中，筛选得到带有正向串联了２个γＩＦＮｃＤＮＡ 片段的阳性重组质粒，转化大肠杆菌ＤＨ５α后，建立了γ－ ＩＦＮ 的原核表达体系。经温度诱导培养，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ ｂｌｏｔ、ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ 光密度扫描检测证实：该体系可高效表达γ－ ＩＦＮ 蛋白，表达量占菌体可溶性蛋白的４０ ％以上。病变抑制法测活表明：表达产物具有γ－ ＩＦＮ 的抗病毒活性。这一体系的建立为大规模发酵生产γ－ ＩＦＮ 提供了可靠的工程菌株，为进一步研究其分离纯化工艺提供了重要的实验模型。

基因工程抗体的原核高效表达

基因工程抗体具有生产简单、价格低廉和容易获得稀有抗体等优点而日益受到广泛关注 ,是当前制备治疗性抗体的主要手段。抗体表达量低依然是制约其大规模生产和应用的主要因素 ,通过对表达载体、宿主细胞和表达条件等进行改造与优化 。