玉米秸秆中7种游离单糖的高效液相色谱测定方法

本研究旨在建立一种测定玉米秸秆中7种游离单糖[D(+)-葡萄糖、L-鼠李糖、D(+)-木糖、L-阿拉伯糖、D(-)-核糖、D(+)-半乳糖和D(+)-甘露糖]的高效液相色谱测定方法。将玉米秸秆在60℃干燥后粉碎,以水作为提取溶剂,98℃水浴提取1 h,冷却后离心取上清液;利用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化处理,上清液过0.22μm滤膜,以Agilent Zorbax SB-C_(18)色谱柱进行高效液相色谱分析,7种组分在56 min内达到分离。结果表明:D(+)-葡萄糖、L-鼠李糖、D(+)-木糖、L-阿拉伯糖、D(-)-核糖、D(+)-半乳糖和D(+)-甘露糖的保留时间和峰面积的日内相对标准偏差均分别小于1.0%和5.0%,日间相对标准偏差均分别小于1.0%和7.5%;线性范围分别为0.31~2 000μg/mL、 0.31~200μg/mL、 0.50~200μg/mL、0.75~200μg/mL、0.31~200μg/mL、0.75~200μg/mL和0.31~200μg/mL,线性关系良好,相关系数均达到0.999以上;检出限为0.10~0.25μg/mL,加标回收率为79.9%~114.8%。由此可见,本研究建立的方法不仅操作简单,还可以对玉米秸秆中的7种游离单糖准确定量,为研究玉米秸秆中糖类物质含量以及在动物体内的消化吸收提供技术支撑。

配合饲料中64种药物超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱检测方法的研究

[目的]建立同时检测配合饲料中64种药物的超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(ultra-high performance liquid chromatography-triple quadrupole tandem mass spectrometry,UHPLC-MS/MS)法,提高非法添加物的检测效率。[方法]采用Waters HSS T3型色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)进行分离,流动相A为0.1%甲酸水溶液,流动相B为含0.1%甲酸的乙腈溶液,梯度洗脱,流速为0.40 mL/min,进样量为2μL;采用电喷雾离子源正离子扫描模式进行检测,多反应监测模式进行信号采集。比较4种样品提取溶剂以及2种固相萃取柱处理对目标药物的回收率,确定样品前处理的最佳方法。利用建立的UHPLC-MS/MS法对宁夏回族自治区不同来源的100批次配合饲料样品进行64种药物检测。[结果]配合饲料样品均质后,用含0.2%甲酸的乙腈水溶液(乙腈∶水=8∶2,V/V)提取,利用Oasis PRiME HLB型固相萃取柱对样品净化,多数目标药物的回收率在60%以上。64种药物在浓度为5.0~200.0μg/L的范围内线性关系良好,相关系数(R)均大于0.99;不同药物的定量限在5.0~10.0μg/kg;阳性添加5.0、20.0、50.0μg/kg 3个浓度的平均回收率在41.00%~120.49%,批内相对标准偏差(RSD)在0.54%~15.94%,批间RSD在1.25%~13.64%。在100个批次的配合饲料样品中均未检出目标药物。[结论]建立的UHPLC-MS/MS法线性关系良好、回收率高、精密度好,具有较高的重现性和较好的可操作性,可用于配合饲料中非法添加64种药物的筛查。

超高效液相色谱-串联质谱法测定水体中磺胺类药物残留量方法验证

标准方法验证是检验检测实验室质量管理过程中的重要一环,是保障检验检测数据准确性的基础。本研究建立了超高效液相色谱三重四级杆质谱联用仪测定水体中磺胺类药物残留量的方法,从标准曲线、线性范围、定量限、精密度及方法回收率5方面进行方法验证,并对本方法的实验关键点进行了分析优化。结果表明:17种磺胺类药物在5.0~50.0 ng/mL浓度范围内线性良好,校准曲线相关系数r 2值均大于0.997,该方法的检出限为0.038 ng/mL,3个加标水平的平均回收率在74.6%~105.6%之间,相对标准偏差0.89%~12.89%。应用该方法测定了上海市嘉定区内河流和养殖场池塘水样中的磺胺类药物的残留量,该方法的建立可为监控河流和水产养殖用水中磺胺类药物的残留情况提供技术依据。

基于高效液相色谱(HPLC)的微生物发酵过程中的关键代谢物分析

微生物发酵是生物工程和工业生物技术的核心过程,涉及多种复杂的生物化学变化,其发酵过程中产生的代谢物对于理解微生物的生理状态和优化生产过程至关重要。高效液相色谱(HPLC)作为一种高效、精确的分析方法,在识别和定量这些代谢物方面发挥着关键作用。文章基于高效液相色谱(HPLC)对微生物发酵过程中的关键代谢物展开分析,以期为微生物发酵过程的控制和优化提供参考。

食品中苯甲酸酯类物质的高效液相色谱检测方法优化

本研究通过系统的试验设计和参数调整,成功地改进苯甲酸酯类物质的高效液相色谱检测方法,其中关键的优化参数包括色谱柱类型、流动相组成、柱温和检测波长等。此外,研究还验证了该方法的可行性和可靠性,并与传统方法进行了比较,证明了其在食品安全领域的重要应用前景。

改进QuEChERS方法结合超高效液相色谱-串联质谱法快速测定藏茶中88种农药残留

建立了藏茶中88种农药残留的改进QuEChERS/超高效液相色谱-串联质谱(QuEChERS/UPLC-MS/MS)检测方法。藏茶样品以1%乙酸乙腈提取和2 g NaCl盐析处理,经交联聚乙烯基吡咯烷酮(PVPP)、十八烷基键合硅胶(C18)、石墨化炭黑(GCB)净化后,以0.01%甲酸水溶液(含2 mmol/L甲酸铵)和0.01%甲酸甲醇为流动相,采用ACQUITY UPLC BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.7µm)色谱柱在15 min内实现分离。在电喷雾正离子模式下,采用多反应监测(MRM)模式检测,基质匹配标准曲线外标法定量。结果表明,藏茶中88种农药在相应质量浓度范围内线性良好(相关系数r≥0.9990),检出限(LOD)和定量下限(LOQ)分别为0.15~3µg/kg和0.5~10µg/kg。在1、2、10倍LOQ 3个加标水平下,平均回收率分别为73.2%~108%、73.2~109%、72.5%~110%,相对标准偏差(RSD)均不大于12%。将该方法应用于12批实际样品检测,所有样品均检出农药,其中有4批次样品中吡虫啉超限量值。该方法灵敏度高、简便快捷,能够满足藏茶中88种农药的快速检测要求。

黄连解毒汤6种主要成分高效液相色谱检测方法的建立和应用

目的建立检测黄连解毒汤中6种主要成分的高效液相色谱(HPLC)方法。方法采用Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.03 mg·mL-1磷酸二氢钾-乙腈(V∶V=7∶3)为流动相,等度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为345 nm,柱温为37℃,进样量为20μL,建立检测黄连解毒汤6种主要成分(京尼平苷、小檗碱、黄连碱、药根碱、黄芩苷、巴马汀)的HPLC方法。绘制HPLC检测6种成分的标准曲线,并进行方法学评价(线性、加样回收率、准确度和精密度、稳定性)。采用建立的HPLC方法检测黄连解毒汤样本。结果HPLC检测京尼平苷、小檗碱、黄连碱、药根碱、黄芩苷、巴马汀的线性范围分别为25.00~800.00、32.00~1024.00、20.00~640.00、20.30~650.00、13.13~420.00、25.00~800.00μg·mL-1,精密度和准确度均<2%,加样回收率分别为105.30%、102.88%、103.51%、107.76%、96.29%、99.34%。稳定性实验结果显示,室温放置24 h、反复冻融3次、2~8℃保存1周、-80℃冻存1个月,京尼平苷、小檗碱、黄连碱、药根碱、黄芩苷、巴马汀的峰面积相对标准偏差(RSD)均<2%,检测结果均稳定。采用HPLC检测黄连解毒汤的主要成分,浓度从高到低依次为药根碱(2799.00μg·mL-1)、小檗碱(2358.03μg·mL-1)、京尼平苷(1793.34μg·mL-1)、巴马汀(945.30μg·mL-1)、黄连碱(192.00μg·mL-1)、黄芩苷(171.00μg·mL-1)。结论建立的同时检测黄连解毒汤6种主要成分的HPLC方法快速、简便、重复性好、准确度高,可为后续黄连解毒汤的相关研究和临床应用奠定基础。

基于超高效液相色谱同时测定木本植物中12种内源激素的方法及应用

建立了超高效液相色谱同时测定木本植物中吲哚乙腈(IAN)、吲哚丙酮酸(IPYA)、吲哚乙酰胺(IAM)、色胺(TAM)、吲哚-3-乙酸(IAA)、玉米素(ZT)、反式玉米素核苷(tZR)、脱落酸(ABA)和赤霉素A1(GA1)、赤霉素A3(GA3)、赤霉素A4(GA4)、赤霉素A7(GA7)等12种内源激素的分析方法。对前处理与测定条件进行了筛选和优化,木本植物组织经80%甲醇提取,通过固相萃取柱(MCX)纯化,以ZORBAX EP-C18为色谱柱,甲醇/0.1%冰乙酸为流动相梯度洗脱,柱温30℃,波长为254 nm和210 nm条件下,利用超高效液相色谱进行外标定量分析。测定12种激素线性相关系数R2>0.99,方法检出限(LOD)及定量限(LOQ)分别为0.002~0.029 ng·mL^(-1)和0.006~0.088 ng·mL^(-1)。样本84K杨和白桦在不同加标水平下的回收率分别为78.1%~116.8%和82.9%~114.2%,相对标准偏差(RSD)分别为0.3%~4.7%和0.2%~4.2%。应用本方法对两种木本植物组织内源激素含量的测定,结果表明,脱落酸含量最高分别为768.88 ng·g^(-1)、366.27 ng·g^(-1),GA3、GA4与GA7等活性赤霉素含量偏低。所建立的方法适用于杨树、桦树中多种激素的快速纯化分析,为其他木本植物激素的测定提供了借鉴。

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定玉米和小麦中玉米赤霉烯酮和玉米赤霉烯酮-14-葡萄糖苷检测方法的建立

为科学防控和保障粮食质量安全,以玉米和小麦为材料,用乙腈/水/甲酸溶液提取,经HLB固相萃取柱净化,采用基质匹配标准溶液进行准确定量,建立了一种可靠的超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)方法,用于同时测定玉米和小麦中玉米赤霉烯酮(ZEN)和玉米赤霉烯酮-14-葡萄糖苷(ZEN-14G)。结果表明:ZEN和ZEN-14G在0.1—200μg/L范围内呈良好线性关系(R^(2)>0.999),检出限为0.03—0.3μg/kg,定量限为0.1—1.0μg/kg。在20、50μg/kg和100μg/kg三种添加水平下,回收率为(80.2±9.8)%—(98.6±4.2)%,精密度为0.2%—9.1%(n=5)。该方法准确、灵敏度高,可以满足玉米和小麦中ZEN和ZEN-14G的检测要求。

基于超高效液相色谱—高分辨质谱联用方法及网络药理学的芪玉颗粒降血糖作用机制研究

目的 基于超高效液相色谱—高分辨质谱联用方法(ultra-performance liquid chromatography/quadrupole time-of-flight-tandem mass spectrometry, UPLC-Q-TOF/MS)及网络药理学技术探究芪玉颗粒降血糖的作用机制。方法 利用UPLC-Q-TOF/MS技术对芪玉颗粒的入血成分进行研究,再以入血成分为药效成分进行网络药理学分析构建成分—靶点—疾病网络,预测芪玉颗粒治疗糖尿病可能的作用机制,并建立高糖高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素诱导的糖尿病模型验证芪玉颗粒对糖尿病大鼠磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase, PI3K)-丝氨酸—苏氨酸激酶(threonine-protein kinase1, AKT)-磷酸化的糖原合成酶激酶-3β/糖原合成激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)通路的调节作用。结果 入血成分分析共鉴定出葛根素、黄芪甲苷、白杨素、大豆苷等17个原型成分和来源于咖啡酸、葛根素、阿魏酸、大豆苷等成分的69个代谢产物,结合网络药理学分析结果共得到肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)、丝氨酸—苏氨酸激酶1(threonine-protein kinase1, AKT1)等98个关键靶点及癌症的途径、胰岛素抵抗等144条通路。芪玉颗粒给药9周后,糖尿病大鼠血糖显著下降(P<0.001),PI3K、AKT、GSK-3β明显升高(P<0.01,P<0.05,P<0.001)。结论 通过血清药物化学结合网络药理学挖掘预测芪玉颗粒防治糖尿病的作用机制,为芪玉颗粒的降血糖作用机制研究及质控评价提供科学依据。动物实验初步证实了芪玉颗粒可通过调控PI3K-Akt-GSK-3β信号通路相关蛋白发挥预防治疗糖尿病的作用。

宠物毛发中全氟/多氟化合物的固相萃取/高效液相色谱-串联质谱分析方法研究

该研究对宠物毛发中全氟/多氟化合物(PFAS)的萃取方法进行优化,建立了固相萃取/高效液相色谱-串联质谱(SPE/HPLC-MS/MS)同时测定宠物毛发中包括替代品6∶2氯代多氟醚磺酸(6∶2 Cl-PFESA)和全氟壬烯氧基苯磺酸钠(OBS)在内的24种PFAS的分析方法。样品以乙腈为溶剂超声和振荡萃取2次,萃取液用弱阴离子交换(WAX)固相萃取柱进行净化,收集洗脱液氮吹浓缩后进行HPLC-MS/MS分析。在优化条件下,目标化合物的仪器检出限(LOD)和方法检出限(MDL)分别为0.005~0.136 ng/mL和0.009~0.273 ng/g。24种PFAS的加标回收率为66.2%~110%,相对标准偏差(RSD)为1.5%~21%。采用该方法对52个实际宠物毛发样品进行分析,24种PFAS均被检出,检出率为3.8%~98.1%,PFAS总含量为0.89~17.94 ng/g,平均含量为5.02 ng/g。该方法灵敏度高、稳定性好,应用于宠物毛发中PFAS分析可获得满意的结果。

高效液相色谱质谱联用仪同时测定抑郁发作患者血清中西酞普兰、米氮平浓度的方法研究

目的建立高效液相色谱质谱联用仪(LC-MS)同时测定抑郁发作患者血清中西酞普兰、米氮平浓度的方法。方法设立色谱柱为Acquity UPLC BEH C^(18)柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),流动相为乙腈-10 mmol/L醋酸铵水溶液(均含0.1%甲酸),梯度洗脱,体积流量0.5 ml·min^(-1),柱温40℃,电喷雾电离正离子(ESI^(+))扫描,多反应监测模式下检测,以保留时间和离子丰度比定性,以伐地那非为内标物定量。结果西酞普兰及米氮平在各自对应的质量浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数r^(2)>0.99,定量下限为2.5 ng/ml,相对标准偏差(RSD,n=6)为1.5%~9.3%。结论高效液相色谱质谱联用仪可同时测定抑郁发作患者血清中西酞普兰、米氮平浓度,结果精准可靠,有利于临床合理用药。

改良QuEChERS方法结合高效液相色谱测定土壤中两种甲氧基丙烯酸酯类农药

旨在建立新疆、内蒙、黑龙江3种不同类型土壤中醚菌酯和吡唑醚菌酯含量的高效液相色谱法。采用改良的QuEChERS方法结合高效液相色谱,对样品中的吡唑醚菌酯及醚菌酯进行分离,外标法定量。结果表明:该方法在0.3~10.0 mg/L浓度范围内,线性关系良好,线性相关系数R2均大于0.9999,在不同添加水平下,吡唑醚菌酯与醚菌酯在新疆灰漠土中的平均回收率分别为98.03%~102.32%、100.33%~107.18%,相对标准偏差(RSD)分别为0.46%~0.87%、0.94%~1.67%;在黑龙江黑钙土中的平均回收率分别为100.40%~104.32%、90.83%~101.33%,RSD分别为0.47%~2.78%、1.35%~1.69%;在内蒙棕钙土中的平均回收率分别为100.04%~107.40%、96.90%~98.86%,RSD分别为0.77%~1.41%、1.08%~1.57%。该方法准确度和精密度符合农药残留分析的要求,适用于几种类型土壤中吡唑醚菌酯及醚菌酯含量的测定。

QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱法检测甘薯和土壤中烯效唑残留的方法研究

采用改良的QuEChERS方法进行前处理,建立了甘薯和土壤中烯效唑残留的QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱检测方法。样品用含0.1%乙酸的乙腈振荡提取,经C18净化剂进行基质净化,采用C18反相色谱柱分离,进行LC-MS/MS检测。结果表明:烯效唑在0.0005~1.0 mg/L浓度范围内,质量浓度与对应的峰面积间呈良好的线性关系,相关系数为0.9951~0.9959;在0.002、0.02、0.20 mg/kg 3个添加水平下,烯效唑在甘薯和土壤中的平均回收率为90.3%~106.7%,相对标准偏差为0.6%~3.6%,方法定量限为0.002 mg/kg。该方法方便快捷、精准定量、检测灵敏,适用于甘薯和土壤样品中烯效唑的检测。

水苏糖及其代谢产物的高效液相色谱-蒸发光散射法检测方法

水苏糖作为一种天然益生元,可促进乳酸菌增殖,但水苏糖在乳酸菌中的代谢途径仍未被完全解析。该研究尝试建立一种检测水苏糖及其代谢产物的高效液相色谱-蒸发光散射(high performance liquid chromatography-evaporative light-scattering detector, HPLC-ELSD)方法,通过水苏糖及其代谢产物含量的动态变化为阐释水苏糖在乳酸菌中的代谢途径提供技术支撑。结果表明,使用Waters BEH Amide色谱柱结合ELSD检测器,洗脱条件为V(乙腈)∶V(水)=80∶20、流动相流速为1.0 mL/min, ELSD检测器条件为温度60℃,载气流速1.0 mL/min时,水苏糖及其代谢产物能实现较好分离,且检测重现性好,稳定性高,说明该方法适用于水苏糖及其代谢产物含量的检测。

高效液相色谱-质谱法测定生鲜乳中氯霉素的方法研究

建立高效液相色谱-串联质谱法测定生鲜乳中氯霉素残留的方法。对GB 29688—2013《牛奶中氯霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法》中的测定方法进行优化。量取生鲜乳适量,加氯霉素-D_(5)内标工作液,经乙腈萃取后,5000 r/min离心,过OASIS Prime HLB柱,将所过溶液氮气吹干,水复溶,取下层水溶液层过0.22μm水系滤膜。将C_(18)柱作为液相色谱柱,按V_((乙腈))∶V_((水))=60:40体积比等度洗脱。结果表明,氯霉素在0.2~10.0μg/kg范围内有较好的准确度,相关系数均大于0.99,方法检测限0.05μg/kg,定量限都为0.2μg/kg,3个加标浓度(0.2、1.0、10.0μg/kg)的氯霉素的平均回收率为85.5%~116.0%,相对标准偏差为1.23%~8.16%。试验结果完全符合国家标准检测要求,适用于生鲜乳中氯霉素定性定量快速检测。

固相萃取-高效液相色谱串联质谱法测定水中58种抗生素方法研究

建立了固相萃取-高效液相色谱串联质谱法测定水中58种抗生素的分析方法。水样经过全自动固相萃取仪富集,以HLB柱为萃取柱,4mL甲醇和4mL 0.1%甲酸甲醇为洗脱剂,用高效液相色谱串联质谱仪分析定量。该方法在1.0~100μg·L^(-1)范围内线性良好,相关系数均大于0.995,58种抗生素的纯水加标回收率为72.4~115%,地表水加标回收率为68.2~97.6%,地下水加标回收率为71.7~112%,污水处理厂出厂水加标回收率为62.5~96.7%,相对标准偏差均小于15%,检出限为0.02~0.8ng·L^(-1),该方法简单实用、准确可靠,可用于水中58种抗生素的高通量同时测定。

60%肟菌·环丙唑醇水分散粒剂高效液相色谱分析方法

为了建立能够同时测定环丙唑醇和肟菌酯两种有效成分含量的高效液相色谱分析方法。用高效液相色谱法,以甲醇-磷酸水混合溶液为流动相,C18不锈钢色谱柱,在220 nm波长条件下对试样进行分离和定量分析。试验结果表明,该方法下环丙唑醇和肟菌酯均有良好的线性关系,线性相关系数R2均为0.999 8。精密度结果表明环丙唑醇的相对标准偏差为0.43%,肟菌酯的相对标准偏差为0.44%。准确度试验结果表明平均环丙唑醇回收率为100.73%,肟菌酯平均回收率为100.52%。该检测方法分离效果好,线性关系、准确度和精密度均符合要求,可用于环丙唑醇和肟菌酯复配产品的定量分析。

超高效液相色谱⁃串联质谱检测枸杞中苦参碱和氧化苦参碱残留量的方法

使用超高效液相色谱⁃串联质谱仪,采用同位素内标法定量,建立枸杞中苦参碱和氧化苦参碱的测定方法。样品经1.0%磷酸水溶液超声提取,强阳离子固相萃取柱净化,10 mL 5%氨水甲醇溶液洗脱,采用0.1%甲酸水溶液和甲醇为流动相,梯度洗脱,通过T3色谱柱分离,电喷雾离子源正离子扫描模式、多反应监测模式检测。通过考察不同种类提取溶剂、超声时间、固相萃取条件下目标化合物峰面积,确定最优前处理方式。结果表明:苦参碱和氧化苦参碱在0.5~50.0μg/kg范围内呈现良好线性关系,相关系数(R2)均大于0.999。方法检出限0.05μg/kg,定量限0.2μg/kg。低、中、高3个浓度加标回收试验,苦参碱回收率范围在76.3%~90.7%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)在2.2%~7.4%,氧化苦参碱回收率范围在79.2%~89.0%,RSD在3.1%~6.6%。该方法适用于枸杞中苦参碱和氧化苦参碱检测。

超高效液相色谱-串联质谱快速检测食品中苯基吡唑类化合物质残留的方法

建立了一种QuEChERS前处理方法结合超高效液相色谱-串联质谱技术检测食品中乙虫腈、丁虫腈、吡草醚、氟甲腈、氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜和氟虫腈-脱三氟甲基亚砜等8种苯基吡唑类化合物残留的分析方法。针对不同的食品基质,使用φ=1%醋酸乙腈和水作为提取溶剂,经盐析和QuEChERS净化直接测定。以甲醇-水为流动相梯度洗脱,ESI离子源正负离子模式同时进行多反应监测模式(MRM)扫描,使用基质匹配标准溶液定量分析。苯基吡唑类化合物峰型尖锐对称,分离效果较好,在1~800μg/L范围内线性良好,相关系数大于0.99。该方法在鸡蛋、禽肉、牛奶、枣、白菜、茶叶、大米基质中检出限为0.01~0.53μg/kg之间,定量限为0.04~1.75μg/kg,加标回收率范围为70.12%~119.87%,相对标准偏差(RSD)为1.01%~9.91%(n=6)。该方法高效准确、通用性强,可应用于不同食品基质中苯基吡唑类化合物同时检测分析。