影响高效液相色谱／挥发激光散射检测器检测性能基本因素的考察

影响高效液相色谱／挥发激光散射检测器检测性能基本因素的考察冯埃生邹汉法汪海林李瑞江王学政张玉奎（中国科学院大连化学物理研究所国家色谱研究分析中心大连１１６０１１）挥发激光散射检测器（ＥＬＳＤ）［１～４］是一种通用型的检测器，在国外已受到分析化学家的重...

高效液相色谱-激光蒸发光散射检测法测定低蔗糖食品中葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖含量

建立了同时测定低蔗糖食品中葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的高效液相色谱方法。样品经水超声波浸取,采用HypersilNH2柱分离,以乙腈/水(80/20体积比)为流动相,使用激光蒸发光散射检测器进行检测。结果表明,葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖的线性范围分别为15～1000、20～1500、15～1000、12～1000mg/L;检出限为4.5～6mg/L,样品的加标平均回收率为92.9%～99.0%,相对标准偏差在1.9%～3.5%之间。该法用于实际样品的测定,结果另人满意。

高效液相色谱蒸发激光散射检测苯甲酸雌二醇凝胶含量及其与紫外检测的比较

高效液相色谱蒸发激光散射检测苯甲酸雌二醇凝胶含量及其与紫外检测的比较北京市药品检验所１０００３５田南卉董素英迪马公司应用实验室史曙光张鲲蒸发激光散射检测器（ＥＬＳＤ）是近年来发展起来的，可用于高效液相色谱的一种新型检测器，并在药物分析领域得到一定应用...

凝胶排阻色谱-多角度激光散射法测定破伤风类毒素相对分子质量分布

为更好地表征精制破伤风类毒素(精制TT)相对分子质量分布的情况,利用凝胶排阻色谱与多角度激光散射仪联用法(SEC-MALS法)对精制破伤风类毒素分子质量及其分布进行了初步探索。通过优化实验参数,确定了最佳实验条件:流动相为0.2 mol/L磷酸盐缓冲液-1%异丙醇(pH=7.0)(PBS),样品浓度为2.0 mg/mL,柱温为25℃,流速为0.5mL/min。与聚丙烯酰胺凝胶电泳法相比,SEC-MALS法能够提供准确的精制TT单体分子质量测量值。此外,SEC-MALS法能够得到质均相对分子质量Mw、数均相对分子质量Mn以及二者的比值——多分散性Mw/Mn等重要物理参数,可以更加准确地反映精制TT溶液中单聚体、二聚体、多聚体分布状态,可以量化分子大小批间差异情况,有利于评价精制TT生产过程中的工艺调整或变化对蛋白单体收率的影响,当作为多糖蛋白结合疫苗常用的载体蛋白时,有利于以准确可量化的质量参数参与结合物的关键工艺控制。

高效液相色谱蒸发光散射检测法测定食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖和麦芽糖

目的:建立简便、准确、灵敏的测定食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖和麦芽糖的高效液相色谱蒸发光散射检测方法。方法:样品经水提取,乙腈沉淀,并过C18SPE柱,以乙腈:水(75:25,v/v)为流动相,经Alltech Prevail TM Carbohydrate ES(250×4.6 mm,5μm)柱分离,蒸发光散射检测器检测。结果:果糖、葡萄糖和蔗糖的测定范围分别为:20～320 mg/L、25～400 mg/L和25～400 mg/L,检出限分别为4 mg/L、5 mg/L和5 mg/L,乳糖和麦芽糖的测定范围为50～800 mg/L,检出限为15 mg/L,5种糖的回收率在97.2%～106.4%之间,测定的相对标准偏差在0.56%～2.1%。结论:该法操作简便、快速、准确,适用于多种食品中糖的分析。

联合超高效聚合物色谱和激光光散射法的聚酯分子质量及其分布测定

将超高效聚合物色谱-多角度激光光散射仪(APC-MALLS)联用建立了一种新型测试聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)分子质量及其分布的方法,确定了含三氟乙酸钠的六氟异丙醇(HFIP)作为溶剂和流动相的测试体系;并通过优化样品浓度、流动相流速等测试条件获得了不同特性黏度PET样品的分子质量及其分布。结果表明,所建立的测试方法无需用标准样校正即可获得样品的分子质量,比传统凝胶渗透色谱(GPC)测试方法速度提高4倍以上,重复性实验结果误差小于2%。实验测得特性黏度为0.685、0.884、1.038 d L/g的样品数均分子质量分别为22 700、32 000、41 600,分子质量分布分别为1.62、1.56、1.55。

高效液相色谱-蒸发光散射检测法快速测定益生菌粉中低聚果糖含量

目的建立高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法,快速洗脱分离出蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖,测定益生菌粉中低聚果糖的含量。方法样品经过前处理,以乙腈和水为流动相,等度洗脱,经XAmide(4.6 mm×250 mm,5μm)中性酰胺色谱柱分离,采用蒸发激光检测器检测。结果蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖线性范围分别在0.2671~3.168 mg/m L、0.2429~2.8215 mg/m L、0.1617~3.544 mg/m L,线性相关系数r】0.99。3种主要组成的回收率在97.0%~105.0%之间。结论该方法可有效分离出蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖,推广性高、快速、简便、准确,可用于益生菌粉中低聚果糖含量的测定。

高效凝胶色谱法同时测定眼用粘弹剂中透明质酸钠和硫酸软骨素钠的含量

样品经50mmol·L^(-1) NaH_2PO_4-0.1mol·L^(-1) NaCl混合溶液溶解后,首先采用凝胶渗透色谱与多角度激光光散射联用仪确定透明质酸钠和硫酸软骨素钠的分子量,依据分子量分布确定水凝胶色谱柱(OH pak SB-806HQ L012028与OH pak p8514-804L102028串联)为分离柱,OH pak SB-G G008146为保护柱,流动相采用50mmol·L^(-1) NaH_2PO_4-0.1mol·L^(-1) NaCl混合溶液,流量为0.5mL·min^(-1),以示差折光检测器进行测定。透明质酸钠和硫酸软骨素钠的质量浓度在0.10~1.0g·L^(-1)内与其峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)分别为0.051,0.059g·L^(-1)。加标回收率在83.3%~110%之间,测定值的相对标准偏差(n=6)小于2.2%。

应用高效体积排阻色谱偶联多角度激光散射鉴定猪圆环病毒2型灭活疫苗及病毒样颗粒疫苗抗原

本文旨在建立基于高效体积排阻色谱(high-performance size-exclusion chromatography,HPSEC)偶联多角度激光散射仪(multi-angle laser light scattering,MALLS)的猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)疫苗抗原检测方法。以纯化的PCV2灭活病毒及病毒样颗粒(virus-like particles,VLP)为参照,对4家生产企业的2种PCV2灭活病毒疫苗(a、b)及VLP疫苗(c、d)破乳后进行HPSEC-MALLS检测及分子量分析;结合PCV2抗原检测卡、Western blotting和透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM),鉴定了特征色谱峰;考察了方法的重复性和检测线性。结果表明,两家企业生产的PCV2灭活病毒疫苗破乳液水相经HPSEC分离,在保留时间约13.3 min处出现抗原特征峰;MALLS计算该色谱峰分子量分别为2.61×10^(6)(±4.34%)Da和2.40×10^(6)(±2.51%)Da。两种VLP疫苗也在13.3 min处出现抗原特征峰,分子量分别为2.09×10^(6)(±2.94%)Da和2.88×10^(6)(±11.85%)Da,接近PCV2的理论分子量;同时在保留时间约11.4 min处也出现色谱峰,经检测分子量为4.37×10^(6)(±0.42%)Da,TEM表征显示为VLP二聚体。取疫苗d和PCV2 VLP纯品进行重复检测,抗原色谱峰面积的RSD(n=3)均小于1.5%,重复性好;将PCV2 VLP纯品梯度稀释检测,VLP及其多聚体的色谱峰面积与浓度均呈良好的线性关系,R2分别为0.999及0.997,能够满足定量及多聚体含量分析。该方法有望成为一种准确、高效的PCV2疫苗的体外评价方法,用于质量评价与提升。

高效液相色谱-蒸发光散射检测器联用法测定婴幼儿配方乳粉中胆碱的含量

目的建立一种以高效液相色谱-蒸发光散射检测器联用测定婴幼儿配方乳粉中胆碱含量的方法。方法样品以ZORBAX 300 SCX阳离子交换柱（4.6 mm×250 mm,5μm）分离,用三乙胺水溶液-乙腈（80∶20,V/V）作为流动相洗脱,蒸发光散射检测器检测。结果胆碱的检测限为4μg/ml,线性相关系数（r）为0.998 1,加标回收率在94.98%～100.90%之间,且日内精密度（RSD日内）和日间精密度（RSD_（日间））分别为2.75%和3.12%。结论本方法操作简便、回收率高、准确度好、可缩短试验时间且目标峰峰形窄而对称,适用于对婴幼儿配方乳粉中胆碱的测定。

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定乳制品中低聚果糖的含量

建立以外标法测定乳制品中低聚果糖含量的高效液相色谱-激光蒸发光散射检测法。样品经80%(体积比)乙醇沉淀及超声波提取2～3次重复处理后,采用氨基柱分离,以乙腈/水(70/30体积比)为流动相,使用激光蒸发光散射检测器进行检测。结果表明,蔗果三糖、蔗果四糖的线性范围均为(0.5～10)mg·mL-1,检出限均为150μg·mL-1,样品加标平均回收率96.6%～106.0%,相对标准偏差1.57%～2.84%,该法用于乳饮料样品的测定,结果令人满意。

HPLC、HPLC-MS在经方成分分析及Co-IP、激光共聚焦在经方药理机制研究中的应用

经方用药精妙、临床疗效卓越,为历代医家所尊崇,也是科学研究者的重点研究对象。经方药物组成多样、成分复杂。经方的现代研究面临药理作用机制复杂、有效成分不明确等问题,从而制约了经方在现代医学领域的推广以及国际化的进程。HPLC及HPLC-MS联用技术广泛被应用到药物的分析、质控,同样适用于经方的成分分析。文章介绍了HPLC及HPLC-MS联用技术在经方成分及含量的鉴定中的应用,包括经方样品的前处理、经方成分的定量、定性分析以及经方的药物代谢研究等方面。免疫共沉淀技术可用于检测经方对蛋白之间的相互作用的影响,激光共聚焦技术可用于观察经方对蛋白、离子等的分布、转移的影响。结合免疫共沉淀与激光共聚焦技术,能更好地解析经方药理作用的分子机制,因此,文章对免疫共沉淀及激光共聚焦技术在经方现代药理研究中的应用也进行了介绍。

HPLC-RRS联用技术在抗生素药物分析中的应用及进展

共振瑞利散射(RRS)是近年来发展起来的一种灵敏度高和操作简单的光谱分析技术。高效液相色谱—共振瑞利散射(HPLC-RRS)联用技术是以高效液相色谱为分离手段,以共振瑞利散射为鉴定工具的一种分离分析技术。本文综述了国内近年来高效液相色谱—共振瑞利散射联用技术在抗生素类药物分析中的应用,并对该方法今后的发展进行展望。

竹根七HPLC-ELSD指纹图谱的研究及薯蓣皂苷的含量测定

目的建立陕西"七药"竹根七的高效液相色谱指纹图谱,并测定指标成分薯蓣皂苷的含量。方法Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),蒸发光散射检测器,气体流速2.8 L·min^(-1),漂移管温度95℃。结果建立了竹根七的指纹图谱,确立了12个共有峰,同时测定了指标成分薯蓣皂苷的含量。结论本研究建立的指纹图谱与指标成分测定相结合的分析方法快速、准确,可用于评价竹根七的质量,并为建立竹根七制剂的质量控制方法提供依据。

竹荪多糖提取工艺及抗氧化活性

采用缓冻协同微波法对竹荪中的多糖成分进行提取并进行工艺研究,依次考察缓冻时间、微波功率、液料比、提取时间对多糖得率的影响,在单因素试验基础上,运用响应面设计优化得到最佳提取工艺。利用1,1二苯基2三硝基苯肼(DPPH)自由基清除法、2,2'联氮双(3乙基苯并噻唑啉6磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除法、羟自由基清除法、总还原能力4种试验,对比缓冻协同微波法提取得到的竹荪多糖(PW 1)和单一微波法获得的竹荪多糖(PW 2)的抗氧化活性,并借助高效液相色谱联用多角度激光散射(HPSEC MALLS RI)技术和红外光谱分析多糖初步结构。结果表明:最佳提取条件为缓冻时间16 h、微波功率260 W、液料比53 mL/g、提取时间8 min,在最佳提取条件下,PW 1的得率为11.87%。在4种抗氧化活性试验中,PW 1表现的抗氧化活性比PW 2更强。初步结构分析发现PW 1与PW 2分别是由4个主色谱峰和3个主色谱峰构成,并以α糖苷键连接为主的吡喃型糖,重均分子量均为1.018×10^(6)~14.980×10^(6)g/mol。

光谱仪器

TH744.1 97020852高效液相色谱-火焰原子吸收光谱联用系统其性能考察=Research on the performance of liquidphase chromatograph-flame atomic absorptionspectra system[刊,中]/李寿春,邓勃(清华大学.北京(100084))//光谱仪器与分析.-1995,(3/4).-11-12研究了高效液相色谱-火焰原子吸收光谱联用系统,并以镍的测定为例,考察了联用系统的基本性能。图1表1参1(李瑞琴)

定向采收‘沪农灵芝1号’高三萜和水溶性多糖原料研究

采用超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS/MS)法和高效排阻色谱-多角度激光散射(HPSEC-MALLS)法检测灵芝(Ganoderma lucidum)‘沪农灵芝1号’不同生长期(接种后2~7个月,分别命名为P1~P6)子实体和菌基中三萜和水溶性多糖含量,并结合子实体和菌基的产量计算三萜和水溶性多糖的产量。结果表明:子实体中灵芝酸C2、G含量在P1、P2期较高,灵芝烯酸B和灵芝酸D、F、DM含量在P2期最高,灵芝酸B、A、S、T和总三萜含量在P1期最高;菌基中灵芝酸C2、A、D、DM和灵芝烯酸B含量在P1期最高,灵芝酸G含量在P 5期最高,灵芝酸B、S含量在P 6期最高,灵芝酸F含量在P 1、P 6期较高,灵芝酸T、总三萜含量在P 5、P 6期较高。子实体中灵芝酸C2、G、B、D、F、DM,灵芝烯酸B,总三萜产量在P2期最高;灵芝酸A产量在P3期最高;灵芝酸S、T产量在P1期最高。菌基中灵芝酸C2、G、B、A、D、F、DM,灵芝烯酸B产量在P1期最高;灵芝酸S、T产量在P2期最高;总三萜产量在P1、P2期较高。子实体和菌基中的水溶性多糖含量和产量均在P1期最高。研究结果将为‘沪农灵芝1号’子实体的定向采收提供科学数据和指导。

一种用高效凝胶渗透色谱测试褐藻胶分子量及分子量分布的方法

提出了一种用凝胶色谱与常规检测器检测褐藻胶分子量及其分布的方法。用高效凝胶渗透色谱(GPC)与示差检测器(RID)结合,建立了以普鲁兰标准品为对照的相对重均分子量、相对数均分子量与GPC–MALLS(多角度激光散射)测试的褐藻胶绝对重均分子量、绝对数均分子量间的转换关系,得到了用GPC–RID检测相对分子量计算褐藻胶绝对分子量和多分散系数的方法。结果表明,GPC–RID法经转换公式得到的重均分子量、数均分子量和多分散系数与GPC–MALLS法的相对误差在±12%以内。基于GPC–RID法可较准确地获得褐藻胶的绝对分子量及多分散系数,使用通用检测器可节约仪器投资,降低检测成本。

不同品种葡萄干中糖类成分分析

采用衍生化后GC-MS和HPLC-ELSD对新疆产8个品种葡萄干中糖类成分进行定性和定量分析。通过单因素实验考察提取温度、料液比、提取溶剂对糖类成分提取的影响。结果显示：经比对标准品在相同衍生化和GC-MS条件下的保留时间,8种葡萄干中共检出8种糖（果糖、葡萄糖、甘露糖、蔗糖、肌糖、麦芽糖、半乳糖、D-山梨糖醇）。在乙醇浓度50%,料液质量比1∶8,温度80℃的提取条件下葡萄干中糖的提取率最高。建立了对葡萄干中含量较高的果糖、葡萄糖、蔗糖进行定量检测的HPLC-ELSD方法,方法线性良好（R^2〉0.9992）,精密度（RSD）〈2.0%,回收率92%~109%。8种葡萄干中除索索外,总含糖量均大于690 mg/g,果糖和葡萄糖在各品种葡萄干的糖含量中均占主导地位。

大米直链淀粉分子量分布及分子旋转半径的研究

为了从大米淀粉中有效的分离出直链淀粉,建立直链淀粉分子量的分析方法,从而得出确切的大米直链淀粉分子结构方面的信息,通过使用流变仪控制大米淀粉的升温糊化过程,用浸出法在不同温度下分离出大米直链淀粉,利用高效液相分子排阻色谱（HPSEC）与多角度光散射仪（MALLS）及折光检测器（RI）连用系统,分析了大米直链淀粉的分子量分布和分子旋转半径。得到不同品种的大米淀粉中分离出的直链淀粉的重均分子量范围为3.29×10^5～2.75×10^6。研究表明,90℃以上高温不利于用浸出法从直链淀粉含量低的大米淀粉中分离直链淀粉,当温度低于90℃而高于糊化温度时,各个温度下均可用浸出法分离出直链淀粉,得到的直链淀粉具有十分相似的分子量分布、重均分子量和分子旋转半径。该方法是一种简便、快速的分离大米直链淀粉,并测定其分子量的方法,具有较高的准确性。