RNase等10种标准蛋白质在高效疏水作用色谱上的复性

目的: 研究变性蛋白质在高效疏水作用色谱(HPH IC)上的保留行为及复性效率. 方法: 分别用盐酸胍(Gu HCl)、尿素(Urea)和十二烷基磺酸钠(SDS)将核糖核酸酶(RNase)等10种标准蛋白质变性,然后在流动相为硫酸铵的条件下,用HPHIC对变性蛋白质进行复性,并测定其保留时间、Z值、质量及活性回收率. 结果: 在10种变性蛋白质中有5种在HPHIC上得到复性,其保留时间、峰形、Z值与天然蛋白基本一致,其中溶菌酶和核糖核酸酶的质量和活性回收率高,复性效果好. 结论: 用HPHIC对变性的标准蛋白质进行复性,得到较好的复性效果.

高效疏水作用色谱法对还原变性溶菌酶的折叠研究

首次用高效疏水相互作用色谱(HPHIC)研究了还原变性溶菌酶(Lys)的复性。对还原变性Lys在3种疏水性不同的色谱柱上的复性情况进行了考察,发现还原变性Lys在疏水性最弱的XDM GM1型色谱柱上的复性效率最高,当Lys质量浓度为2 0g/L时,其复性效率可达到94 6%。

疏水作用色谱法同时纯化及复性基因重组人干扰素-α

使用高效疏水作用色谱直接从大肠杆菌表达的基因重组人干扰素 α(rhIFN α)包涵体的裂解液中纯化了rhIFN α ,并在纯化的同时获得了高的复性效率 ,使复性和纯化一步完成 ,大大地简化了操作步骤。用凝胶排阻色谱对该法纯化的rhIFN α进行了纯度测定 ,纯度达到 95 %以上。该法的活性回收率分别比稀释法和透析法高 1 0倍和 1

采用不同疏水相互作用色谱柱从包涵体中快速制备重组人干细胞因子(英文)

为了提高重组人干细胞因子(rhSCF)的复性效率,改进了高效疏水相互作用色谱(HPHIC)纯化和复性rhSCF的方法。首先将目标蛋白溶解于8.0mol/L脲中,然后将rhSCF包涵体的提取液直接进样到不同规格的HPHIC柱进行纯化和复性。优化了固定相配基结构和流动相组成等实验条件,结果表明,本方法可以快速地获得高质量回收率和高生物活性的rhSCF,rhSCF在40min内即可完成复性与纯化,目标蛋白的纯度在95.5%以上,质量回收率高于49.6%。通过体积排阻色谱和基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)的分析,确认rh-SCF以单体存在。结果进一步证明HPHIC法是同时复性和纯化重组蛋白的有效工具。

脲变性α-糜蛋白酶的高效液相色谱复性

目的研究变性蛋白质在高效疏水作用色谱(HPHIC)固定相表面上的保留行为及活性回收率。方法用脲将标准蛋白质α-糜蛋白酶(α-Chy)变性,然后以硫酸铵为流动相,用HPHIC固定相(TSK)对脲变性α-Chy进行复性,并测定复性α-Chy的Z值、质量及活性回收率。结果Z值随脲浓度的增大而减小,变性剂浓度在1.0～3.0mol·L-1范围内时,HPHIC对变性α-Chy有较高的活性回收率。结论HPHIC是变性蛋白复性的有效工具,蛋白质与固定相之间的疏水作用是蛋白折叠的主要驱动力。

棉铃虫中肠微粒体P450的分离纯化

为深入研究棉铃虫Helicoverpaarmigera细胞色素P450的结构与功能,需要分离不同型的P450蛋白。作者建立了适用于棉铃虫中肠微粒体P450的纯化方法,包括聚乙二醇8000(PEG8000)沉淀、高效疏水作用色谱(HPHIC)和高效离子交换色谱(HPIEC)等连续分离步骤。SDS_PAGE(银染)显示,棉铃虫中肠微粒体经以上步骤分离纯化后,在含P450的馏分中检测出分子量分别为58kD、47kD、56kD和45kD的4条蛋白带。P450的回收率为14.3%,比含量提高了39倍。