高效液相色谱/荧光法测定血浆、红细胞与尿液中的硫胺素及其磷酸酯

建立了同时测定血浆、红细胞、尿液中硫胺素（T）、一磷酸硫胺素（TMP）、二磷酸硫胺素（TDP）的柱前衍生/反相高效液相色谱-荧光检测法.样品经高氯酸除蛋白,铁氰化钾衍生后,采用反相色谱柱分离,荧光检测器测定,外标法定量.色谱柱为C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm i.d.）,流动相为0.2 mol/L KH2PO4溶液（pH 7.0,含0.000 3 mol/L四丁基氢氧化铵）-甲醇和甲醇-水,采用梯度程序进行洗脱,流速为0.8mL/min.荧光检测器激发波长为365 nm,发射波长为435 nm.结果表明：T,TMP在0.5～ 20.0μg/L,TDP在5.0 ～ 200.0 μg/L质量浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数分别为0.99,0.98,0.99.T,TMP,TDP的平均回收率为86.8％～110.2％,相对标准偏差（RSDs）为2.5％～10.9％.3种化合物在血浆及红细胞中的检出限（LODs）为0.03～0.35 μg/L,定量下限（LOQs）为0.09～1.18 μg/L.T在尿液中的检出限（LODs）为1.58μg/L,定量下限（LOQs）为5.26 μg/L.该方法的准确度和精密度均较高,能够满足临床检测和科研需要.

高效液相色谱/荧光法测定合成革中的甲苯二异氰酸酯

采用高效液相色谱/荧光法（HPLC/FLD）对合成革中的甲苯二异氰酸酯（TDI）进行检测.样品提取衍生后,采用Phenomenex kinetex C18色谱柱分离,乙腈和0.1％磷酸溶液为流动相梯度洗脱,外标法定量.在优化的实验条件下,TDI在1.0～200 μg/L范围内线性关系良好,空白样品在20、200、1000μg/kg3个加标水平下,回收率为85％～98％,相对标准偏差为3.2％～8.3％.方法定量下限（S/N=10）均为10.0 μg/kg.该方法灵敏、准确,适用于合成革中TDI的检测.

高效液相色谱-荧光法测定饲料中维生素B_(1)和维生素B_(2)

为建立以高效液相色谱-荧光法测定饲料中维生素B_(1)和维生素B_(2)的分析方法,实验通过高温高压法对饲料进行前处理,而后衍生,以乙酸钠-甲醇为流动相,分别在不同波长下对维生素B_(1)和B_(2)进行测定。结果显示:维生素B_(1)和维生素B_(2)在0.03~5.00μg/mL线性范围内,相关系数R均大于0.9999;加标回收率为92.7%~98.1%;维生素B_(1)和维生素B_(2)的检出限分别为0.04、0.06 mg/kg,定量限分别为0.15、0.18 mg/kg。本方法对饲料中维生素B_(1)和维生素B_(2)的测定,具有便捷、准确的优势。

QuEChERs-超高效液相色谱-串联质谱法快速测定太子参中208种农药残留

建立QuEChERs-超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定太子参中208种农药残留快速检测方法.样品用1%的酸化乙腈溶液提取、盐析,再经无水硫酸镁、十八烷基硅烷键合硅胶(C 18)、乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶(PSA)萃取净化,多反应监测(MRM)测定,外标法定量.208种农药在0.010~0.10 mg·L-1质量浓度范围内线性关系良好,相关系数均大于0.990,方法的定量限为0.010 mg·kg-1,在添加农药质量浓度为0.010~0.050 mg·kg-1时回收率为70.1%~120.0%,相对标准偏差(RSD)为0.29%~9.17%(n=6).该方法简单、快捷、精密度和准确度高,能够满足太子参中的208种农药残留的检测要求.

高效液相色谱-氢化物发生-原子荧光光谱法测定富硒大豆中硒代氨基酸的含量

取0.1 g脱脂后富硒大豆样品于离心管中,用5 mL pH 7.5的130 mmol·L^(-1)三(羟甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液超声振荡30 min,用15 mg链霉蛋白酶于37℃振荡酶解5 h,离心后取上清液,过0.22μm尼龙有机滤膜。滤液中的硒代半胱氨酸(SeCys)、硒代蛋氨酸(SeMet)、甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)在Agela MP-C_(18)色谱柱上分离,以含2%(体积分数)甲醇和0.5 mmol·L^(-1)四丁基溴化铵的40 mmol·L^(-1)磷酸氢二铵溶液(pH 7.0)进行等度洗脱,并采用氢化物发生-原子荧光光谱法测定3种硒代氨基酸的含量。结果表明,3种硒代氨基酸在7 min内可以实现基线分离,标准曲线的线性范围均为5~100μg·L^(-1),检出限依次为0.086,0.075,0.047 mg·kg^(-1)。按照标准加入法进行回收试验,回收率为85.5%~103%,测定值的相对标准偏差(n=7)不大于3.0%。方法用于分析富硒大豆中的硒代氨基酸,大豆中硒赋存形态多为SeMet,含量占总硒量的85.5%~94.5%。

超高效液相色谱法检验复印纸中荧光增白剂及其在文件真实性鉴定中的应用研究

利用超高效液相色谱法对144种A4复印纸中荧光增白剂进行鉴别并对其老化规律进行研究。采用40%乙腈水溶液作为提取剂,以含25 mmol/L四丁基溴化铵(TBA)的甲醇-水溶液(5∶95,体积比)和乙腈-甲醇混合溶液(2∶3,体积比)为流动相梯度洗脱。结果表明,复印纸中7种常见荧光增白剂在0.5~200μg/mL范围内线性关系良好,r^(2)均大于0.999,检出限为0.03~0.08μg·mL^(-1),定量下限为0.11~0.28μg·mL^(-1);3个不同加标水平下的平均回收率为92.1%~108%,相对标准偏差(RSD)为1.6%~5.9%。在144种A4复印纸中共检出3种荧光增白剂,分别为荧光增白剂BBU、VBL和MST,依据其组成和比例将纸张样品分为8个大类,45个小类,再结合白度测量值,又可分为53种类型。相同品牌型号的纸张,克重不同,所含染料配比与含量不一定相同。选取89号、29号和28号复印纸,在紫外仪中透射老化10天,2天测量一次,3种复印纸荧光增白剂的含量和白度值均发生明显下降,证明了利用荧光增白剂检验文件制成时间的可行性。该方法前处理简单,数据稳定可靠,可为文件的真实性鉴定提供一定的参考依据。

反相高效液相色谱荧光法测定大鼠脑组织中氨基酸类神经递质

目的 建立并改良反相高效液相色谱法,测定大鼠不同脑组织分区氨基酸类神经递质含量。方法 改良使用K2 CO3 缓冲溶液作为稀释液,反相高效液相色谱洗脱,高丝氨酸作为内标,邻苯二甲醛柱前衍生和荧光检测器检测大鼠大脑皮质、海马、纹状体和小脑中4种氨基酸类神经递质:天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)和γ氨基丁酸(GABA)的含量。结果 4种氨基酸在18min内洗脱完全,分离效果良好;在0 .5～4 0 μmol/L浓度范围有较好的线性关系,其相关系数不低于0 .9997;4种氨基酸天内精密度范围为0 .70 %～4 .0 1% ,天间精密度为2 .78%～9.5 8% ;Asp、Glu和GABA的最低检测限为0 .0 1μmol/L ,而Gly为0 .0 2 μmol/L ;海马组织4种氨基酸绝对回收率不低于89.39%。结论 改良后的反相高效液相色谱荧光法灵敏度高、重复性好,能有效分离检测大鼠脑组织分区中氨基酸类神经递质。

QuEChERS-高效液相色谱-荧光法检测鸡蛋中环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星和沙拉沙星的残留量

目的建立QuEChERS前处理结合高效液相色谱-荧光检测器(highperformanceliquid chromatography-fluorescence detector, HPLC-FLD)同时检测鸡蛋中环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星和沙拉沙星残留量的方法。方法鸡蛋样品添加4.0 g硫酸钠和1.0 g氯化钠,再加入8 mL 1%甲酸乙腈进行提取,离心后上清液再加入到Agilent dSPE净化管中,经浓缩后采用HPLC-FLD进行检测, 0.05 mol/L磷酸三乙胺溶液(pH2.4)-乙腈为流动相,检测波长:激发波长280nm,发射波长450nm,采用外标法定量。结果环丙沙星、恩诺沙星和沙拉沙星的线性范围为2～100μg/L,相关系数均大于0.9999,达氟沙星的线性范围为0.4～20μg/L,相关系数大于0.9999。环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星的最低定量限为2μg/kg,达氟沙星的最低定量限为0.4μg/kg。环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星在2～10μg/kg的浓度添加水平上,回收率为70.2%～91.8%,达氟沙星在0.4～2μg/kg的浓度添加水平上,回收率为70.5%～96.3%,批内、批间的相对标准偏差分别为3.89%～9.20%、5.29%～12.3%。结论该方法简便、快速、准确、灵敏度高,适用于鸡蛋中环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星和沙拉沙星残留量的检测。

免疫亲和柱净化-光化学衍生高效液相色谱荧光法测定植物油中黄曲霉毒素B_1的含量

建立了免疫亲和柱净化-光化学衍生高效液相色谱荧光法测定植物油中黄曲霉毒素B1含量的方法，并对样品的测定条件进行了优化。结果表明：植物油的称样量缩减为5．00 g，黄曲霉毒素B1测定结果与GB/T 18979-2003测定结果基本吻合；工作曲线在1-40 ng/mL质量浓度范围内具有良好的线性关系，相关系数为0．9999，方法检出限为0．3μg/kg；在空白样品中添加低、中、高3个不同添加量水平的黄曲霉毒素B1标准品，其回收率在90．5%-99．8%之间，相对标准偏差在6．3%-9．8%之间。采用光化学衍生，操作简单，无需衍生剂，避免了柱前衍生和柱后衍生受衍生剂浓度、温度、反应时间的影响，所建立的方法适用于植物油中黄曲霉毒素B1含量的测定。

高效液相色谱荧光法同时测定小鼠脑组织中4种氨基酸类神经递质

目的采用高效液相-荧光检测技术建立一种稳定的用于测定脑组织中多种氨基酸类神经递质的方法。方法用微透析技术收集小鼠脑组织中多种氨基酸类神经递质,用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生高效液相色谱(high perform-ance liquid chromatography,HPLC)法测定微透析液中天门冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、γ-氨基丁酸(GABA)的含量。结果兴奋性Asp、Glu及抑制性Gly、GABA在18 min内完全分离,在0.625～5μmol/L浓度范围内与峰面积有良好的线性关系。结论HPLC法快速、准确、灵敏度高,适用于脑组织中氨基酸类神经递质含量的测定。

水产品中氟苯尼考和氟苯尼考胺的高效液相色谱荧光法同时测定

建立了水产品中氟苯尼考和氟苯尼考胺同时检测的高效液相色谱荧光法，以乙腈-磷酸二氢钠溶液（0.01mol／L，含0.005mol／L十二烷基硫酸钠和0.10％三乙胺）（体积比2：3）为流动相，流速为0.6mL／min，荧光检测激发波长为225nm，发射波长为280nm。本方法氟苯尼考在10-10000μg／L，氟苯尼考胺在2-2000μg／L范围内与峰面积呈线性相关，相关系数分别为1和0.9999。当空白样品中氟本尼考添加水平为20-200μ/kg，氟苯尼考胺添加水平为4-50μ/k时，该方法的回收率为79％-91％，相对标准偏差为3．66％-6．21％，检出限分别为5μg／kg和1μg／kg。

高效液相色谱-原子荧光法测定水产品中甲基汞含量

建立水产品中甲基汞含量的高效液相色谱-原子荧光测定方法。样品经硫脲加氯化钾、盐酸溶液提取,提取液过固相萃取小柱净化,用流动相定容,过0.45μm微孔滤膜,采用高效液相色谱-原子荧光法检测,外标法定量。结果表明,甲基汞在2～50μg/L质量浓度范围内,色谱峰面积与甲基汞质量浓度之间线性关系良好(相关系数为0.9995),以20、200、1000μg/kg三个添加量在空白样品中添加甲基汞,样品平均回收率为80.2%～87.1%,相对标准偏差为3.4%～6.8%,方法的定量限为20μg/kg。该方法简便快速,基体干扰小,精密度、准确性均能满足水产品中甲基汞分析。

反相高效液相色谱-荧光法测定血浆中丙泊酚的浓度

目的 :建立反相高效液相色谱 -荧光检测法测定血浆中丙泊酚浓度的方法。方法 :采用ZorbaxEclipseXDB -C18 色谱柱(150mm×4 6mm ,5μm) ,甲醇 -乙腈 -0 005mol/L醋酸钠缓冲液 (pH4 0)=55∶20∶25(V/V)为流动相 ,样品提取分离后用流动相溶解 ,在Ex/Em=276/310nm波长处检测。结果:本法测定的标准曲线在0 015625～8μg/ml浓度范围内线性关系良好(r=0 9998) ,灵敏度为1ng/ml(S/N=3) ,最低检测浓度为10ng/ml,绝对回收率在89 33 %～93 37 %之间 ,方法回收率在97 75 %～103 31 %之间 ,日内、日间变异系数分别为1 38 %～5 02 %、4 45 %～9 056 %。结论 :用本方法检测丙泊酚的血药浓度方便、稳定、灵敏度高 。

酒精度对高效液相色谱-荧光法分析白酒中氨基甲酸乙酯含量的影响

分析酒精度对高效液相色谱-荧光（HPLC-FLD）法测定白酒中氨基甲酸乙酯（EC）含量的影响,建立了快速检测白酒中EC含量的HPLC-FLD分析方法。通过比较不同酒精度下同一EC含量的峰面积,研究酒精度对EC含量测定的影响。结果表明,在5%~65%（v/v）酒精度范围内,酒精度与EC含量（峰面积）具有良好的线性关系,相关系数R2大于0.98,同时建立了不同酒精度间EC含量换算的相对校正系数。该方法在10~500μg/L范围内呈良好的线性关系,R2大于0.999 9,定量限为10μg/L,加标回收率为98.9%~108.2%,相对标准偏差为0.6%~4.9%。评价了HPLC-FLD法的可靠性,将该方法与GC-MS方法比较,结果显示两种方法无明显差异。该方法简单、灵敏、准确,适用于白酒中EC含量的快速测定,具有较好的实际应用价值。

玉米赤霉烯酮的高效液相色谱-荧光法检测技术研究

建立了高效液相色谱-荧光法(HPLC-FLD)定量检测饲料中镰刀菌毒素玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA,又称F-2毒素)的方法。采用层析柱和免疫亲和柱结合净化提取液的方法,确定乙腈-水(体积比为9∶1)为最佳提取溶液,荧光检测的激发波长(λx)和发射波长(λm)分别为274 nm和440 nm。色谱检测条件:流动相为甲醇-水-乙腈(体积比为10∶46∶44);检测波长为激发波长274 nm,发射波长440 nm;柱温25℃,流速0.6 mL.min-1。HPLC-FLD对F-2毒素进行定量分析,线性回归方程为y=1 416 362.246x+2 771.577(R2=1.000 0),加标回收率高达88.74%,检测限为5.7μg.L-1,相对标准偏差低于4.01%;F-2毒素在0.025～0.8μg.mL-1条件下,线性关系良好。结论:HPLC-FLD法精确、灵敏度高,可作为定量检测F-2毒素的有效手段。

反相高效液相色谱荧光法测定氨基酸类神经递质

反相高效液相色谱荧光法测定氨基酸类神经递质顾拥军，倪文，包维丽，程介士（医学神经生物学国家重点实验室，上海医科大学基础医学院神经生物学教研室）谷氨酸（Ｇｌｕ）、门冬氨酸（Ａｓｐ）、γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）、甘氨酸（Ｇｌｙ）、牛磺酸（Ｔａｕ）等氨基酸是...

高效液相色谱-荧光法测定水中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐

建立了水样中甲氨基阿维菌素苯甲酸盐(甲维盐)残留量的柱前衍生高效液相色谱测定方法.水样经乙酸乙酯提取后,运用N-甲基咪唑-乙腈(NMIM-CAN)(1+1)、三氟乙酸酐-乙腈(TFAA-CAN)(1+1)在避光条件下进行柱前衍生化反应,反应20min后,用高效液相色谱-荧光检测器进行测定.结果表明,水中甲维盐添加浓度在0.0001—0.01mg.l-1范围,方法的回收率为78.4%—115.2%,变异系数为3.0%—11.3%,方法的最低定量限为0.0036mg.l-1,方法的灵敏度、精密度和准确度完全满足农药残留分析的要求.甲维盐在巢湖水中的残留量低于该方法的检出限,稻田水中的残留量为0.54mg.l-1.

高效液相色谱-荧光检测器法同时测定乳及乳制品中维生素A和维生素E

目的建立高效液相色谱-荧光检测器法同时测定乳及乳制品中维生素A和维生素E的分析方法。方法样品经水解皂化、液液萃取、蒸发浓缩后,选用PFP色谱柱分离,以甲醇-水(9:1,V/V)等度洗脱,高效液相色谱-荧光检测器检测,外标法定量,计算维生素A、维生素E的含量。结果维生素A和4种维生素E异构体在0.10~5.00μg/ml范围内呈现良好线性,方法检出限为0.0100μg/g、方法定量限为0.0400μg/g,维生素A的平均回收率在85.0%~97.0%之间,RSD≤6.41%(n=6);4种维生素E异构体的平均回收率在84.0%~101%之间,RSD≤7.04%(n=6)。结论本方法简便快速,灵敏准确,可满足乳及乳制品中维生素A和维生素E的同时测定。

高效液相色谱-荧光法测定辣椒素和二氢辣椒素

建立了一种测定辣椒素和二氢辣椒素的反相高效液相色谱荧光法.样品中的辣椒素和二氢辣椒素用乙腈提取,以水和甲醇为流动相梯度洗脱,HP ODS Hypersil(5μm,250 mm×4 mm i.d)柱分离,用荧光检测器(λex=229 nm,λem=320 nm)测定.研究表明辣椒素和二氢辣椒在0.02～125.00 μg/mL范围内,峰面积与待测物的质量浓度呈良好的线性关系,相关系数均为0.9999,相对标准偏差在0.44%和2.74%之间,回收率为80.8%～99.9%.该方法操作简便、快速,适用范围广,重现性好,灵敏度高.