临床高毒力致泻性沙门氏菌快速检测方法的初步建立

目的沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌,对公众的生命健康和财产安全造成重大危害。基于此,我们拟建立并验证一种基于多重PCR结合分子标记探针的检测方法用于快速筛查临床高毒力致泻性沙门氏菌,旨在指导临床快速甄别由高毒力沙门氏菌引起的感染,及时采取治疗措施,降低患者负担。方法对沙门氏菌基因组生物信息学分析后选择沙门氏菌中高保守的invA、常见毒力因子pagC基因及肠毒素编码基因stn作为检测靶点,每个靶点分别设计3套备选引物和探针,进行梯度PCR筛选得到扩增效率最佳的引物对和探针(invAF、invAR、invAP,pagCF、pagCR、pagCP,stnF、stnR、stnP)。收集40株分离自临床患者标本的沙门氏菌进行灵敏度分析,选择沙门氏菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌、产期肠杆菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、变形杆菌、鲍曼不动杆菌、粘质沙雷菌、嗜麦芽窄食单胞菌共12种临床常见细菌用于特异性验证。采用磁珠法抽提基因组DNA,将浓度稀释至10-2μg/ml用于特异性验证,将沙门氏菌基因组DNA进行倍比稀释,用于灵敏度验证。结果经验证,invA、pagC、stn作为多重PCR的3个检测靶标具有良好的检测性能,其中以invA为沙门氏菌菌种鉴定靶标其检测限可达为1×10^(-6)μg/ml(目标DNA浓度),特异性100%,以pagC、stn为区分高毒力沙门氏菌鉴定靶标其检测限分别可达为1×10^(-7)μg/ml、1×10^(-8)μg/ml(目标DNA浓度)。三个检测靶标分别标记不同检测波长的激发荧光基团,相互间无明显干扰。结论本研究建立的一种新的沙门氏菌检测方法具有较高灵敏度和特异性,能够快速准确鉴定患者是否存在致泻性沙门氏菌感染,为临床快速诊断沙门氏菌感染提供一种更加高效便捷的手段,该方法也可以对所感染沙门氏菌的毒力大小进行判断评估,为临床治疗方案的制定提供新的支撑。