基于超高效液相色谱-质谱联用技术的慢性肾脏病骨代谢异常大鼠血清代谢组学研究

目的 通过超高效液相色谱-质谱(UHPLC-MS)联用技术探索慢性肾脏病骨代谢异常(CKD-BD)大鼠血清代谢组学变化。方法 该研究于2021年1月至2022年4月进行,选择16只8周龄SPF级SD雄性大鼠经过1周适应性喂养后,采用随机数字表法分为两组,每组8只。健康对照(NC)组:使用普通大鼠饲料喂养90 d;CKD-BD组:采用高磷高腺嘌呤饲料喂养60 d之后更换高磷饲料喂养30 d后处死,并通过生化检测及骨形态计量学方法对模型进行验证。造模成功后通过UHPLC-MS比较CKD-BD组大鼠与NC组大鼠血清代谢产物变化,通过多元统计分析等方法鉴定两组间差异代谢物,并通过生物信息学方法对差异代谢产物进行功能注释。结果 与NC组大鼠相比,CKD-BD组大鼠血肌酐、血磷显著升高,血钙显著降低(P<0.01)。骨形态计量学检测NC组大鼠骨矿化沉积率(MAR)为(1.90±0.61)μm/d,CKD-BD组大鼠MAR为(2.80±0.73)μm/d,差异有统计学意义(P<0.05)。NC组大鼠骨形成率/骨体积(BFR/BV)为(0.41±0.20)%/d,CKD-BD组大鼠BFR/BV为(1.25±0.41)%/d,差异有统计学意义(P<0.05)。代谢组学检测结果提示,与NC组相比,CKD-BD组糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白合成等通路上调。自噬、胆汁酸合成分泌、胆固醇代谢、牛磺酸和次级牛磺酸代谢、甘油磷脂代谢等通路下调(P<0.05)。结论 通过UHPLC-MS技术比较CKD-BD大鼠与正常大鼠血清代谢产物,发现CKD疾病状态下血清代谢产物发生变化,CKD-BD组糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白合成通路上调,与自噬相关的代谢通路下调,这些可能参与了CKD-BD发生。

基于高效液相色谱-质谱联用的千里光治疗寻常型银屑病网络药理学分析

目的:探究千里光治疗寻常型银屑病的成分-靶点-通路作用机制,为其进一步研究提供依据。方法:使用高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)检测千里光入血成分;在TCMIP数据库中检索千里光入血成分靶点,并在OMIM、DrugBank、GeneCards、TTD数据库中检索寻常型银屑病靶点,绘制Venn图取两者交集靶点;使用String构建交集靶点蛋白-蛋白相互作用网络,使用Cytoscape 3.8.2构建千里光核心入血成分-交集靶点网络,使用Metascape进行基因本体(GO)功能及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;使用AutoDockTools1.5.7进行分子对接,并用PyMOL实现可视化。结果:共得到千里光入血成分50个,其中核心入血成分9个。核心入血成分靶点85个,寻常型银屑病靶点1 175个,两者交集靶点18个。蛋白互作网络得到关键靶点HSP90AA1、ESR1、AKT1,千里光核心入血成分-交集靶点网络得到主要成分山柰酚、槲皮素,KEGG富集分析得到PI3K-Akt等关键信号通路,GO富集分析中生物过程主要涉及对激素的反应、对炎症反应的调节、细胞对脂质的反应等,细胞组成主要涉及转录调控复合体、囊泡腔、分泌颗粒腔等,分子功能主要涉及激酶结合、蛋白激酶结合、蛋白激酶活性等。山柰酚、槲皮素与核心靶点AKT1分子对接结合能分别为-6.59 kcal/mol、-6.67 kcal/mol。结论:千里光核心入血成分山柰酚、槲皮素可能通过AKT1靶点,作用于PI3K-Akt信号通路发挥对寻常型银屑病的治疗作用。

超高效液相色谱-质谱法鉴别蛤蚧定喘丸中的龟鳖甲类成分

目的建立蛤蚧定喘丸中龟鳖类成分的检测方法。方法借鉴动物类药材特征肽鉴别方法,采用胰蛋白酶对不同批次的蛤蚧定喘丸样品进行酶解,利用超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS/MS)法,选择龟鳖类特征分子离子峰作为检测离子对,ESI+模式,进行多反应监测模式检测。结果8家生产企业共51批蛤蚧定喘丸样品中均检出鳖甲成分,未检出其他龟鳖源成分。结论该方法专属性较好,可用于蛤蚧定喘丸中龟鳖类成分掺伪检测。

超高效液相色谱-质谱联用快速测定玉米及其产品中11种生物毒素

采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用法,建立玉米籽粒中11种生物毒素的快速检测方法。样品用体积分数80%乙腈提取,HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)分离,以体积分数0.1%甲酸甲醇-5 mmol/L乙酸铵体积分数0.1%甲酸水为流动相梯度洗脱,质谱采用电喷雾离子源(electrospray ionization,ESI),正、负离子模式下,多重反应监测(multiple reaction monitoring,MRM),外标法定量。11种生物毒素在一定的浓度范围内均具有良好的线性关系,相关系数r值均大于0.9995,定量限均小于0.001 mg/kg。在0.001~2.0 mg/kg添加水平下,每个添加水平做5个重复,平均回收率为72%~88%,相对标准偏差在0.8%~13.4%。该方法测定玉米籽粒中11种生物毒素定量准确,快速高效,具备较强实用性。

超高效液相色谱-质谱联用同时测定旋覆代赭汤中15种成分含量

目的 建立同时测定旋覆代赭汤中15种成分含量的超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS/MS)方法。方法 采用Shim-pack GIST C18(2.1 mm×100 mm,2.0μm)色谱柱,流动相用乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1),柱温35℃。采用ESI源,以MRM负离子模式检测。结果 甘草苷、甘草酸、甘草素、异甘草素、异甘草苷、芹糖异甘草苷、新甘草苷、绿原酸、隐绿原酸、阿魏酸、异绿原酸A、异绿原酸C、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re和6-姜辣素在各自浓度范围内线性关系良好(r> 0.998 6),平均回收率在97.0%~103.1%,精密度、重复性、稳定性均符合要求。结论 建立的方法简单、准确性好,可为旋覆代赭汤及其制剂的质量控制提供参考。

高效液相色谱-质谱联用法测定喉症丸中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基

建立高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)测定喉症丸中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量的方法。采用HPLC-MS正离子多反应监测模式进行测定,色谱柱为Thermo Hypersil BDS C18(250.0 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-1%乙酸溶液(38∶62),流速为0.5 mL/min,检测波长为296 nm,柱温为20℃。质谱条件:鞘气流速40 arb,辅气流速5 arb,喷雾电压4.5 kV,毛细管温度300℃。结果显示,华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的检测质量浓度线性范围均为50~300μg/mL(r=0.9992),重复性试验、精密度试验、稳定性(12 h)试验的RSD均小于1.00%(n=5或n=6),加样回收率分别为101.8%(RSD为2.61%,n=6)和100.9%(RSD为3.20%,n=6)。该方法灵敏度高、重复性好,能准确测定喉症丸中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量,可用于喉症丸的质量控制。

高效液相色谱-质谱联用法在头孢唑肟钠中基因毒性杂质控制的应用

目的:建立高效液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS)测定头孢唑肟钠中基因毒性杂质2-巯基苯并噻唑(MBT)的含量。方法:采用Waters BEH C 18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm),以0.01 mol·L^(-1)乙酸铵溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1),柱温为30℃,自动进样器温度4℃,进样体积为10μL。质谱检测器采用电喷雾离子源(ESI),在正离子多反应监测(MRM)模式下通过对定量子离子(质荷比168→135)扫描测定MBT。结果:MBT在浓度2.9607~394.7640 ng·mL^(-1)范围呈良好的线性关系(r=0.9999);平均回收率为95.05%,RSD为1.53%(n=9)。结论:本方法专属性强、准确、灵敏且耐用性良好,适用于测定头孢唑肟钠中MBT含量,为该产品临床应用安全提供保障。

高效液相色谱-质谱联用法测定鸡蛋中三甲胺含量的方法研究

研究旨在建立鸡蛋中三甲胺含量的定量分析方法——高效液相色谱-质谱联用法,对比选用5%三氯乙酸水溶液作为提取剂提取鸡蛋中的三甲胺,经冰浴超声萃取、高速离心过滤,再经固相萃取小柱净化,最后通过高效液相色谱-质谱联用法测定三甲胺浓度,并通过测定基质抑制率对检测值进行校准。结果显示:鸡蛋中的三甲胺在0~200 ng·mL^(-1)范围内线性相关,r=0.9994,其基质抑制率为13.36%,方法检出限为7.18μg·kg^(-1)。说明所建立的方法精密度、检出限、稳定性均符合试验要求,可满足鸡蛋中三甲胺含量测定的要求。

初探高效液相色谱-质谱联用技术在食品安全中的应用

食品安全直接与人类的健康息息相关,食物中的污染物、有害细菌、病原体和毒素可能导致食物中毒、胃肠疾病和其他健康问题。近几年,重大食品安全事件的频频发生以及消费者对安全食品的需求,使得食品安全问题成为全世界瞩目的热点,因此,应用现代化的分析技术,研究建立快速准确的食品安全分析方法势在必行。基于此,本文从高效液相色谱-质谱联用技术的原理出发,分析了高效液相色谱-质谱联用技术的优点,阐述了高效液相色谱-质谱联用技术在食品安全中的应用,旨在为我国食品安全的检测和分析提供参考。

基于超高效液相色谱-质谱技术的异绿原酸B大鼠体内代谢及排泄研究

目的采用超高效液相色谱-质谱法探究异绿原酸B在大鼠体内的代谢和排泄情况。方法按20 mg·kg-1剂量大鼠灌胃给予异绿原酸B,收集给药前后不同时间点的粪便、尿液、血浆样品,处理后样品经超高效液相色谱-质谱技术进行分析检测。结果根据样品色谱和质谱图分析获得相关化合物的保留时间、质荷比、特征碎片离子再结合相关文献报道,最终22种代谢产物从大鼠粪便、尿液、血浆中被检测出,其中粪便18个、尿液3个、血浆1个。主要代谢途径包括水解、氢化、甲基化、硫酸化等。进一步测定了异绿原酸B及其代谢产物绿原酸在粪便和尿液中的累计排泄量。结论阐明了异绿原酸B在大鼠体内的代谢和排泄情况,为异绿原酸B进一步研究提供实验依据。

基于超高效液相色谱-质谱联用法的过敏煎、加味过敏煎大鼠血清差异代谢物分析

目的基于非靶代谢组学研究过敏煎、加味过敏煎中药复方灌胃给药后大鼠血清中两复方的主要差异代谢物,为进一步研究加味过敏煎缓解瘙痒机制提供基础。方法基于超高效液相色谱-质谱联用技术,通过对过敏煎含药血清、加味过敏煎含药血清进行主成分分析、正交偏最小二乘法-判别分析等方法进行数据模式识别,并根据差异倍数>1.2或<0.83,变量投影重要度>1且P<0.05为筛选标准,筛选出差异代谢物;利用MetaboAnalyst 5.0对差异物进行通路分析及富集分析。结果共筛出173个差异代谢物;通路分析得出2条相关通路:苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成通路及维生素B6代谢通路;富集到2个差异代谢物:酪氨酸和吡哆醇。结论过敏煎、加味过敏煎含药血清最主要的血清差异代谢物可能为酪氨酸及吡哆醇,加味过敏煎的瘙痒治疗优势,可能跟酪氨酸、吡哆醇有关。

三重四级杆高效液相色谱-质谱联用仪的维护与故障处理探讨

液质联用仪作为未知物质或复杂混合物质中目标物定性和定量分析的重要工具,已成为各大高校科研工作必不可少的大型精密仪器,具有“使用人员多、测试样品广、运行时间长、管理难度大”的特点。目前液质联用仪的管理痛点在于操作者技术不到位使得仪器非正常损耗和故障率明显增多,而且管理员维护维修知识匮乏导致投入的时间金钱与成果产出不成正比。现以三重四级杆高效液相色谱-质谱联用仪为例,解析如何对输液、进样、分离、检测和真空这五大系统进行日常维护,探讨常见故障的处理办法,提出通过加强培训和管理确保仪器正常、安全、高效运作,更好地为科研和教学服务。

丹皮药材的高效液相色谱-质谱/质谱研究

采用高效液相色谱-质谱/质谱建立了丹皮药材的指纹图谱方法。丹皮药材中的主要成分得到较好分离,指纹峰重现性好,通过多维联用技术获得各指纹峰的保留时间、分子量及结构信息,推测出15个指纹峰的可能组成。结果表明:所建立的丹皮指纹图谱信息量丰富,对丹皮药材的化学表征及质量评价有重要的参考价值。

高效液相色谱-质谱联用技术在食品中的应用

本文综述了高效液相色谱-质谱联用技术(High Performance Liquid Chromatography,HPLC-MS)在食品分析中的重要性以及其广泛应用的领域,详细介绍了HPLC-MS技术的原理及其在分析中的优势,并通过具体实例深入探讨了HPLC-MS在食品领域的多方面应用,包括对食品营养成分的鉴别、农兽药残留的检测、对潜在威胁如过敏原和生物胺的分析,以期HPLC-MS在食品分析领域有更广泛、深入的应用。

基于超高效液相色谱-质谱技术及网络药理学和分子对接探讨柴芍胃炎颗粒治疗慢性胃炎的有效成分及潜在作用机制

目的通过超高效液相色谱-串联质谱技术(UPLC-HR-MS)对柴芍胃炎颗粒的化学成分进行分析,同时采用网络药理学探讨柴芍胃炎颗粒治疗慢性胃炎的作用机制。方法采用UPLC-HR-MS检测柴芍胃炎颗粒的化学成分。借助中药系统药理数据库和分析平台(TCMSP)对柴芍胃炎颗粒的有效成分进行检索,通过OMIM、Drugbank、DisGeNET、GeneCards数据库获取胃炎的相关靶点,构建“中药-有效成分-治疗靶点”网络。借助STRING数据库构建蛋白相互作用网络(PPI)。借助RStudio软件对潜在治疗靶点进行GO富集分析。运用Discovery Studio软件进行分子对接。构建柴芍胃炎颗粒中药-归经网络图。结果通过筛选得到柴芍胃炎颗粒治疗胃炎的潜在治疗靶点134个,其中AKT1、IL6、TNF、TP53、IL1B、CASP3、JUN、PTGS2、MMP9、STAT3等靶点起着重要作用,主要涉及到脂质与动脉粥样硬化信号通路。中药-归经网络图表明柴芍胃炎颗粒的主要作用部位在脾、肝、胃。结论柴芍胃炎颗粒可以通过多成分、多靶点、多途径对胃炎产生治疗作用,为其治疗胃炎的作用机制提供新思路。

内标高效液相色谱-质谱/质谱法同时测定蜂蜜中甲硝唑和氯霉素残留量

建立了高效液相色谱-质谱/质谱法同时检测蜂蜜中甲硝唑和氯霉素残留量的方法。样品加入混合内标后,加入水溶解,用乙酸乙酯作为提取液,固相萃取柱净化进行对比,使用C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.6μm)分离。甲硝唑采用正离子扫描模式,氯霉素采用负离子模式,应用多反应监测模式,内标法定量。结果显示,氯霉素浓度在0.5~20.0 ng·mL^(-1),甲硝唑浓度在1~100 ng·mL^(-1)时,线性关系均良好,相关系数r均大于0.99。方法一处理下,氯霉素的平均回收率在93.5%~111.0%,甲硝唑的平均回收率在97.0%~100.0%,RSD均小于10%。氯霉素和甲硝唑的检出限均为0.10μg·kg^(-1),定量限分别为0.36μg·kg^(-1)、0.50μg·kg^(-1)。通过内标法定量,达到消除基质效应的效果,能满足蜂蜜中甲硝唑和氯霉素残留量的监测要求。

超高效液相色谱-质谱法同时检测龟鹿补肾丸中龟甲胶、鹿角胶成分

建立检测龟鹿补肾丸中龟甲胶、鹿角胶成分的超高效液相色谱-质谱方法。恒温酶解样品中的胶类特征性肽段,采用超高效液相色谱-质谱识别技术分别对龟甲胶和鹿角胶进行鉴别,ESI+电离模式进行多响应监测。结果表明,本方法重复性好,精密度和稳定性考察RSD均小于6.0%,龟甲胶及鹿角胶检出限分别为0.02 mg/mL和0.01 mg/mL。用建立的检测方法测定6批次龟鹿补肾丸样品,均检测出了龟甲胶及鹿角胶特征性成分。说明该方法简便准确,灵敏度高,适用性强,可为龟鹿补肾丸中胶类成分的质量管控提供依据。

高效液相色谱-质谱/质谱法测定凉茶中麻黄碱和伪麻黄碱

应用高效液相色谱-质谱/质谱法测定凉茶中麻黄碱和伪麻黄碱,经Kinetex®C_(18)柱(100 mm×2.1 mm,2.6μm)柱进行梯度分离,麻黄碱和伪麻黄碱在1~10 ng·mL^(-1)具有良好的线性关系,相关系数R^(2)>0.999,检出限为5μg·kg^(-1),定量限为10μg·kg^(-1),3水平加标(20μg·kg^(-1)、50μg·kg^(-1)、80μg·kg^(-1))回收率为90.0%~95.8%,精密度均小于10%(n=6)。该方法快速、准确度高、灵敏度高、分离效果好。

超高效液相色谱-质谱联用仪测定谷物中增效醚的研究

本试验建立了超高效液相色谱-质谱联用仪测定谷物中增效醚的方法。研究了色谱/质谱条件、提取溶剂及净化方法等对增效醚回收率的影响。结果表明:该方法的线性范围1~200 ng/mL,线性相关系数为0.998,检出限为10μg/kg,平均加标回收率68.2%~106.7%,相对标准偏差(RSD)均小于4.2%。

超高效液相色谱-质谱联用技术测定茶叶中8种单、寡糖的含量

建立同时定性和定量分析茶叶中鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖、葡萄糖、蔗糖和棉子糖8种单、寡糖的超高效液相色谱-质谱联用方法。样品经超声波辅助提取,以Waters Acquity BEH Amide色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.7 μm)分离,以乙腈-水溶液(各含体积分数0.1%氨水)为流动相,电喷雾负离子多反应监测模式检测。结果表明,8种单、寡糖的定量检出限为0.01~0.54 mg/L,线性范围为1.0~200.0 mg/L;添加水平在10.0mg/L和100.0 mg/L内,回收率为80.2%~103.2%。应用该方法分析包含绿茶、乌龙茶、普洱茶和红茶的20个样品,发现大部分样品中都能检测到葡萄糖、果糖、蔗糖和棉子糖,它们的含量分别为0.39~17.64、0.53~22.83、2.07~40.70 g/kg和0.57~14.67 g/kg;但在所有样品中均未检测到鼠李糖、木糖、阿拉伯糖和甘露糖。