高效迎头分析法测定药物-人血清白蛋白混合液中游离药物浓度

用高效迎头分析法 (HPFA)测定了药物 人血清白蛋白 (HSA)混合液中游离药物的浓度。样品溶液不经任何处理直接进样到装有内表面反相固定相的色谱柱中 ,用 67mmol/L磷酸盐缓冲液 ( pH 7 4 ,I =0 17mol/L)作流动相。当进样体积足够大时 ,游离药物以平顶峰的形式被洗脱出来 ,平顶峰区域洗脱液中的药物浓度等于样品溶液中游离药物的浓度。收集平顶峰区域的洗脱液 ,然后将一定体积的洗脱液注入到反相色谱柱中 ,测定游离药物的浓度。用该法测定酮基布洛芬 HSA和头孢哌酮 HSA两种混合液中游离药物的浓度 ,并与超滤法进行了比较 ;考察了进样体积和流速对平顶峰形成的影响。结果表明 ,获得平顶峰所需的最小进样体积随药物不同而不同 ;流速对平顶峰的形成没有影响。高效迎头分析法与超滤法测得的游离药物浓度相同 。

格列美脲蛋白结合作用的高效液相色谱迎头分析法

目的 研究格列美脲与人血清白蛋白(humanserumalbumin,HSA)结合作用。方法 采用高效液相色谱 迎头分析法(highperformanceliquidchromatography frontalanalysis, HPLC FA)。色谱柱为内表面反相(internal surfacereversed phase,ISRP)硅胶柱PinkertonGFFII S5 80(1.50mm×4 .6mmID, 5μm);流动相为 67mmol·L-1磷酸盐等渗缓冲液 (pH 7. 4, I=0 17mol·L-1 );流速 0 2mL·min-1;检测波长 230nm;进样量 900μL;柱温37℃。结果应用非线性回归参数估算求得HSA分子上两类结合位点结合的格列美脲分子数及相应的结合平衡常数:n1 =1和K1 =5. 1 (μmol·L-1 )-1;n2 =7和K2 =0. 017 (μmol·L-1 )-1。结论 HPLC FA法操作简便,适用于研究格列美脲与HSA的结合作用。