梯度洗脱反相高效液相色谱法测定头孢尼西钠有关物质

目的:建立梯度洗脱反相高效液相色谱法测定头孢尼西钠中的有关物质。方法:采用梯度洗脱方法,用 C_(18)BDS(Thermo Hypersil-Keystone,250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以0.01 mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节 pH 值至3.5)-乙腈(95:5)为流动相 A,乙腈为流动相 B;以1.0 mL·min^(-1)的流速进行梯度洗脱,梯度洗脱条件:0～6 min,A 为94%;6～20 min,A 从94%→30%;20～27 min,A 为70%;27～28 min,A 从70%→94%;28～35 min,A 为94%;检测波长为272 nm。通过加热破坏的方法,制备系统适用性溶液,对已知杂质进行定位。结果:在选定的色谱条件下,3-TSA、7-ACA 2个相邻杂质分离度达到4.1,在等度洗脱时保留时间超过80 min 的甲酰头孢尼西缩短为21 min。通过加热破坏的方法,可以将不易得到对照品的3-TSA 进行准确定位。结论:该方法测定灵敏,选择性、重现性好,即可以将不易分离的相邻杂质进行有效分离,又可大大缩短分析时间,符合常规检验的要求。

梯度洗脱-高效液相色谱法测定消毒剂中的6种季铵盐

目的建立梯度洗脱-高效液相色谱法测定消毒剂中苯度氯铵、米他氯铵、西他氯铵、司拉氯铵、苄索氯铵和西吡氯铵等6种季铵盐的方法。方法采用氰基色谱柱,以甲醇和0.05 mol/L醋酸铵溶液(pH=5.0)为流动相,梯度洗脱,选择263nm为检测波长,外标法定量。结果苯扎氯铵同系物在40.0~800.0 mg/L、苄索氯铵20.0~400.0 mg/L、西吡氯铵2.5~50.0mg/L范围内线性关系良好(相关系数r=0.999 9),低、高浓度加标水平的回收率范围为95.7%~104.7%、101.8%~105.9%,相对标准偏差(RSD)为0.6%~1.5%、0.3%~1.1%,方法检出限为0.8~6.0 mg/L,定量限为2.5~20mg/L。结论该方法样品前处理简单,结果准确可靠,适合于同时测定消毒剂中此6种季铵盐的含量。

梯度洗脱高效液相色谱法快速检测厌氧菌代谢物中的有机酸

提出了一种快速分析厌氧细菌代谢物中5种有机酸的高效液相色谱方法。该方法采用乙腈-0．02mol／L磷酸二氢钾缓冲溶液（pH2．8）作为流动相，流速和流动相中两种组分的比例均采用四元泵程序梯度洗脱方法控制，检测波长为215nm，柱温30℃时，能够快速、准确地分离和测定细菌培养基中的甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸和丙酸等5种有机酸，总分析时间只需4min。方法的相对标准偏差为0．26％-1．26％，回收率95．0％～100．8％，各种有机酸的线性相关系数r≥0．99981，具有较高的精密度和准确度，可以用于细菌代谢物中有机酸的分析。

梯度洗脱高效液相色谱法快速测定1,3-丙二醇发酵液中有机酸

提出了一种快速分析发酵液中9种有机酸的高效液相色谱方法。该方法利用RSpakKC-811色谱柱(300mm×8mmi.d.),采用超纯水-4mmol/L高氯酸为流动相进行梯度洗脱。流动相流速1.0mL/min,紫外检测波长210nm,柱温60℃时,能够快速、准确地分离测定发酵液中的丙酮酸、柠檬酸、苹果酸、延胡索酸、琥珀酸、乳酸、甲酸、乙酸等8种有机酸,分析时间只需15min。各种有机酸的线性相关系数R2≥0.9992,精密度的相对标准偏差为0.97%-2.72%,样品回收率为96.8%-102.5%,具有较高的精密度和准确度,可以用于1,3-丙二醇发酵液中有机酸的分析。

梯度洗脱反相高效液相色谱法测定粉萆薢与绵萆薢中薯蓣皂苷含量

目的 建立粉萆薢和绵萆薢中薯蓣皂苷含量的高效液相色谱测定方法.方法 色谱柱：Gemini C18（250 mm×4.60 mm,5 μm）;流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱;检测波长：203 nm;流速：0.8 ml/min;柱温：30 ℃.结果 薯蓣皂苷与其他成分分离良好,色谱峰面积与浓度呈良好的线性关系,线性范围为7.8～156.0 μg/ml（r=0.999 4）,平均回收率分别为97.99%、97.82%.结论 梯度洗脱反相高效液相色谱法准确、简便、重现性好,可用于萆薢类药材的质量评价.

梯度洗脱高效液相色谱法检测注射用替加环素的有关物质

目的建立测定注射用替加环素有关物质的梯度洗脱反相高效液相色谱法。方法采用Wa-ters C18色谱柱（5μm,416 mm×250 mm）,以磷酸盐缓冲液-乙腈（95∶5）为流动相A,以磷酸盐缓冲液-乙腈（50∶50）为流动相B。梯度洗脱条件：0-40 min,A：85%→57%;40-55 min,A：57%→0%;55-56 min,A：0%→85%;以1.0 mL/min的流速进行梯度洗脱,检测波长为248 nm。结果在上述色谱条件下,替加环素与各中间体杂质及降解杂质均能有效分离,分离度大于2.0;检测限为3.6 ng,精密度良好（RSD为0.7%）。结论本方法操作简便,专属性强,灵敏度高,可用于注射用替加环素有关物质的测定。

梯度洗脱反相高效液相色谱法测定拉呋替丁纯度及含量

目的:建立梯度洗脱反相高效液相色谱法测定拉呋替丁纯度及含量,并对其未知杂质进行研究。方法:采用梯度洗脱方法,色谱柱为大连依利特科学仪器有限公司Hypersil ODS C18柱(250 mm ×4.6 mm,5μm)。流动相A:0.01 mol.L-1磷酸二氢钾溶液,0.1%三乙胺,用磷酸调节pH 5.0;流动相B:乙腈。梯度洗脱条件:0-12 min,A-B(80:20);12-20min,A-B(40 :60);20-25min,A-B(80:20)。检测波长:220 nm;流速:1.0 mL·min-1。结果:拉呋替丁在0.01-0.50 mg·mL-1范围内线性良好,回归方程为Y=57.72X-21.31(n=5),r=0.9999。结论:建立的液相色谱法可完全分离拉呋替丁、各中间体、副产物等,该方法准确、灵敏、简便,专属性好。经液相色谱、质谱等鉴定确证,本品主要未知杂质为二氢拉呋替丁。

二元梯度洗脱反相高效液相色谱法测定茵栀黄颗粒中栀子苷的含量

目的:研究茵栀黄颗粒中栀子苷的定量分析方法,为其质量标准的建立提供依据。方法:采用C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相A为甲酸溶液(0.1%,v/v),B为甲醇,二元线性梯度洗脱,检测波长238nm,柱温25℃,流速1.0mL/min。结果RP-HPLC测定的线性范围为0.2012～5.03μg,相关系数r=0.9999,平均回收率为98.91%,RSD=1.16%。结论:建立的方法快速、简便、结果准确可靠,重现性好,可用于茵栀黄颗粒中栀子苷的含量测定。

固相萃取-梯度洗脱高效液相色谱法同时检测饲料中十三种磺胺类药物

建立了一种同时检测饲料中十三种磺胺类药物含量的方法,样品用磷酸盐缓冲液提取,HLB固相萃取小柱净化,梯度洗脱 HPLC分析,方法定量下限为0.5mg/kg,在0.5～10.0mg/kg添加水平上的回收率为63.6%～118.2%,相对标准偏差4.78%～17.24%,方法简便,适用于饲料中低含量磺胺类药物检测.

梯度洗脱高效液相色谱法测定萘丁美酮的含量及其有关物质检查

目的 :建立测定萘丁美酮的HPLC方法 ,并进行萘丁美酮含量测定和有关物质检查。方法 :Agilent 110 0型高效液相色谱仪 ,色谱柱为AgilentZorbaxC 18(15 0mm× 4 .6mm ,5 μm ) ,流动相采用梯度洗脱。UV检测波长为 2 5 4nm。结果 :本法测定萘丁美酮的线性相关系数为 0 .9999;日内、日间精密度均小于 1% ,方法回收率高、中、低 3点分别为 99.4 0 % ,10 1.6 0 %和 97.11%。结论 :本方法测定萘丁美酮 ,专属性强 ,灵敏度高 。

梯度洗脱高效液相色谱法测定桑叶中3种活性成分的含量

建立同时测定桑叶中绿原酸、芦丁和槲皮素含量的分析方法。色谱柱为NUCLEODUR C18 RP（250 mm×4.6 mm,5μm）,光电二极管检测器,流动相为甲醇-质量分数0.5%磷酸水溶液,梯度洗脱程序为0 min（30：70）-15min（30：70）-25min（50：50）-35min（85：15）-40min（30：70）;流速0.8 ml·min^-1,检测波长为350 nm。绿原酸、芦丁和槲皮素的线性范围分别为0.1144-1.0296μg（r=0.9996）、0.0436-0.3924μg（r=0.9999）和0.0452-0.4068μg（r=0.9997）,平均回收率分别为97.7%（RSD=1.7%）、98.4%（RSD=2.2%）和100.6%（RSD=1.5%）。方法快速简便,专属性强,重复性好,可作为桑叶中绿原酸、芦丁和槲皮素的定量分析方法。

改良梯度洗脱高效液相色谱法测定罗哌卡因血药浓度

目的建立改良梯度洗脱高效液相色谱法,测定罗哌卡因关节腔用药后的血药浓度。方法以曲马多作为内标,乙酸乙酯萃取,氮气吹干,乙腈∶水（50∶50）重溶进样,采用依利特Hypersil ODS-C18色谱柱（200mm×4.6mm,5μm）;流动相：乙腈-水相,水相为0.02mol.L-1NaH2PO4-0.015mol.L-1三乙胺溶液,用磷酸调至pH3.7。梯度洗脱,流速为1.0mL.min-1;紫外检测波长为220nm。结果在选定的色谱条件下,曲马多与罗哌卡因保留时间分别约为6.5、10.6min,罗哌卡因血浆浓度在0.025~4.0mg.L-1范围内线性关系良好（r=0.9999）,最低检测浓度为0.01mg.L-1（血浆浓度）。0.10,1.00,4.00mg.L-1的罗哌卡因提取回收率分别为87.79%、89.20%、89.71%,方法回收率分别为98.54%、102.29%、102.08%;内标曲马多的提取回收率为90.49%。结论该方法灵敏、结果可靠、准确,重现性较好,可用于罗哌卡因的血药浓度测定和其关节腔用药后的药动学研究。

梯度洗脱高效液相色谱法测定马来酸麦角新碱原料及其片剂的含量和有关物质

目的:建立梯度洗脱高效液相色谱法测定马来酸麦角新碱原料和片剂有关物质检查方法。方法:采用梯度洗脱,用ODS-3(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以0.015 mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液(磷酸调 pH 3.0)-乙腈(86:14)为流动相 A,0.015 mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液(磷酸调 pH 3.0)-乙腈(70:30)为流动相 B;流速:1.2 mL·min^(-1);检测波长:314 nm。结果:质量浓度在2.5～20.0μg·mL^(-1)内,马来酸麦角新碱线性关系良好(r=0.9998)。结论:本法简便、灵敏、专属,重现性好,结果准确可靠,可用于马来酸麦角新碱原料和片剂的含量和有关物质检测。

高效液相色谱法梯度洗脱测定三七中三七皂苷R_1含量

目的 :以HPLC梯度洗脱测定三七中三七皂苷R1含量。方法 :采用SphericorbNH2 柱 ,流动相为CH3CN CH3OH H2 O ,梯度洗脱浓度 5 5∶30∶15→ 70∶2 0∶10 ,波长 2 10nm ,外标一点法测定。结果 :以峰面积计算 ,三七皂苷R1在 5～ 40 μg·ml-1呈线性相关 ,γ =0 .994,最低检测限为 0 .6 μg·ml-1(S/N =3)。平均回收率 10 2 .6 % ,RSD为 1.43 % .日内误差RSD =1.7% (n =5 ) ,日间误差RSD =3 .0 % (n =4)。结论 :本法专属性强 ,结果准确 。

反相高效液相色谱中流动相线性梯度洗脱条件下溶质保留时间预测的新方法

在计算溶质的梯度保留时间时 ,根据流动相在色谱柱内的分布规律 ,对溶质在色谱柱内的迁移距离和流动相梯度同时进行校正 ,从而建立了一种预测溶质线性梯度洗脱条件下保留时间的新方法。该方法在不同的仪器系统中 ,对于弱保留和强保留溶质在不同线性梯度洗脱条件下保留时间的预测 ,都具有良好的准确度。以 15种氨基酸和 8种苯的同系物为例 ,该方法对于弱保留溶质保留时间的预测 ,相对平均误差分别为 3 70 %和 4 90 % ,远小于文献方法得到的结果 (2 3 6 1%和 31 16 % ) ;对于强保留溶质保留时间的预测 ,相对平均误差分别为 0 2 1%和6 0 1% ,略小于文献方法得到的结果 (0 81%和 6 6 9% )。

高效液相梯度洗脱法测定氨苄西林丙磺舒分散片中的有关物质

目的用高效液相色谱法测定氨苄西林丙磺舒分散片中的有关物质。方法色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱;检测波长232nm;采用A相(含20%磷酸盐缓冲液的乙腈溶液)B相磷酸盐缓冲液[水1mol·L-1磷酸二氢钾溶液1mol·L-1醋酸溶液(909∶10∶1)]为流动相进行梯度洗脱(A相的起始比例为10%,30min内上升至90%);流速为1mL·min-1;柱温为30℃;进样量为10μL。结果本法实现了在较短时间内将原料中引入的有关物质和强力破坏条件下产生的降解产物与主成分之间的基线分离。结论本色谱条件适合氨苄西林丙磺舒分散片中的有关物质的测定。

高效液相色谱梯度洗脱法测定大鼠胆汁中9-硝基喜树碱含量

目的建立大鼠胆汁中 9 硝基喜树碱的高效液相色谱梯度洗脱方法。方法胆汁样品经乙腈 水 ( 1∶1 )稀释后 ,直接进样。检测波长为 370nm ,采用HypersilBDSC18柱 ( 5 μm,1 5 0mm× 4 6mmI D )分离 ,使用以乙腈 2 %甲酸水溶液为流动相的二元梯度洗脱方法。结果线性范围为 0 5～2 5 μg/mL,定量限为 0 5 μg/mL。结论本法操作简便 ,成功应用于胆汁中 9 硝基喜树碱的含量的测定及胆汁中 9 硝基喜树碱代谢物的初步研究。

高效液相色谱梯度洗脱法测定不同中国产西红花药材中西红花苷Ⅰ、Ⅱ的含量

目的建立高效液相色谱梯度洗脱法测定国产西红花中西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的含量。方法采用反相高效液相色谱法,以Agilent ZORBAX StableBond SB-Aq(4.6 mm×250 mm,5μm)柱为色谱柱;流动相为0.01%甲酸(A)-乙腈(B),进行梯度洗脱,0～8 min(75%～70%A),8～10 min(70%～60%A),10～25 min(60%～30%A);流速:1.0 mL.min-1;进样量:5μL;测定波长:440 nm;柱温:30℃。结果西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的保留时间大约分别为5.71 min和8.83 min。以峰面积对进样浓度线性回归,西红花苷Ⅰ回归方程:Y=24.93X-0.254 3,r=1.000,线性范围3.125～200μg.mL-1,西红花苷Ⅱ回归方程:Y=36.11X+8.370,r=1.000,线性范围3.125～200μg.mL-1。西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的回收率分别为101.1%和100.2%,RSD分别为1.7%和1.4%。结论本方法可用于测定不同国产西红花药材中西红花苷Ⅰ、Ⅱ的含量,本方法操作简便,结果准确。

高效液相色谱梯度洗脱同时测定化妆品中防腐剂、抗氧化剂和杀菌剂

建立了一种灵敏、快速的高效液相色谱梯度洗脱同时测定化妆品中防腐剂、抗氧化剂和杀菌剂的方法。采用C8柱,以甲醇和水为流动相梯度洗脱,在检测波长273 nm用二极管阵列检测器,17 min内可将4种防腐剂、2种抗氧化剂和2种杀菌剂分离测定。方法快速准确,用于实际样品的测定。

反相高效液相色谱双梯度洗脱分离肽混合物及质谱分析

复杂肽段混合物的有效分离是高覆盖率地鉴定蛋白质混合物的前提。"鸟枪法"(Shotgun)蛋白质组学研究策略通常采用蛋白酶切、二维液相色谱-串联质谱分析肽段混合物从而鉴定蛋白质,其中高效率地分离肽段混合物是关键步骤之一。本文通过pH梯度结合有机溶剂梯度的反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行一维液相色谱分离,按等时间间隔收集馏分并将一个梯度的前段的一个馏分与后段一个馏分混合,然后进行纳升级液相色谱-质谱联用(nanoRPLC-MS/MS)分析。将该方法应用于酵母蛋白质的分离和鉴定,实验结果为:与常规的强阳离子色谱-反相液相色谱-质谱分离鉴定方法相比,采用pH梯度结合有机相梯度的RP-HPLC-RPLC-MS分离鉴定方法多鉴定到567个酵母蛋白质(簇,含有3 035个唯一肽段);其中鉴定到肽段的pI分布范围为3.42～12.01,相对分子质量范围为587.67～3 499.79;蛋白质的pI分布范围为3.82～12.19,相对分子质量范围为3 446.55～432 905。该结果表明这种方法在复杂体系蛋白质组分离鉴定中具有明显的优势,在蛋白质组学研究中有较好的应用前景。