巴戟天药材寡糖化学成分的高效阴离子交换色谱-脉冲安培电化学检测器指纹图谱研究

目的建立巴戟天药材寡糖化学成分的高效阴离子交换色谱-脉冲安培电化学检测器(HPAEC-PAD)特征指纹图谱,为制定巴戟天药材质量标准提供参考数据。方法利用HPAEC-PAD,色谱条件为,Hamilton RCX-10(4.1 mm×250 mm,7μm),100 mmol.L-1 NaOH溶液(A)-100 mmol.L-1 NaOH,500 mmol.L-1 NaAc混合溶液(B)流动相,梯度洗脱,流速为0.8 mL.min-1,柱温为30℃,检测电压0.1V,分析时间为40 min。结果建立了巴戟天药材寡糖化学成分的HPAEC-PAD指纹图谱,并标定出巴戟天药材20个共有峰,其中3个峰经与对照品比对为蔗果三糖、耐斯糖(nystose)、1F-果呋喃糖基耐斯(1F-fructo-furanosylnyslose),经指纹图谱系统解决方案软件(ChromafingerTM)生成共有模式,并进行相似度和主成分分析。不同产地巴戟天药材均含有以上共有峰,但在共有峰的峰高上有差异,并可用于区别巴戟天及其常见混伪品。结论利用该方法建立的巴戟天寡糖类化学成分的指纹图谱特征性和专属性强,且该方法快速、灵敏、可靠,可用于控制巴戟天药材的质量。

高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法测定吸附无细胞百(三组分)白破灭活脊髓灰质炎和b型流感嗜血杆菌(结合)联合疫苗的多糖含量

目的 采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法测定吸附无细胞百(三组分)白破灭活脊髓灰质炎和b型流感嗜血杆菌(结合)联合疫苗(以下简称DTac P-s IPV-Hib)中多糖含量,并对方法进行验证。方法 在1 ml样品中加入0.02 g柠檬酸钠,振荡混匀后,置于37℃保温24 h,4000×g离心5 min收集上清液,稀释后加入6 mol/L盐酸,100℃下加热2 h,冰浴10 min后加入0.8 ml氢氧化钠(1 mol/L)溶液用于终止酸水解。采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法根据检测信号峰面积计算对应水解荚膜多糖(PRP)含量,通过PRP占多糖含量干重的41.3%计算出总的多糖含量。结果 核糖醇参考品浓度在0.1~1.5μg/ml范围内标准曲线r2>0.99,检测下限可达10ng/ml。核糖醇加标回收率均在95%~105%;对高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法检测多糖的重复性和中间精密度进行验证,相对标准偏差(RSD)均小于5%,方法专属性和耐用性良好。结论 使用柠檬酸钠作为解吸附剂,与高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法相结合可用于DTac P-s IPV-Hib中Hib多糖的含量检测,为产品的质量控制和稳定性研究提供参考。

高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测器测定多种基体中痕量碘离子的方法

建立了高效阴离子交换色谱脉冲安培检测器（HPAEC—PAD）测定碘离子的方法。以62．5mmol／LNaOH溶液作流动相，选用IonPac AS26型强亲水性阴离子交换分析柱，8min可以分离出碘离子，方法的检出限为0．05μg/L（25μL进样，3倍信噪比），标准曲线的线性范围为0．5—2000μg／L（r=0．9998）。1．0、2．5和25μg/L的碘离子标准溶液各9次进样的相对标准偏差分别为3．8％、2．6％和2．8％。试验了9种常见阴离子、3种易极化阴离子以及3种电化学活性物质对碘离子测定的影响，结果表明，在所选用的色谱条件下上述各化合物均不干扰碘离子的测定。用所建立的方法测定了盐水、矿泉水、海水、芹菜汁和紫菜浸提液等样品中碘离子含量，加标回收率在83％-114％。该方法具有灵敏度高、干扰小和样品前处理简单等优点。

高效阴离子交换色谱-脉冲电化学检测方法和应用

评述了高效阴离子交换色谱和脉冲电化学检测方法。内容包括:色谱柱和流动相;糖和氨基酸在色谱柱上的保留行为;脉冲安培法(PAD)和积分脉冲安培法(IPAD);方法在糖和氨基酸分析中的应用。

配备脉冲安培检测器的高效阴离子交换色谱(HPAE-PAD)流动相的配制

在检测碳水化合物的领域中，HPAE—PAD是一项广泛应用的技术．这一技术不仅仅局限于分析单糖、双糖、寡糖、小分子多糖、硅酸和其它糖酸，还包括糖醇、磷酸糖和核苷糖．HPAE-PAD已经代替了其它许多碳水化合物的分析技术，对小分子碳水化合物（如单糖）和大分子碳水化合物（如寡糖）HPAE—PAD都能实现高效分离．

高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法用于重组人促红素中唾液酸的含量测定

目的建立高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法(HPAEC-PAD)测定重组人促红素(rhEPO)中唾液酸含量的方法。方法将rhEPO样品用5 mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH 7.0)换液后,调整浓度到0.33 mg/mL,取20μL样品溶液加入10 m U/μL的神经氨酸酶20μL,37℃孵育1 h后,加入0.04 mmol/L的尤罗索尼克酸(KDN)内标物50μL,再加入70μL超纯水,混匀后分析测定。采用CarboPac PA1分析柱,Carbo Pac PA100保护柱,流动相为150 mmol/L氢氧化钠与125 mmol/L乙酸钠混合溶液,柱温30℃,流速1.0 mL/min,等度洗脱,数据采集时间15 min。根据唾液酸峰面积与KDN内标峰面积的比值与含量的量效关系,计算样品中的唾液酸含量。结果唾液酸标准品浓度在0.0015～0.0075μg/mL范围内与唾液酸峰面积与KDN内标峰面积的比值呈良好的线性关系,R2>0.99;重复性RSD<4%;(低、中、高浓度)样品回收率分别为94.9%、94.3%、96.7%。用建立的HPAEC-PAD法测定了6批rhEPO中唾液酸含量,与间苯二酚测定法测定结果比较差异无统计学意义(P=0.7488)。结论本研究建立了rhEPO中唾液酸含量测定的HPAEC-PAD方法,该方法线性、重复性、稳定性良好,适用于rhEPO的唾液酸含量的常规测定。

高效阴离子交换-脉冲安培检测色谱法测定人工培养蛹虫草多糖的单糖组成

目的采用高效阴离子交换-脉冲安培检测色谱法测定人工培养蛹虫草多糖的单糖组成。方法以人工培养蛹虫草子实体为原料,利用热水和稀碱液分别对其水溶性多糖成分进行提取,分离得到6种人工蛹虫草水溶性多糖化合物。其中水提部分主要分离得到3种精多糖P50、P70-1和P70-2,碱提部分则分离得到3种精多糖CBP- 1、CBP-2和CBP-3。高效阴离子交换-脉冲安培检测色谱法分别对上述6种精多糖的单糖组成成分进行了测定。结果除CBP-3为葡聚糖外,其他5个多糖均为由D-甘露糖、D-半乳糖和D-葡萄糖组成的杂多糖。结论采用高效阴离子交换-脉冲安培检测色谱法进行多糖化合物的单糖组成成分测定,无需进行衍生化,可达到简便、高效、准确地进行单糖组成分析之目的。

无糖和低糖食品中的糖和糖醇同时分析的阴离子交换色谱-脉冲安培检测法研究

建立并优化了高效、简便的阴离子交换色谱-脉冲安培检测器同时分析无糖食品中的糖和糖醇的方法,并且通过样品加标回收(回收率为88%～106%)以及与其他同系列色谱柱的互补、对照实验完善了该方法并验证其准确性和可靠性。该方法共检出了14个样品中的丙二醇、肌醇、甘油、D,L-木糖醇、D-山梨醇、D-甘露醇、半乳糖醇、D-葡萄糖、D-果糖、蔗糖和麦芽糖,其分析的线性范围为0.2×10-6～40×10-6,线性相关系数为99.8%～99.9%。

高效阴离子交换色谱积分脉冲安培检测法分析注射液中的氨基酸

建立了高效阴离子交换色谱积分脉冲安培检测器同时分离并测定注射液中18种常见氨基酸、氨基己酸和牛磺酸含量的方法。注射液用20mg／L的NaN3溶液稀释1000倍，经0．22um尼龙膜过滤后直接进样分析。以一定浓度的NaOH和NaAc溶液为淋洗液，选择合适的梯度淋洗条件，20种氨基酸在AminoPacPA10阴离子交换色谱柱上在30min内很好地分离，并用脉冲安培检测器进行了测定。氨基酸的检出限在0．14～3．81pmol（25uL进样，峰面积定量）。

高效阴离子交换色谱-脉冲安培法测定蔬菜及食品中的1-蔗果三糖和蔗果四糖

目的应用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测器联用（HPAEC-PAD）技术，建立蔬菜、食品中低聚果糖（蔗果三糖和蔗果四糖）检测方法。方法以NaOH和乙酸钠为淋洗液梯度淋洗，在CarboPac PAl色谱柱上阴离子交换分离了蔗果三糖和蔗果四糖，用脉冲安培检测器（金电极）进行了检测。结果二者的线性范围分别为1．22～15．20μg／g和1．64～18．30μg／g，检出限分别为0．085μg／g和0．089μg／g。对浓度为6．08和7．32μg／g的蔗果三糖和蔗果四糖混合标准连续进样，其相对标准偏差（RSD）分别为2.80％和1．28％（n=6）。应用本方法分析了菊苣、朝鲜蓟和通力爽口服液等蔬菜和食品中蔗果三糖和蔗果四糖的含量。蔗果三糖和蔗果四糖含量最高的蔬菜组织为菊苣根，分别为6．61g／100g干重和6．51g／100g干重。低聚果糖粉中蔗果三糖和蔗果四糖含量最高，分别为34．13g／100g和32．12g／100g。样品加标回收率蔗果三糖和蔗果四糖分别为93．97％和97．14％。结论该方法简单、方便、灵敏度高，适于蔬菜及食品中蔗果三糖和蔗果四糖的测定。

高效阴离子交换色谱-脉冲安培法检测低聚异麦芽糖

建立了高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法定量分析低聚异麦芽糖的方法。采用CarboPakTM PA10色谱柱,配合安培检测器,以NaOH及醋酸钠为洗脱剂。采用此方法不仅一次性实现了低聚异麦芽糖常规组分中葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、异麦芽糖、异麦芽三糖,潘糖的有效分离,也实现了异麦芽四糖、异麦芽五糖、异麦芽六糖、异麦芽七糖、海藻糖、麦芽酮糖、曲二糖、黑曲霉糖高聚合度糖及二糖同分异构体间的分离及检测。以不同浓度的标准糖混合溶液建立了校正曲线,此方法中,各组分在0.032～25.975 mg/L间具有良好的线性关系,各物质的检测限和定量限分别在0.008～0.022 mg/L和0.027～0.073 mg/L,样品加标回收率为82.02%～116.37%。

高效阴离子交换色谱-脉冲安培法检测冻干b型流感嗜血杆菌结合疫苗的游离多糖含量

目的 建立高效阴离子交换色谱-脉冲安培(HPAEC-PAD)法检测冻干b型流感嗜血杆菌(Hib)结合疫苗中游离多糖含量的方法,并对其进行验证,为Hib结合疫苗的质量监控提供依据。方法 优化水解供试品的实验条件,利用HPAEC-PAD法检测供试品中多聚磷酸核糖基核糖醇(PRP)含量。色谱条件采用CarboPacPA10分析柱(2mm×250mm)与CarboPac PA10保护柱(2 mm×50 mm),氢氧化钠-醋酸钠溶液梯度洗脱,流速为0.25ml/min,脉冲安培检测器,进样体积为20μl。用乙醇分步沉淀法、C4固相萃取法和超速离心法分离Hib游离多糖,并对三种方法得到的结果进行比较。同时验证方法的系统适用性、特异性、线性、精密度及准确性。结果 确定水解条件为终浓度0.4mol/L的NaOH,于37℃振荡1.5 h。本公司生产的冻干Hib结合疫苗不可用C4固相萃取柱分离游离多糖,确定了超速离心联合HPAEC-PAD法为冻干Hib结合疫苗游离多糖检测的最适方法。该方法专属性、分离度良好;PRP浓度在0.1962~19.616μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系,R2>0.99。3批供试品分别测定6次,RSD分别为4.1%、2.3%、3.3%,不同时间测得的中间精密度RSD分别为8.3%、3.6%和9.1%。游离多糖的加标回收率分别为102.9%、94.3%、92.0%,RSD分别为3.9%、8.7%、5.3%。结论 初步建立了冻干Hib结合疫苗游离多糖含量测定的超速离心联合HPAEC-PAD法。该方法具有良好的准确性、精密度及稳定性,可用于冻干Hib结合疫苗中游离多糖含量的检测。

阴离子交换色谱-积分脉冲安培法测定人体尿液中的异黄蝶呤

蝶呤类化合物是细胞代谢过程中的重要辅助因素，可以作为多种疾病早期诊断的标志物。其中，新蝶呤的研究较为深入，临床上已经作为肿瘤标志物用于肺癌等癌症的诊断，而其它蝶呤类化合物的研究和应用相对较少。目前，蝶呤类化合物的检测主要采用高效液相色谱法。近年来，高效阴离子交换色谱．

阴离子交换色谱积分脉冲安培法测定鱼粉和玉米粉水解液中氨基酸

将高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培直接检测法应用于鱼粉和玉米粉水解液中的氨基酸的分析测定.该方法使用Dionex AminoPac PA10阴离子交换柱为分析柱,控制柱温为35℃,以NaOH和NaAc的强碱性溶液为淋洗液,在合适的梯度条件下,可以实现对17种常见氨基酸的高效分离.在强碱性条件下,获得良好分离的各个氨基酸可在配有金工作电极的电化学检测器上以积分脉冲安培法获得高灵敏度的检测.在优化的测定条件下,该方法对这17种氨基酸的检出限在0.21～3.38 pmol之间;峰面积校正曲线的线性范围为2～3个数量级;5次平行测定的峰面积的相对标准偏差RSD在0.32%～4.7%之间.该方法应用于玉米粉和鱼粉水解液中氨基酸含量的测定,结果良好.对玉米粉和鱼粉水解液标准加入的回收率分别在81.9%～108.0%和90.0%～108.0%之间.

高效阴离子交换色谱–脉冲安培法测定生态养护抑菌凝胶中的褐藻寡糖

建立高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法测定生态养护抑菌凝胶中褐藻寡糖含量的方法。采用阴离子交换柱CarboPac PA10(250 mm×2 mm,3.5μm),以氢氧化钠、乙酸钠和水为洗脱液进行梯度洗脱,柱温为35℃,流量为0.8 mL/min。α-L-古罗糖醛酸单糖(PG)和β-D-甘露糖醛酸单糖(PM)的质量浓度分别在0.25~9.0μg/mL和0.18~8.4μg/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好,线性相关系数分别为0.9997和0.9998,检出限分别为0.06,0.03μg/mL,定量限分别为0.20,0.10μg/mL。测定结果的相对标准偏差分别为1.11%,1.25%(n=6),加标回收率分别为101.03%和95.22%。该方法简便易行,灵敏度高,重现性好,适用于生态养护抑菌凝胶中褐藻寡糖的分析。

高效阴离子交换色谱在易极化阴离子痕量分析中的应用

以45 mmol/L的 NaOH溶液作淋洗液,采用强亲水性的IonPac AS16阴离子交换分析柱和脉冲安培检测器,在15 min内分离检测了Br-,S2O2-3,I-和SCN-4种易极化阴离子,检测限(以3倍信噪比计)分别为0.5,0.2,0.05和2 μg/L (进样25 μL).痕量离子的标准溶液平行9次进样测定的相对标准偏差为0.8%～3.7%.而在相同的色谱条件下,抑制型电导检测器对上述4种阴离子的检测限分别为1,1,2和10 μg/L,平行9次进样测定的相对标准偏差为0.9%～4.7%.通过实验比较可知,脉冲安培检测器的灵敏度是抑制型电导检测器的2～40倍.在测定上述易极化阴离子时,脉冲安培检测器具有选择性强、精密度好和灵敏度高等优点.

利用高效阴离子交换色谱-脉冲安培电化学检测法测定不同生长年限巴戟天中6种寡糖类成分含量

目的采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培电化学检测法（HPAEC-PAD）对巴戟天不同生长期中的6种寡糖（葡萄糖、果糖、蔗糖、1-蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖）进行检测,对其动态积累规律进行分析,为研究巴戟天的最佳采收期提供参考。方法利用高效阴离子交换色谱-脉冲安培电化学检测法,色谱条件如下：Hamilton RCX-10色谱柱（4.1 mm×250mm,7μm）,100 mmol·L-1Na OH溶液（A）-100 mmol·L-1Na OH溶液,500 mmol·L-1Na OAc混合溶液（B）为流动相梯度洗脱,流速0.8 m L·min-1,柱温35℃,进样量25μL。结果随着生长年限的增加,巴戟天根中的单糖呈现减少的趋势,蔗糖则逐渐增加,聚合度为3或以上的1-蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖则在1~5年间渐增加,然后缓慢降低。结论不同生长年限巴戟天中6种寡糖成分的组成及含量相差较大,提示该类成分的合成与生长年限有一定的关系,为制定适宜的采收期提供参考。

高效液相色谱-脉冲安培电化学检测器法替代微生物检定法测定硫酸新霉素效价的研究

目的建立用于测定硫酸新霉素效价的高效液相色谱-脉冲安培电化学检测器法(HPLC-PAD)。方法建立并验证HPLC-PAD法,测定硫酸新霉素各主要组分含量及相关物质;采用在线膜抑制脱盐技术辅助LC-IT-TOF法测定硫酸新霉素杂质谱,结合组分活性研究确定了硫酸新霉素的主要活性组分;采用半制备液相色谱-蒸发光散射检测器串联制备硫酸新霉素B及硫酸新霉素C精制品,采用波谱手段进行结构确证;采用质量平衡法测定二者的纯度;采用三剂量抗生素微生物检定法测定B、C精制品各自的效价值,推导公式计算出硫酸新霉素的量效转换系数,设计实验进行交互作用考察及实际样品的验证。结果建立的HPLC-PAD方法在分离能力及方法的稳定性上均优于《欧洲药典》(EP)方法,适用于硫酸新霉素各组分的准确定量及有关物质检查;在线膜抑制脱盐技术成功地去除了流动相中的三氟乙酸,对硫酸新霉素的杂质谱进行研究,结合活性研究结果,确定新霉素B和新霉素C为新霉素的主要活性组分;成功制备获得新霉素B、C精制品,通过实验和计算获得了硫酸新霉素的量效转换系数,并通过了验证。结论初步实现了仪器法对微生物生物检定法的替代,基本完成了多组分氨基糖苷类抗生素硫酸新霉素的量效一致性研究工作。

b型流感嗜血杆菌结合疫苗游离多糖含量检测高效阴离子交换色谱-脉冲安培法的建立及验证

目的建立b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗游离多糖含量检测的超速离心联合高效阴离子交换色谱-脉冲安培(high performance anion exchange chromatography with pulsed amperometric detector,HPAEC-PAD)法,并对该方法进行验证及初步应用。方法将供试品经超速离心后,收集上清获得游离多糖,加入水解液使供试品水解约16 h后,采用CarboPacPA-104 mm×250 mm分析柱与CarboPacPA-104 mm×50 mm保护柱,氢氧化钠-醋酸钠溶液梯度洗脱,检测供试品游离多糖含量。对该方法进行专属性、线性、精密度、稳定性、准确度验证,确定定量限。用建立的方法检测13个批次Hib结合疫苗游离多糖含量,同时与乙醇沉淀法进行比较。结果Hib多糖标准品在0.77~12.26μg/mL范围内,与峰面积呈良好的线性关系,测定5次,线性相关系数均大于0.995;方法定量限为1.875 ng/mL;精密度、稳定性的RSD均小于5%;高、中、低3个浓度的平均加标回收率为100.26%,RSD为3.96%。13个批次Hib结合疫苗中的游离多糖含量为6.76%~16.74%。结论该方法准确可靠,可用于检测Hib结合疫苗游离多糖含量,同时也为其他多糖蛋白结合疫苗游离多糖提取和检测提供了思路。

高效阴离子交换色谱积分脉冲安培检测法同时测定门冬氨酸钾镁葡萄糖注射液中门冬氨酸和葡萄糖的含量

目的建立高效阴离子交换色谱积分脉冲安培检测法同时测定门冬氨酸钾镁葡萄糖注射液中门冬氨酸和葡萄糖的含量。方法采用CarboPacTM PA20阴离子分离柱(3 mm×250 mm)和PA20保护柱(3 mm×50 mm);以去离子水为淋洗液A、200 mmol/L的氢氧化钠溶液为淋洗液B、1 mol/L的醋酸钠为淋洗液C,进行梯度洗脱,流速为0.5 ml/min;积分脉冲安培检测器(金工作电极、pH-Ag/Agcl参比电极);检测器温度30℃;柱温30℃,进样量25μl。结果葡萄糖和门冬氨酸两种成分线性范围分别为0.7952μg/ml^25.4470μg/ml(r=0.9996)和0.1122μg/ml^7.1808μg/ml(r=0.9998);葡萄糖和门冬氨酸两种成分高、中、低3种浓度的回收率分别在98.77%~100.14%之间和98.15%~100.05%之间,相对标准偏差分别为0.6%(n=9)和0.5%(n=9)。结论该法操作简便、专属性强、门冬氨酸和葡萄糖的分离效果好,可用于门冬氨酸钾镁葡萄糖注射液中门冬氨酸和葡萄糖的含量测定。