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口蹄疫病毒3B基因的高效表达及其表达产物的反应活性
1
作者
覃健萍
徐维加
+5 位作者
陈峰
马静云
谢青梅
刘盛梅
曹永长
毕英佐
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第10期867-872,共6页
通过PCR技术获得口蹄疫病毒非结构蛋白3B基因,将其克隆至质粒pET-32a(+)和高效可溶性表达质粒pEM中,经PCR筛选,获得阳性重组子pET-3B和pEM-3B,将它们转化大肠杆菌BL21中进行诱导表达,SDS-PAGE及Western-blot检测结果证明,表达的3B融合...
通过PCR技术获得口蹄疫病毒非结构蛋白3B基因,将其克隆至质粒pET-32a(+)和高效可溶性表达质粒pEM中,经PCR筛选,获得阳性重组子pET-3B和pEM-3B,将它们转化大肠杆菌BL21中进行诱导表达,SDS-PAGE及Western-blot检测结果证明,表达的3B融合蛋白能与FMDV感染动物血清发生特异性反应。蛋白可溶性分析表明,EM-3B融合蛋白绝大部分以可溶形式表达。以此可溶性融合蛋白EM-3B为抗原建立了可区分FMD免疫动物和感染动物的EM-3B-DIVA-ELISA方法,经检测,其特异性为95.0%,敏感性为97.5%,与2个国产试剂盒的符合率分别为96.25%和98.75%。
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关键词
口蹄疫病毒
3B基因
高效可溶性表达
鉴别诊断ELISA
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职称材料
鸡贫血病毒凋亡素基因的可溶性融合表达及抗肿瘤活性分析
2
作者
冀君
朱晨晨
+5 位作者
许鑫
刘晓
冷超粮
史鸿飞
姚伦广
阚云超
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第2期26-32,共7页
为获得高效可溶表达的鸡贫血病毒凋亡素基因(CAV-Apoptin),根据大肠杆菌密码子偏爱性优化CAV-Apoptin基因序列,将其连接到含msyB伴侣基因的pBCX载体上,转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,经SDS-PAGE鉴定后应用镍柱亲和层析纯化蛋白质...
为获得高效可溶表达的鸡贫血病毒凋亡素基因(CAV-Apoptin),根据大肠杆菌密码子偏爱性优化CAV-Apoptin基因序列,将其连接到含msyB伴侣基因的pBCX载体上,转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,经SDS-PAGE鉴定后应用镍柱亲和层析纯化蛋白质,采用显微镜观察、CCK-8实验与DNA ladders测定其抗肿瘤细胞的活性。结果显示,成功构建大肠杆菌表达载体pBCX-CAV-Apoptin,在37℃正常培养条件下的大肠杆菌中得到大量可溶性表达产物,融合蛋白质分子量大小约为42 kDa,50 ml菌液即可获得1.5 mg左右的纯化重组蛋白,CCK-8实验结果显示纯化后的重组蛋白作用36 h后可对套氏淋巴瘤JEKO-1、REC-1细胞生长产生超过60%的抑制率;显微镜观察与DNA ladder实验证明重组蛋白可诱导JEKO-1、REC-1细胞的凋亡,对HUVEC没有诱导凋亡的作用。免疫印迹分析表明重组凋亡素对JEKO-1细胞诱导了Caspase-3的激活,而对Caspase-8的表达没有影响。研究表明融合蛋白msyB-CAV-Apoptin可达到高效可溶表达,且表达产物具有特异抗肿瘤活性。
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关键词
凋亡素
鸡贫血病毒
融合伴侣
高效可溶性表达
活性分析
原文传递
题名
口蹄疫病毒3B基因的高效表达及其表达产物的反应活性
1
作者
覃健萍
徐维加
陈峰
马静云
谢青梅
刘盛梅
曹永长
毕英佐
机构
华南农业大学动物科学学院
云南出入境检验检疫局
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第10期867-872,共6页
基金
广东省重大科技专项(2004A2090102)
文摘
通过PCR技术获得口蹄疫病毒非结构蛋白3B基因,将其克隆至质粒pET-32a(+)和高效可溶性表达质粒pEM中,经PCR筛选,获得阳性重组子pET-3B和pEM-3B,将它们转化大肠杆菌BL21中进行诱导表达,SDS-PAGE及Western-blot检测结果证明,表达的3B融合蛋白能与FMDV感染动物血清发生特异性反应。蛋白可溶性分析表明,EM-3B融合蛋白绝大部分以可溶形式表达。以此可溶性融合蛋白EM-3B为抗原建立了可区分FMD免疫动物和感染动物的EM-3B-DIVA-ELISA方法,经检测,其特异性为95.0%,敏感性为97.5%,与2个国产试剂盒的符合率分别为96.25%和98.75%。
关键词
口蹄疫病毒
3B基因
高效可溶性表达
鉴别诊断ELISA
Keywords
foot-and-mouth disease virus
3B gene
solution expression with high efficiency
DIVA-ELISA
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
鸡贫血病毒凋亡素基因的可溶性融合表达及抗肿瘤活性分析
2
作者
冀君
朱晨晨
许鑫
刘晓
冷超粮
史鸿飞
姚伦广
阚云超
机构
南阳师范学院南阳市兽医生物工程技术研究中心/南阳师范学院昆虫生物反应器河南省工程实验室
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第2期26-32,共7页
基金
河南省国际合作项目(152102410055)
高层次人才专项项目(70638)资助项目
文摘
为获得高效可溶表达的鸡贫血病毒凋亡素基因(CAV-Apoptin),根据大肠杆菌密码子偏爱性优化CAV-Apoptin基因序列,将其连接到含msyB伴侣基因的pBCX载体上,转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,经SDS-PAGE鉴定后应用镍柱亲和层析纯化蛋白质,采用显微镜观察、CCK-8实验与DNA ladders测定其抗肿瘤细胞的活性。结果显示,成功构建大肠杆菌表达载体pBCX-CAV-Apoptin,在37℃正常培养条件下的大肠杆菌中得到大量可溶性表达产物,融合蛋白质分子量大小约为42 kDa,50 ml菌液即可获得1.5 mg左右的纯化重组蛋白,CCK-8实验结果显示纯化后的重组蛋白作用36 h后可对套氏淋巴瘤JEKO-1、REC-1细胞生长产生超过60%的抑制率;显微镜观察与DNA ladder实验证明重组蛋白可诱导JEKO-1、REC-1细胞的凋亡,对HUVEC没有诱导凋亡的作用。免疫印迹分析表明重组凋亡素对JEKO-1细胞诱导了Caspase-3的激活,而对Caspase-8的表达没有影响。研究表明融合蛋白msyB-CAV-Apoptin可达到高效可溶表达,且表达产物具有特异抗肿瘤活性。
关键词
凋亡素
鸡贫血病毒
融合伴侣
高效可溶性表达
活性分析
Keywords
Apoptin
Chicken anemia virus
Fusion chaperonin
Efficient soluble expression
Activity assay
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
口蹄疫病毒3B基因的高效表达及其表达产物的反应活性
覃健萍
徐维加
陈峰
马静云
谢青梅
刘盛梅
曹永长
毕英佐
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2007
0
下载PDF
职称材料
2
鸡贫血病毒凋亡素基因的可溶性融合表达及抗肿瘤活性分析
冀君
朱晨晨
许鑫
刘晓
冷超粮
史鸿飞
姚伦广
阚云超
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017
0
原文传递
已选择
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引证文献
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