连朴饮基准样品高效液相色谱指纹图谱建立及化学成分鉴定

采用高效液相色谱(HPLC)技术建立连朴饮(LPD)基准样品的指纹图谱,并对其中的化学成分进行分析。该实验使用Welch Ultimate®XB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.1%磷酸溶液作为流动相,梯度洗脱,检测波长为254 nm,柱温为30℃,体积流量为1.0 mL/min,进样量为10μL。通过相似度评价、聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对不同批次连朴饮进行质量评价。运用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术,识别连朴饮中的化学成分。结果表明,15批连朴饮基准样品与对照指纹图谱的相似度均高于0.9,连朴饮基准样品HPLC指纹图谱方法学验证良好。确定23个共有峰,指认8个成分,分别为3号峰栀子苷、7号峰表小檗碱、8号峰盐酸黄连碱、11号峰盐酸小檗碱、12号峰盐酸巴马汀、19号峰染料木素、21号峰和厚朴酚和22号峰厚朴酚。通过聚类分析和主成分分析2种化学模式识别方法,将15批基准样品划分为3类,结果互相印证。主成分1-4是影响其质量评价的主要因子,OPLS-DA共确定12个差异标志物。在连朴饮中鉴定出了91个化合物,主要包含环烯醚萜类、有机酸类、黄酮苷类、黄酮类和异黄酮类、生物碱类、木脂素类和氨基酸类。建立的连朴饮基准样品HPLC指纹图谱方法简单且稳定性、重复性良好,与质谱检测方法相结合,可为其后续制剂开发和质量控制研究提供参考。

超高效液相色谱-电喷雾离子化-四级杆飞行时间串联质谱指纹图谱检测毒蕈中4种鹅膏肽类毒素

建立了基于超高效液相色谱-电喷雾离子化-四级杆飞行时间串联质谱技术(UPLC-ESI-Q-TOF)的4种鹅膏肽类毒素特征信息的色谱和质谱指纹图谱和分析鉴定方法。样品用含0.1%TFA的甲醇溶液提取后,再用Oasis HLB固相柱净化,洗脱液经UPLC HSS T3色谱柱分离后,采用ESI-TOF MS和ESI-Q-TOF MS2进行测定;建立了包含毒素准分子离子准确质量数及其同位素特征,以及二级质谱特征子离子信息的指纹图谱;方法定量测定的线性范围在50～1000μg/L,相关系数在0.9974～0.9985之间;4种毒素的检出限均为10μg/L;定量限为50μg/L;加标回收率在68.2%～88.2%之间;相对标准偏差为7.2%～11.8%。对采集的20余种野生菌样品进行分析,有5种样品检测出含有毒素。本方法快速、准确、选择性好、特异性强,适用于突发毒蕈中毒事件样品中α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽、羧基二羟鬼笔毒肽的确证分析。

高效液相色谱-电化学检测指纹图谱鉴别3种单花种蜂蜜花源

基于高效液相色谱-电化学检测器(high performance liquid chromatography-electrochemical detection,HPLC-ECD)技术建立一种新的蜂蜜花源鉴别方法。以采自中国不同地区的3种单花种蜂蜜为研究对象,构建了3种单花种蜂蜜的HPLC-ECD指纹图谱,提取HPLC-ECD图谱共有峰面积信息并应用主成分分析和系统聚类分析进行蜂蜜花源分类,并对完全未参与建模的蜂蜜样品进行验证。结果表明,45个蜂蜜样品(枸杞蜜、荆条蜜、荔枝蜜各15个),均可通过主成分分析和系统聚类分析按照其花源正确分类,正确率达到100%。该蜂蜜花源鉴别的模型对完全未参与建模的枸杞蜜、荆条蜜和荔枝蜜样品的正确预判率可达到100%、80%和100%。研究表明,HPLCECD指纹图谱技术应用主成分分析和系统聚类分析可以作为一种快速、准确、绿色的判别蜂蜜花源的方法。

高效液相色谱-飞行时间-串联质谱和随机森林算法的蜜炙百合与生百合指纹图谱研究

采用指纹图谱结合化学计量学对不同产地蜜炙百合与生百合质量进行评价。收集23批不同来源的蜜百合与生百合进行高效液相色谱(HPLC)分析,运用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2004药典版)建立两类百合对照指纹图谱,采用随机森林算法对其进行判别分析,筛选其主要差异性组分;并利用HPLC-飞行时间-串联质谱(TOF-MS/MS)法对差异峰进行鉴别。结果显示23批不同来源蜜炙百合与生百合共获得13个共有峰;利用随机森林算法准确地分辨了蜜炙百合与生百合,发现王百合苷D和王百合苷B对分辨两类百合具有重要贡献。

五指毛桃指纹图谱的高效液相色谱-质谱联用研究

建立了高效液相色谱-电喷雾串联质谱(HPLC-ESI-MSn)法确定五指毛桃指纹图谱的方法.采用C18柱,水(A)-甲醇(B)溶液为流动相,梯度程序洗脱.4个产地的五指毛桃样品分离得到16个"共有峰",通过质谱鉴定出10种成分,通过样品"共有峰"含量及特征峰,以评价不同产地五指毛桃的优劣,并为五指毛桃药材的质量控制标准提供参考.

超高效液相色谱-质谱联用技术在中药指纹图谱中的应用

作为一种新的现代技术分析手段,超高效液相色谱-质谱（ultra performance liquid chromatography-mass spectrome-try,UPLC-MS）联用技术在分离效能、灵敏度和专属性等方面都有着巨大的优势,展现出强大的定性、定量分析能力,从而在药物分析特别是中药分析得到广泛的运用。中药是世界医药宝库中的瑰宝之一,尽管中药的现代化取得了一定的进展,但与中药走出国门的迫切要求尚有差距。中药指纹图谱技术是目前公认的中药质量控制的有效方式之一,而中药质量控制现代化又是中药现代化、迈出国门的关键之一[1]。本文综述了近几年使用超高效液相色谱-质谱联用技术在中药指纹图谱领域所取得的进展,以期为中药指纹图谱的深入研究提供线索和参考。

沉香的高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱数字化指纹图谱研究

采用高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用(HPLC-Q-TOF-MS)技术,研究构建了一种沉香数字化色谱-质谱指纹图谱的新方法。沉香药材经乙醇提取后,采用HPLC-Q-TOF-MS测定,并同时采集HPLC-Q-TOF-MS及液相色谱-紫外数据,得到液相色谱-紫外检测(HPLC-UV)色谱图和高分辨飞行时间质谱(TOF-MS)总离子流色谱图。对色谱图中的各个色谱峰进行精确质量数识别,建立数字化指纹图谱,以精确质量数结合保留时间表征沉香中的化学成分,即为每个色谱峰给出具有唯一性的数字信息,以数字化的形式反映其化学成分,并根据精确质量及同位素推算出分子式,结合二级质谱及文献资料共鉴定出30个化学成分。该方法对沉香的每种化学成分给出了类似于身份认定的数字化信息,具有唯一性,能全面反映沉香的物质成分,可为沉香的药理、药效及质量标准研究提供科学的数据。

高效液相色谱-二极管阵列检测法指纹图谱和聚类分析用于黄芪质量评价

目的建立黄芪及相关药材的高效液相色谱-二极管阵列检测法(HPLC-DAD)色谱指纹图谱,采用相似度计算和聚类分析的方法评价药材质量。方法色谱柱:Agilent Zorbax SB C18柱(4.6mm×250.0mm,5.0μm);流动相为A相为乙腈-甲醇(体积比9:1),B相为水,梯度洗脱,流速1.0ml/min,柱温25℃,检测波长260nm,进样量20μl。进行方法学考察,并进行相似度计算和聚类分析。结果黄芪药材HPLC-DAD色谱指纹图谱的稳定性、精密度和重复性良好,可以标定11个共有峰,黄芪药材相似度计算结果均大于0.85,聚类分析结果与其一致。结论相似度计算和聚类分析方法均可以有效区分黄芪药材及其相关样品,使指纹图谱具有广泛的实用性和应用前景。

黄芪药材高效液相色谱-二极管阵列检测法指纹图谱最佳检测波长的选择

目的选择黄芪药材高效液相色谱-二极管阵列检测法(HPLC-DAD)指纹图谱的最佳检测波长。方法提取可用于评价指纹图谱质量的相关信息数据,借助化学计量学的方法对峰数、分离度之和、相对峰面积之和、互信息ФA和互信息ФB等指标参数进行比较和分析。结果在260 nm波长下峰数、分离度之和、相对峰面积之和、互信息ФA和互信息ФB参数值分别为30(17)、190.43、4.19、2.48、737.23,均优于249 nm和280 nm波长条件下相应的参数值。结论从化学计量学方法确定的指标参数结果确定260 nm为黄芪中黄酮类成分指纹图谱的最佳检测波长,可以为HPLC-DAD指纹图谱最佳检测波长的选择提供可靠依据。

中药黄酮类成分高效液相色谱-二极管列阵检测法指纹图谱研究进展

近年来,国内许多药学和相关学科的科研人员对指纹图谱分析技术进行了大量研究,指纹图谱分析技术在中药质量标准评价体系中的作用和地位已达成了广泛共识。

杏香兔耳风高效液相色谱-光电二极管矩阵检测器法的指纹图谱研究

目的研究用高效液相色谱-光电二极管矩阵检测器法(HPLC-PDAD)建立杏香兔耳风指纹图谱的分析方法,为杏香兔耳风的质量鉴定提供依据。方法色谱条件为:色谱柱为Nucleosil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-缓冲溶液(乙酸-NaH2PO4,0.1 mol/L,pH=2.5)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长356 nm。结果用上述方法确定了12批不同品种杏香兔耳风的11个共有峰,其相识度均大于0.91,精密度、稳定性、重复性试验、各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于2.5%,各色谱峰分离效果良好,符合指纹图谱要求。结论该方法精密度、稳定性和重复性均较好,为杏香兔耳风的质量控制标准提供了参考。

基于超高效液相色谱-质谱红花药材指纹图谱的建立

以红花为研究对象,建立超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)指纹图谱分析方法,为红花药材质量鉴别提供借鉴.通过考察检测波长、梯度洗脱条件、提取溶剂、提取方法等因素,在最优条件下对20个产地的红花样品进行分离分析.色谱柱:Thermo Hypersil Gold C 18,100 mm×2.1 mm,1.9μm,流动相:0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B);流速:0.3 mL/min;柱温:30℃;检测波长:270 nm;进样量:2μL,质谱条件:鞘气流速:45 arb,辅助气流速15 arb,雾化电压:3.3 KV,离子传输管温度:350℃,辅助气加热温度:400℃.试验结果:共确定了67个共有峰,通过UPLC-MS指认了其中11个共有峰,对20批不同产地的红花药材指纹图谱进行了相似度评价,其相似度在0.687~0.971之间.建立的UPLC-MS指纹图谱可为红花药材的质量控制提供参考依据.

基于偏最小二乘法-判别分析算法分析五味子不同炮制品高效液相色谱指纹图谱的变化

目的建立五味子不同炮制品高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并对其进行偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)。方法色谱柱为Agilent Polaris Amide-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为250 nm,进样量为10μL。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012A版进行相似度分析,通过PLS-DA算法对炮制前后五味子指纹图谱进行分析。结果建立了五味子炮制前后的HPLC指纹图谱共有模式,五味子及其炮制品醋五味子与酒五味子指纹图谱中共有峰分别有19个和21个;经相似度分析,与对应对照指纹图谱相似度均大于0.9;经与对照品比对,指认出6个化合物;且PLS-DA分析筛选出6号峰(5-羟甲基糠醛)、8号峰(五味子醇甲)、18号峰、10号峰(五味子甲素)、5号峰和19号峰为主要差异标志物。结论该方法可用于五味子、醋五味子及酒五味子的指纹图谱分析,为完善五味子的质量标准提供了参考。

返魂草的高效液相色谱法指纹图谱研究及成分分析

采用高效液相色谱法,建立了返魂草的指纹图谱,并与相同条件下获得的同属植物千里光图谱进行了比较;通过液相色谱-质谱联用法及与对照品比照研究,对其5种共有成分进行了鉴定;并对以上成分的含量进行同步测定。结果表明,此指纹图谱能够用于区分返魂草及其混淆品千里光;5种成分在各自的浓度范围内线性关系良好(r=0.9995～0.9998),10批样品中原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸、金丝桃苷、异槲皮苷含量分别为0.03～0.07 mg/g,0.10～1.04 mg/g,0.01～0.05 mg/g,0.07～0.35 mg/g和0.02～0.74 mg/g。本方法可用于返魂草的鉴别及药材的质量评价。

5-硝基间苯二甲酸甲酯工业品的高效液相色谱指纹图谱的建立

建立了5-硝基间苯二甲酸单甲酯和5-硝基间苯二甲酸二甲酯共享的高效液相色谱-紫外光谱的指纹图谱。在反相C18色谱柱上,以甲醇-水-0.1%高氯酸水溶液为流动相,对5-硝基间苯二甲酸单甲酯和5-硝基间苯二甲酸二甲酯及其相关杂质进行分离测定。通过运行大量样品,绘制具有共同特性的指纹图谱。根据待测样品色谱峰的保留时间、紫外光谱及其峰面积,与色谱指纹图谱进行分析对比,建立了工业品5-硝基间苯二甲酸单甲酯和5-硝基间苯二甲酸二甲酯质量控制的新方法。

高效液相色谱-紫外光谱法建立3,5-二硝基苯甲酸工业品的色谱指纹图谱

建立了3,5-二硝基苯甲酸工业品的高效液相色谱-紫外光谱的指纹图谱。首先,在Kromasil C_(18)色谱柱上,以水-甲醇-0．10%高氯酸水溶液(体积比为25:45:30)为流动相,流动相流速1．0 mL/min,检测波长254 nm,对3,5-二硝基苯甲酸及其相关杂质进行了分离分析。在此基础上,通过运行大量样品,筛选共有组分,绘制具有共同特性的指纹图谱。根据待测样品色谱峰的保留时间、紫外光谱及其色谱峰面积,与色谱指纹图谱进行分析对比,建立了控制3,5-二硝基苯甲酸产品质量的新方法。该方法在产品含量测定方面结果准确、可靠,在产品质量控制方面直观、方便。阐述了“整体性”和“明确性”是精细化工中间体指纹图谱的基本属性和发展方向。

蛇床子药材的高效液相色谱指纹图谱

采用液相色谱-质谱联用技术对蛇床子药材的活性成分进行定性分析,建立评价其质量的指纹图谱分析方法。采用Shimadzu C18色谱柱,以乙腈-0.1%醋酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速为1.0 mL.min-1,检测波长为245 nm和322 nm,测定了35批不同来源的蛇床子药材的HPLC-UV指纹图谱以及其中4批代表性药材的HPLC-DAD-MS图谱。根据指纹图谱相似度分析结果,将蛇床子药材分为4类;利用HPLC-DAD-MS技术分析了4类药材化学组成上的异同,分别在4类药材中指认了8个,7个,4个和2个香豆素类成分。提示本方法可用于蛇床子药材的指纹图谱测定,并可为其质量评价提供可靠依据。

原料奶的高效液相色谱指纹图谱的建立

采用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)技术,在负离子扫描模式下建立了原料奶的乙腈提取成分的指纹图谱。采用乙腈和0.1%的乙酸水溶液为流动相进行二元梯度洗脱,柱温30℃,分析时间为85min。确定了11个共有峰,以其中的7号峰为参照物,通过相对峰面积和相对保留时间进行了方法学考察。结果表明,本方法具有良好的重现性,各指纹峰相对保留时间的相对标准偏差(RSD)小于0.79%,相对峰面积的RSD小于2.84%。在原料奶指纹图谱基础上,选取有代表性的危害物如防腐剂苯甲酸等进行了添加,建立了危害物添加图谱,对沈阳地区超市的50个纯牛奶样品进行了筛查,取得初步的应用结果。

广陈皮高效液相色谱陈化特征图谱研究

【目的】建立广陈皮的高效液相色谱(HPLC)陈化特征图谱。【方法】采用HPLC-二极管阵列检测器(DAD)技术分析不同年份广陈皮之间的成分差异,测定各差异色谱峰的相对峰面积,通过聚类分析对其进行陈化等级分类,并通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012A版)进行评价。【结果】不同年份广陈皮被聚为Ⅰ、Ⅱ类两个不同的陈化等级,Ⅰ类(低陈化等级)广陈皮的相似度为0.708~0.957,Ⅱ类(高陈化等级)广陈皮的相似度为0.734~0.976,且两者之间的相似度均低于0.6。建立的特征图谱中存在9个差异色谱峰;Ⅱ类广陈皮的对照特征图谱T2可视为其陈化特征图谱,其中1~4号峰、9号峰为陈化特征峰。【结论】建立的广陈皮陈化特征图谱操作简单,具有良好的重复性与可靠性,可用于不同年份广陈皮的质量评价。

金叶子二萜类化学成分高效液相色谱-蒸发光散射检测法指纹图谱研究

目的建立测定金叶子药材二萜类化学成分的高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法指纹图谱,并对其共有峰进行分离鉴定。方法色谱柱为Ecosil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测器为ELSD检测器,柱温为30℃。采用硅胶、反向(RP)硅胶C18柱色谱等方法对特征图谱中的共有峰化合物进行分离,应用质谱、核磁共振等方法进行结构鉴定;参照各对照品的色谱行为,对共有峰进行归属和指认。结果11批金叶子药材的相似度在0.926~0.999之间;确定了8个共有色谱峰,并指认了4个色谱峰,分别为craiobioside B,grayanoside B,g rayanoside C,paniculosideⅣ,其中paniculosideⅣ为首次从金叶子中分离得到。结论所建立的金叶子二萜类化学成分高效液相色谱指纹图谱灵敏度高,专属性强,重复性好,可为金叶子药材的质量控制提供参考。