高效阴离子色谱法测定电催化氮气氧化中NO_(3)^(-)/NO_(2)^(-)的含量

开发了一种测定高浓度SO^(2-)_(4)电解液(0.5 mol/L)中NO_(3)^(-)/NO_(2)^(-)含量的高效阴离子色谱法。该方法不受催化剂溶出以及其它干扰离子的影响,可以应用于电催化氮气氧化制备NO_(3)^(-)/NO_(2)^(-)。通过改变流动相的流速、淋洗液浓度以及柱温实现了SO^(2-)_(4)与NO_(3)^(-)/NO_(2)^(-)色谱峰的完全分离。优化得到最佳检测条件:流动相流速1.0 mL/min,柱温30℃,淋洗液浓度25 mmol/L,淋洗液设置为等浓度梯度,冲洗因子:10,此条件下在较宽的检测范围内(0~300 mg/L)实现NO_(3)^(-)/NO_(2)^(-)的高灵敏度检测。其中,NO_(3)^(-)线性关系式为:Y_(2)=0.0107X_(2)-0.0255,相关系数R^(2)为0.9998;NO_(2)^(-)线性关系式为:Y1=0.0127X1+0.0107,相关系数R^(2)为0.9997。

新型弱阴离子交换色谱柱-高效液相色谱法同时测定苯代谢产物的方法

目的:建立了苯及其同系物体内代谢产物粘糠酸、苯乙醛酸、马尿酸的弱阴离子交换-HPLC测定方法,并进行了方法学研究。方法:采用Acclaim Mixed-Mode WAX-1(150 mm×2.1 mm,5μm)弱阴离子交换色谱柱,以甲醇-50 mmol/L磷酸氢二钾(18∶82)为基础流动相,以波长时间程序分别在254 nm下检测粘糠酸、苯乙醛酸,224nm下检测马尿酸,探讨了弱阴离子交换色谱柱分离粘糠酸、苯乙醛酸及马尿酸的影响因素。结果:流动相的pH值、离子强度、有机相比例对上述三种代谢物产生的分离产生明显影响。结论:在确定的色谱条件下,从分离度、对称性、重复性、线性4个方面来评价,弱阴离子交换色谱柱分析酸性可离子化化合物要优于常规C18色谱柱。

高效阴离子交换色谱法分析杜氏盐藻多糖的单糖组成

选用CarboPacPA20分析柱(3mmi.d.×150mm),以H2O-250mmol/LNaOH-1mol/LNaAc为流动相,建立了三元梯度洗脱分离、积分脉冲安培检测多糖中常见的8种中性单糖和2种糖醛酸的高效阴离子交换色谱分析方法;利用离子交换色谱柱(DEAESepharoseCL6Bfastflow,3.5cm×30cm)和凝胶过滤色谱柱(SepharoseCL6B,2.6cm×100cm)从提取出β-胡萝卜素的杜氏盐藻残渣中分离出PD1、PD2、PD3、PD4a和PD4b共5个多糖级分,选用适当的条件水解后,利用高效阴离子交换色谱法测定了各多糖级分的单糖组成。其中具有显著生物活性的多糖级分PD4a中主要含有半乳糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、盐藻糖及鼠李糖6种中性糖,还含有少量糖醛酸;PD4b中主要含有核糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖及木糖5种中性糖,不含糖醛酸。该结果与PMP柱前衍生化反相高效液相色谱法测定的单糖摩尔比基本一致。10种单糖的离子色谱法的检出限为0.76～2.92nmol/L(以3倍信噪比计),峰面积相对标淮偏差RSD为0.72%～3.25%。

高效阴离子交换色谱法分离不对称PCR产物

目的为分离制备高纯度的DNA单双链提供新的技术方法.方法利用SOURCE15Q强阴离子交换柱分离纯化DNA单双链,并测定回收率.结果SOURCE 15Q柱在紫外检测波长为260nm,流速为1ml/min,流动相为pH9.0时,以20mmol/L Tris-HCl缓冲液+2.0mol/LNaCl,线性浓度梯度洗脱的分离条件下,能很好地对85个碱基长度不对称PCR产物的单双链进行分离;对24mer单链样品进行回收率测试,回收率为92.46%.结论利用SOURCE 15Q强阴离子交换柱分离纯化DNA单双链的方法简便、快捷、稳定、分辨率高、纯度高,适合核酸单链和双链样品的分离、纯化、鉴定和制备.

脉冲安培检测-高效阴离子色谱对药品和保健食品中牛磺酸的快速测定

建立了保健食品中牛磺酸的高效阴离子色谱快速分析方法。以0．25mol／LNaOH溶液作流动相，AminoPAC PA-10（2×250mm）离子色谱柱作分离柱，在Au工作电极，Ag／AgCl为参比电极的脉冲安培检测器上，分离测定了牛磺酸。牛磺酸的线性范围为1．0～50．0mg／L，检出限为0．088mg／L，标准溶液测定的保留时间和峰面积的日内相对标准偏差分别为0．36％和4．8％，日间相对标准偏差为0．89％和5．0％。用该法测定药品和保健食品中的牛磺酸，结果较为满意，测得值相对标准偏差为6．5％，加标回收率为96％～115％。该法无需衍生，具有较高的灵敏度和精密度，6min内可完成1次检测，适合于药品和保健食品中牛磺酸的快速检测。

用阴离子交换色谱法制备寡聚核苷酸

建立了用Source 15Q强阴离子交换柱分离纯化寡聚核苷酸的方法.在pH 9.0,以20 mmol/L Tris-HCl缓冲液+2.0 mol/L NaCl为流动相,线性浓度梯度洗脱,紫外检测波长为260 nm,流速为1 mL/min的分离条件下,能很好地分离18-78 mer的合成寡聚脱氧核苷酸和PCR的单双链产物,探讨了流速和盐浓度对分离的影响,并测得24mer OligoDNA的回收率为90%左右.该方法简便、快捷、分辨率高,可用于寡聚核苷酸、反义核酸药物的分离、纯化、鉴定和制备.

高效阴离子交换色谱-脉冲积分安培法检测海带中的单糖、双糖和糖醛酸

建立海带多糖水解液中岩藻糖、葡萄糖、氨基半乳糖、氨基葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖、核糖、乳糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸11种糖类化合物的高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法的定性定量分析方法。采用CarboPac PA10(250 mm×4 mm)作为糖分析柱,CarboPac PA10(50 mm×4 mm)作为糖保护柱,柱温为25℃,流速为1.0 mL/min,水-NaOH-NaAc组成三元淋洗液进行多级梯度淋洗。结果表明,11种糖在各自线性范围内R^(2)不小于0.9986,方法的检出限(R_(SN)=3)在1.27~47.49 mg/kg之间,精密度相对标准偏差均小于1.78%,样品加标回收率在89.35%~115.67%之间。结果表明,该方法操作简便,线性关系良好,灵敏度和精密度高,重复性好。

重组腺相关病毒9型空壳率阴离子交换高效液相色谱检测方法的建立及验证

目的建立检测重组腺相关病毒9型(recombinant adeno-associated virus type 9,rAAV9)空壳率的阴离子交换高效液相色谱(anion-exchange high-performance liquid chromatography,AEX-HPLC)法,并进行验证。方法采用基于电荷差异的AEX-HPLC法,通过对流动相洗脱梯度、流动相pH、色谱柱柱温、流速、样品浓度、进样体积和荧光检测器检测波长进行优化,建立检测rAAV9空壳与实心病毒比例的方法,并对方法的专属性、线性、检测限、定量限、精密度和准确度进行验证,确认方法可行性。结果利用CIMac AAV full/empty-0.1 mL分析柱,以20 mmol/L 1,3-二[三(羟甲基)甲氨基]丙烷(BIS-Tris propane,BTP)为流动相A,20 mmol/L BTP+1 mol/LNaCl为流动相B进行梯度洗脱,流动相pH均为9.0,柱温20℃,流速1 mL/min,样品浓度4×10^(12)vg/mL,进样体积10μL,激发波长为280 nm,发射波长为330 nm,可实现rAAV9空壳与实心病毒的基线分离及定量检测。方法验证结果表明,制剂缓冲液无干扰,专属性较好;rAAV9在(1.6~8)×10^(12)vg/mL范围内线性关系良好,r=0.993;检测限为5×10^(10)vg/mL,定量限为1×10^(11) vg/mL;重复性和中间精密度RSD分别为2.95%和2.10%;准确率均不低于80%。结论建立了一种高灵敏度且可快速检测rAAV9空壳与实心病毒比例的AEX-HPLC法,可用于基因治疗产品空壳率的分析及质量控制。

高效阴离子交换色谱法测定依诺肝素钠1,6-脱水衍生物含量

目的建立依诺肝素钠特异性末端结构1，6-脱水衍生物结构的含量测定方法。方法肝素酶混合液将依诺肝素钠水解成二糖或四糖单位，水解得到的寡糖峰经硼氢化钠还原后用-高效阴离子交换色谱法方法进行分析。采用WatersSpherisorbs5SAX（4．0mm×250mm，5μm）色谱柱，以0．28g·L^-1磷酸二氢钠溶液为流动相A含0．28g·L^-1磷酸二氢钠及140g·L^-1高氯酸钠的溶液为流动相B进行梯度洗脱（0～20min，3％～35％B；20～50min，35％～100％B；50～60min，100％B；60～61min，100％～3％B，61～79min，3％B），流速0．8mL·min^-1，柱温为50℃；检测波长为234nm，并用归一化面积百分比法计算摩尔百分含量。结果筛选出了酶解效果达标的国产肝素酶并优化了酶解条件，酶解后1，6-脱水△IS-IS与1，6-脱水△Is峰面积比〈1．15；优化色谱条件后△IA和1，6-脱水△IS的分离度〉1．5；硼氢化钠还原后的溶液色谱图中，△IS和还原△IS的峰面积比均小于0．02；两家国产依诺肝素钠生产企业样品结果均在15％～25％内。结论方法可对依诺肝素钠特征还原末端结构进行分离和定量，作为对低分子肝素进行微观结构分析的首个鉴别项目，已收栽入新修订依诺肝素钠国家标准草案中．

高效阴离子色谱-脉冲安培检测法测定木糖的含量

目的建立高效阴离子色谱-脉冲安培检测法(HPAEC-PAD)测定木糖含量的方法。方法用CarboPacTMPA10分析柱(250mm×4mm),CarboPacTMPA10保护柱(50mm×4mm),ED电化学检测器,Au工作电极,Ti对电极,Ag/AgCl复合参比电极,糖标准四电位波形,淋洗液为50mmol/L NaOH溶液,柱温30℃,流速0.6mL/min。结果木糖在2.00～16.00μg/mL与峰面积呈良好的线性关系(r2=0.9993),最低检测限为0.008μg/mL,平均回收率为100.84%,RSD为1.00%。结论 HPAEC-PAD法操作便捷、无需衍生、分离效果好、灵敏度高,可用于木糖的含量测定。

高效阴离子交换色谱—脉冲安培检测法分析贼小豆中的糖类化合物

建立了高效阴离子交换色谱法同时测定贼小豆中9种糖类化合物含量的分析方法。用CarboPacTMPA10阴离子交换分离柱和脉冲安培检测器，以0．25mol／L氢氧化钠和水等度洗脱，流速0．80mL／min，柱温30℃。结果表明：25rain内能完成9种糖的分离，在0．05—25．0mg／L范围内呈良好的线性关系，相关系数大于0．9993，检出限为0．05--1．20μg／L，加标回收率为91．66％～103．2％，相对标准偏差RSDd、于2.3％（n=6）。方法灵敏度高，前处理简单快速、选择性好、无需衍生，用于郑州地区野生贼小豆中糖类化合物的快速检测，结果较满意。

膳食纤维分析方法研究进展

膳食纤维作为一种来源丰富的功能性食品原料,具有重要的生理功能——能够降低便秘、结肠癌、肥胖、心血管疾病、糖尿病等慢性病的发病率。文中就膳食纤维分析方法的研究进展进行了综述,介绍了传统的分析方法,以及近红外分析法、尺寸排阻液相色谱法、高效阴离子色谱法等现代仪器分析方法。

蒸汽爆破强度对玉米芯酶水解制备低聚木糖的影响

以玉米芯为底物,采用蒸汽爆破预处理与内切木聚糖酶定向酶水解相结合制取低聚木糖。基于高效阴离子交换色谱法对聚合度为2～6的低聚木糖组分的准确定量分析,研究蒸汽爆破预处理反应强度系数及其主要参数(反应温度和维压时间)对玉米芯定向酶水解制取低聚木糖的组成分布及产品得率的影响规律,确立最佳蒸汽爆破预处理条件。蒸汽爆破-定向酶解效果综合评价的结果表明,玉米芯最佳的蒸汽爆破预处理条件是反应强度系数3.76、反应温度200℃、维压时间390s。此时低聚木糖得率可达到最高值20.8%,且主要组分以木三糖、木四糖和木二糖为主,含量分别占总得率的43.5%、21.3%和18.6%。

离子色谱法测定肝素及其类似物中游离和结合硫酸根

目的:测定肝素及其类似物中游离和结合硫酸根含量。方法:高效阴离子交换色谱法,采用酸水解法或氧瓶燃烧法对样品进行有机破坏后,测定样品中总硫酸根含量,样品直接溶解后测定样品中游离硫酸根含量,通过计算得到样品中结合硫酸根含量。结果:对多批肝素钠、硫酸皮肤素、硫酸软骨素、多硫酸软骨素进行了测定。结论:本文实验方法可以用于肝素类样品游离和结合硫酸根的测定。

硫酸软骨素钠含量测定用国家对照品的研制

目的建立硫酸软骨素钠含量测定用国家对照品。方法以红外光谱法(IR)和高效液相色谱法(HPLC)进行鉴别,采用尺寸排阻色谱和多角度激光光散射联用方法(SEC-MALLS)测定绝对分子质量和分子量分布,采用质量平衡法计算硫酸软骨素钠待标对照品的含量。结果用药典新增订的含量测定方法对硫酸软骨素钠的原料进行测定,最终确定首批硫酸软骨素钠对照品的含量为99.1%。结论硫酸软骨素钠含量测定用国家对照品的建立可有效的控制产品质量。