萝卜硫苷的高效纯化技术研究进展

萝卜硫苷(Glucoraphanin,RAA)是广泛存在于十字花科植物中的硫代葡萄糖苷,其代谢产物具有防癌抗癌等功能。但从十字花科植物中提取的RAA纯度较低,降低了其利用率,因此需要对RAA纯化。当前纯化RAA的主要技术为色谱纯化技术,但该技术存在回收率低以及二次污染等问题。此外,因膜纯化技术是分离纯化糖苷类物质最常用的方法,具有设备和操作简单以及无二次污染等特点,故该技术同样是纯化RAA的潜在技术。因此,色谱纯化与膜纯化联合技术可实现RAA的有效回收并提高RAA的纯度,有效规避色谱纯化技术所造成的RAA回收率低及二次污染的缺点。因此,该文主要讨论了目前RAA主要的纯化方法,分析了色谱和膜纯化技术在RAA纯化中联合应用的可行性,为RAA的高效纯化提供方法参考。

脊髓灰质炎减毒活疫苗的高效纯化及特性研究

应用Q SepharoseFastFlow对Vero细胞基质制备的I型口服脊髓灰质炎减毒活疫苗悬液进行纯化。病毒液经滤过澄清和超滤浓缩 ,获得 85%的病毒感染性滴度回收率 ,而经Q SepharoseF .F .纯化的病毒悬液 ,病毒感染性滴度回收率达 10 0 %。纯化后的病毒液用α 32 PdATP标记DNA探针膜杂交法测定 ,宿主Vero细胞基质DNA残余含量远低于 10 0 pg/剂量的标准 ;rct/ 4 0特征、病毒形态及病毒衣壳蛋白组份等生物学性状无显著变化。研究结果提示 ,Q SepharoseF .F .是Vero细胞制备口服脊髓灰质炎减毒疫苗的理想纯化材料。

一种新型工艺与设备——双临界自动高效提取纯化浓缩机

本文介绍一种新型的蜂产品加工设备———双临界自动高效提取纯化浓缩机 (专利申请号 :0 1 1 1 0 5 4 1 0 ) ,它适用于中药、化工及食品等 ,特别是蜂产品中的生物活性成分高保活性高效提取浓缩。整机实现封闭自动提取、浓缩和分离纯化及溶媒自动回收综合为一体 ,适应GMP生产要求 ,并可使用多种溶媒单独或混合进行非超临界或超临界提取 ,溶媒可以通过装置系统实现循环使用或自动回收 ,溶媒浓度还可在装置系统中实现线性动态自动调整 ,以及采用超声波振荡加速提取速率 ,通过升温、微波、减压等技术提高浓缩速度和溶媒回收率 。

西兰花种子中分离纯化萝卜硫素及残留溶剂的方法学验证

目的介绍了一种从西兰花种子中分离纯化天然萝卜硫素高效、低成本方法。方法该方法包括种子自溶后的溶剂萃取、柱色谱分离和半制备高效液相色谱纯化。经MS、^(1)H-NMR、^(13)C-NMR谱对纯化后的化合物进行了表征。结果与传统的液-液萃取法相比,柱色谱分离法从西兰花种子中提取萝卜硫素的收率更高为(69.02±1.1)%。以SinoChrom ODS-BP柱为半制备高效液相色谱柱,以甲醇-水(体积比1∶4)为流动相,最大装载量小于60 mg,流量应控制在9 mL·min^(-1),可以获得纯度为95%的萝卜硫素。经HPLC、MS、^(1)H-NMR、^(13)C-NMR检测,结果表明,所得样品为目标化合物,且无有机溶剂残留。结论建立了一种分离纯化西兰花种子中萝卜硫素的方法。本方法经济、高效,有实用价值。

巴斯德毕赤酵母表达的突变型人白细胞介素-2的发酵条件与纯化研究

在以前的研究中,通过蛋白质工程技术获得了三突变体白细胞介素_2基因(编码12 5位半胱氨酸→丙氨酸;18位亮氨酸→蛋氨酸;19位亮氨酸→丝氨酸) ,并在毕赤酵母中加以表达。进一步优化表达条件,其最适诱导条件:80 %以上的通气,诱导2d ,初始pH6 0 ,甲醇终浓度为1 0 %。在上述条件下表达量占菌体总蛋白的30 %以上,大约2 0 0mg L。建立了一套从毕赤酵母表达上清中分离纯化分泌型表达蛋白IL_2的方法,经离心,超滤浓缩,强阳离子交换S柱和分子筛层析得到纯化的突变型和野生型IL_2 ;其得率为2 7% ,纯度达电泳纯并且HPLC检测只有一个峰。纯化的突变蛋白对CTLL_2细胞具有刺激性;与野生型IL_2相比,在各种温度条件下储存的突变蛋白保留有更高的活性;突变型IL_2的活力是野生型的4～5倍,具有更高的利用价值。

SUMO蛋白酶Ulp1的高效表达纯化并通过His-SUMO标签制备scFv

SUMO蛋白酶（Ulp1）是切割小分子泛素修饰（SUMO）融合蛋白获得天然N端靶蛋白的一种工具酶,具有酶切效率高、特异性好等优点。但现有市售SUMO蛋白酶Ulp1价格昂贵、操作复杂,限制了SUMO融合体系的运用。利用基因工程技术,合成基因ulp1（Leu403-Lys621）,并在N端和C端加入多聚组氨酸标签（His_6）,构建重组表达载体psv T7-ulp1,将重组质粒转入大肠杆菌BL21（DE3）和BL21 trx B（DE3）中。经过高通量筛选技术快速确定最优的表达条件为采用BL21（DE3）作为表达宿主,转接后7h加入IPTG,IPTG的终浓度为0.1mmol/L,诱导时间为16h,最终蛋白质表达量占菌体总蛋白质量的34.5%,重组蛋白Ulp1的表达量为190mg/L,通过Ni-NTA一步纯化即可得到纯度95%以上的Ulp1。通过酶切反应,测定酶活为5.19U/μl,比酶活为5.23×10~4U/mg,是先前报道比酶活的1.87倍,通过酶活动力学分析,Ulp1的表观米氏常数K_m=0.359g/L,V_m=5.10μg/（ml·min）。将SUMO融合表达体系用于单链抗体（single-chain antibody fragment,scFv）的表达,得到可溶的SUMO-scFv融合蛋白,使用表达的Ulp1进行酶切并纯化,获得纯度高于90%且N端不含多余氨基酸的scFv,操作步骤简单,显著改善了scFv在大肠杆菌中难以高效可溶性表达纯化的现状。

膜分离与分子筛耦合系统的研发

对当前膜分离技术作了简单介绍,同时提出了将气体膜分离技术和分子筛吸附技术耦合的方案来对空分设备纯化系统进行改造,以开发更加高效的纯化系统,同时减小设备尺寸。CO2膜分离技术主要被国外的UBE、UOP、MTR等公司垄断,对其进行研究开发,对促进我国这一领域的进步有重大意义。