高毒力肺炎克雷伯菌耐药性和治疗策略研究进展

近30年来,高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP)的检出率不断增加。以往学者们曾一度认为高毒力与耐药性不会在同一株肺炎克雷伯菌(KP)中重叠出现,但近年来hvKP耐药甚至多重耐药的报道越来越多,hvKP的高毒力及其与高耐药性的结合很可能会成为临床面临的重大挑战。文章就hvKP的流行病学特征、检测方法、耐药现状和治疗策略等进行阐述,以期为临床检测和治疗hvKP感染,预防和控制多重耐药hvKP的流行提供参考。

一株定植ST23-K1型耐碳青霉烯高毒力肺炎克雷伯菌的耐药性及全基因组分析

目的分析肺炎克雷伯菌临床分离株K63[第63号耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)]的毒力耐药情况及全基因组特征。方法收集分离自宁夏某医院新生儿重症监护室男性患儿痰液标本的肺炎克雷伯菌K63株,通过VITEK 2 Compact对其进行鉴定和药物敏感性试验。PCR法检测菌株毒力基因(ybtS、iutA、iucA、iroB、rmpA2、fimH、mrkD、peg344)和耐药基因(bla_(TEM)、bla_(SHV)、bla_(NDM)、bla_(IMP)、bla_(OXA-48)、bla_(VIM))。PacBio RSⅢ和illuminate高通量测序平台对其进行全基因组测序、基因组组装及生物信息学分析,获得菌株基因组特征。结果成功从呼吸窘迫和新生儿肺部感染患儿痰液标本中分离出一株CRKP,命名为K63。药敏结果显示其对碳青霉烯类、磺胺类、头孢菌素类、β-内酰胺类、β-内酰胺酶抑制剂复合物等抗生素均耐药。PCR结果显示,毒力基因ybtS、iucA、iutA、rmpA2、iroB、fimH、mrkD、peg344为阳性,同时携带bla_(TEM)、bla_(SHV)、bla_(NDM)及bla_(VIM)耐药基因。全基因组测序及组装得到1条完整的基因组序列及1条质粒序列,其基因组大小为5880871 bp,序列比对结果显示K63菌株为ST23-K1型。在染色体基因组基因鉴定中,发现有8种毒力基因,有7种耐药相关基因。质粒携带有bla_(SHV-66)、bla_(SNDM-5)、sul1、mphA和aph(3’)-Ia、tetC、vanA和mexe等耐药基因。clb(ABCDFGHIJKLMNOPQS)、glf、pilW、ibeB等毒力基因也被注释。同时,水平转移区域预测结果显示质粒pVir-CR-63-1具有转移的潜力。基因富集及功能分析显示主要富集于代谢相关通路。结论分离定植的K63株可能为高毒力耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌,有潜在传播风险,临床上应予以高度重视。

不同类型临床样本来源肺炎克雷伯菌耐药性和毒力分析

目的分析不同类型临床样本来源肺炎克雷伯菌(KP)的耐药性、生物膜形成能力、毒力基因和耐药基因的携带特点,及其相互间的联系,为控制医院内感染提供参考。方法收集2021年11月—2022年9月新乡市3家教学医院分离自痰液、尿液(中段尿)和血液样本的148株KP。采用全自动微生物鉴定系统进行细菌鉴定和药物敏感性分析,采用聚合酶链反应(PCR)检测菌株荚膜血清型、毒力基因和耐药基因,采用拉丝试验检测菌株高黏液表型,采用结晶紫染色法检测菌株生物膜的形成情况。结果148株KP中,有55株(37.2%)分离自痰液样本,40株(27.0%)分离自血液样本,53株(35.8%)分离自尿液样本。尿液样本的强生物膜形成菌株分离率(54.3%)高于痰液样本(27.5%)和血液样本(29.7%),差异有统计学意义(P=0.023);耐药率(69.8%)高于分离自痰液样本的菌株(49.1%)(P=0.028)。携带率(85.8%)最高的耐药基因是blaSHV-1。分离自痰液样本的KP毒力基因iroN、rmpA检出率高于尿液样本(P=0.004)和血液样本(P=0.012);wabG、fimH和mrkD基因携带率均>93.2%。携带iroN、iucA、rmpA基因和K1、K2血清型的KP对抗菌药物较敏感,且易检出高黏液表型(P<0.05)。高黏液表型KP菌株同时携带4种及以上毒力基因的构成比高于非高黏液表型KP菌株(P<0.001),且对抗菌药物更敏感(P<0.05)。74.5%的痰液样本来源KP同时携带4种及以上毒力基因,高于血液样本来源(52.5%)和尿液样本来源(49.1%)的KP(P=0.016);形成生物膜的KP菌株wabG、mrkD、uge和fimH基因携带率更高(P<0.05)。结论尿液样本来源的KP耐药率较高,且易形成强生物膜。某些特定毒力基因普遍存在于KP临床分离株中。痰液样本来源的KP毒力基因构成复杂,iroN、rmpA基因与呼吸系统KP感染有一定关系。iroN、iucA、rmpA基因和K1、K2血清型与KP高黏液表型有关,且携带此类基因和血清型的KP菌株对抗菌药物更敏感。

血流感染肺炎克雷伯菌Ⅵ型分泌系统(T6SS)的分布及其与毒力和耐药性的相关性分析

目的检测Ⅵ型分泌系统(T6SS)在血流感染分离肺炎克雷伯菌中的分布,并分析其与毒力基因、抗生素耐药之间的关系。方法收集我院血培养分离出的肺炎克雷伯菌,通过PCR方法检测T6SS基因、荚膜血清型和毒力基因,并通过VITEKR2 Compact进行药敏试验。结果56株肺炎克雷伯菌中,26株(46.43%)T6SS阳性。T6SS阳性株中K1、K2荚膜血清型和11个毒力基因的检出率高于T6SS阴性株(P<0.05)。T6SS阳性肺炎克雷伯菌对抗生素更敏感(P<0.05)。HvKP中T6SS阳性率显著高于T6SS阴性率(P<0.05)。从社区和肝脓肿中分离的T6SS阳性肺炎克雷伯菌更多(P<0.05)。糖尿病、携带Aerobactin、rmpA毒力基因是T6SS阳性肺炎克雷伯菌引起血流感染的独立危险因素。结论Ⅵ型分泌系统(T6SS)在引起血流感染的肺炎克雷伯菌中检出率较高,T6SS阳性株携带更多的毒力基因,可能是导致血流感染的主要原因。

肺炎克雷伯菌毒力基因检测及新型标志物对高毒力肺炎克雷伯菌的诊断效能

目的探讨肺炎克雷伯菌(KP)毒力基因检测及新型标志物对高毒力肺炎克雷伯菌(HVKP)的诊断效能。方法从2020—2023年住院患者中根据病史和病原学检测结果,挑选出KP阳性患者,从医院菌库里获得对应的非重复KP菌株45株,作为HVKP组;从菌库里随机挑选血液感染患者KP菌株,并按照具体病史剔除伴有其他感染的菌株,最终获取菌株48株,作为普通肺炎克雷伯菌(cKP)组。比较2组血清型和高毒力基因的阳性率,计算2组比较有统计学差异的基因诊断效能。应用多因素Logistic回归分析寻找HVKP诊断分子标志物。结果HVKP组与cKP组相比,K1型比较差异有统计学意义(P<0.01)。HVKP组毒力基因阳性率排名前3种的依次是PEG344、uge、fimH,相较于cKP组,比较存在统计学差异的毒力基因分别是fimH、rmpA2、aero、iutA、kfuBC、PEG344(P<0.01)。诊断效能排序:rmpA2<fimH<aero<K1<kfuBC<iutA<PEG344。多因素Logistic回归分析显示,iutA、PEG344是HVKP的影响因素(P<0.01)。结论HVKP感染以K1血清型为主,rmpA2、fimH、aero、iutA、kfuBC、PEG344基因可作为HVKP诊断的分子生物标志物,且以PEG344、iutA的诊断效能较高。

高毒力肺炎克雷伯杆菌致多部位感染的病例分析

肺炎克雷伯杆菌是一种常见的机会性病原体,基于其高毒力性和易发转移性感染的特征,可引起呼吸系统感染、泌尿系统感染以及肝脓肿等,甚至可以发展成脓毒血症。根据其毒力特征,可分为经典和高毒力肺炎克雷伯杆菌,高毒力肺炎克雷伯杆菌感染常发展迅速,累及全身,病情危重,预后极差,死亡率高。本文选取本院近期收治的3例肺炎克雷伯杆菌感染患者,均有多个器官及组织脓肿,伴有严重的多脏器损害,病情进展迅速,其中1例患者死亡,其余2例患者治疗时间长,迁延多个部位感染,本文总结归纳3例患者特点及治疗方案,对其进行回顾性分析,为临床应对此类感染提供参考,望对此病菌得到重视,早期根据药敏结果针对性用药,缩短患者住院时间,提高临床治疗效果,改善预后。

血液感染来源肺炎克雷伯菌毒力与碳青霉烯类耐药表型的关系及碳青霉烯类耐药高毒力菌株的鉴定

目的:探讨本地区从血培养分离的肺炎克雷伯菌临床株的毒力与碳青霉烯类耐药表型的关系,并对碳青霉烯类耐药高毒力肺炎克雷伯菌(CR-HVKP)进行毒力表型验证。方法:收集2016—2019年血流感染患者血培养分离的192株非重复肺炎克雷伯菌,其中96株为碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP),96株为碳青霉烯敏感肺炎克雷伯菌(CSKP)。采用VITEK-2全自动微生物分析仪检测菌株对药物的敏感性,聚合酶链反应检测碳青霉烯类耐药基因、毒力基因和荚膜分型,拉丝实验检测菌株的高黏表型,全基因组测序方法检测CR-HVKP菌株的基因组特征,并通过血清抗性试验和生物膜形成试验进一步验证CR-HVKP的毒力。结果:CRKP对常见抗菌药物耐药率高,CSKP则对常见抗菌药物较敏感;除米诺环素外,CRKP组和CSKP组菌株对抗菌药物的耐药率差异均有统计学意义(均P<0.05)。96株CRKP中,92株携带碳青霉烯酶基因,以bla KPC-2为主。在毒力因子方面,4株CRKP和36株CSKP拉丝试验阳性,呈现为高黏表型,两者差异具有统计学意义(P<0.05)。与CRKP组比较,CSKP组Kfu、aerobictin、iutA、ybtS、rmpA、magA、allS等毒力基因检出率均增加,荚膜抗原K1和K2检出率也增加(均P<0.05)。CRKP组检出高毒力肺炎克雷伯菌(HVKP)1株(即CR-HVKP),CSKP组检出HVKP 36株,差异有统计学意义(P<0.05)。全基因组测序结果显示,CR-HVKP多位点序列分型为412,荚膜抗原为K57,携带iutA、entB、mrkD、fimH和rmpA毒力基因,生物膜形成能力和血清抵抗力强,同时携带blaSHV-145、blaTEM-1、blaCTX-M-3、fosA6、oqxA5、oqxB26和aac(3)-IId耐药基因,伴随外膜蛋白K(OmpK)35和OmpK36的异常。结论:CRKP对抗菌药物的耐药率明显高于CSKP,虽然其携带的毒力基因数和种类均少于CSKP,但也出现了碳青霉烯类耐药且高毒力的新型多位点序列分型肺炎克雷伯菌。后者可能对公共卫生造成严重威胁。

香芹酚抑制高毒力肺炎克雷伯菌生物被膜形成机制的研究

目的探究香芹酚抑制高毒力肺炎克雷伯菌生物被膜形成的潜在作用机制。方法通过检测香芹酚对高毒力肺炎克雷伯菌生物被膜形成和形态学的影响、胞外多糖及荚膜多糖含量的改变,以及生物被膜相关基因rmp A2、mag A、mrk A、mrk B、tre C表达量的变化,分析其作用的可能机制。结果香芹酚对高毒力肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度为512μg/mL,且对该菌生物被膜形成有明显的抑制作用,其效应呈浓度依赖性;扫描电镜观察显示,香芹酚干预状态下,生物被膜结构松散,细胞之间连接不致密;刚果红吸附试验与间羟基联苯比色法测定表明,香芹酚可降低高毒力肺炎克雷伯菌荚膜多糖含量而不影响胞外多糖总含量;荧光定量PCR显示,在亚抑菌浓度香芹酚作用下,有关荚膜多糖合成、糖转运系统及菌毛黏附相关基因表达量降低均超过50%。结论香芹酚对高毒力肺炎克雷伯菌生物被膜形成具有明显的抑制作用,其机制可能与降低细菌荚膜多糖合成、糖转运系统及菌毛黏附等生物被膜相关基因的表达有关。

三株致肝脓肿高毒力肺炎克雷伯菌的生物学特性及基因特征分析

目的了解引起化脓性肝脓肿(pyogenic liver abscess,PLA)的高毒力肺炎克雷伯菌(Hypervirulent Klebsiella pneumoniae,hvKp)的耐药机制、毒力特征及致病作用,同时为该细菌临床抗感染治疗提供相关数据。方法收集3株在西安交通大学第一附属医院不同科室肝脓肿患者肝脏脓肿液中分离出的肺炎克雷伯菌,用拉丝试验确定其高毒表型;VITEK 2 Compact全自动微生物分析系统进行药敏试验;全基因组测序技术确定其荚膜血清型、多位点序列分型(MLST)、毒力基因与耐药基因等分子特征;建立小鼠感染模型进行致病性试验。结果分离菌株黏性较大,黏液丝牵拉长度>5 mm,均为高黏液表型;除146007为多重耐药菌外,其余2株菌的抗生素敏感性较高;其全基因组序列测定显示,分离菌株均为高毒力型,携带毒素质粒rmpADC/rmpA2,铁摄取系统、菌毛及分泌系统等多种毒力因子,3株分离株均为rmpA/rmpA2合并iucA/iutA阳性,可判定为hvKp;检测到多种耐药基因,如β-内酰胺酶基因blaTEM、blaSHV和blaCTX-M等;分离菌株对小鼠有较强致病性,剖检死亡小鼠可见其各器官均有不同程度病变。结论本文分离出的3株hvKp携带多种耐药基因与毒力基因且致病性较强,提示实验室和临床应及时识别并采取必要的处置策略,防止hvKp进一步扩散。

噬菌体PCCM_KpP1172的鉴定及其对大蜡螟幼虫碳青霉烯耐药高毒力肺炎克雷伯菌感染的疗效评估

背景碳青霉烯耐药的高毒力肺炎克雷伯菌感染发生率逐年增加,临床治疗困难,死亡率高。使用具有高裂解能力的噬菌体治疗细菌感染是颇具前景的治疗方法。目的针对碳青霉烯耐药高毒力肺炎克雷伯菌分离一株新型裂解性T7噬菌体,对该分离株进行生物学特性测定和基因组学测序分析,为临床开展噬菌体治疗提供可应用的噬菌体资源。方法从肺部感染患者的痰液中分离出肺炎克雷伯菌,通过细菌鉴定、药敏分析、全基因组测序和PCR检测验证菌株的毒力基因与耐药基因,以此株肺炎克雷伯菌为宿主菌,在污水中分离出一株裂解性噬菌体,命名为PCCM_KpP1172。测定该噬菌体生物学特性,分析其基因组序列,并通过大蜡螟幼虫感染模型检测该噬菌体的治疗效果。结果该株肺炎克雷伯菌基因组分析存在耐药基因与毒力基因rmpA2、rmpA、iroN、icu。以此菌株为宿主菌分离到新型肺炎克雷伯菌噬菌体,命名为PCCM_KpP1172,在宿主菌菌苔上可形成完全透明的噬菌斑并伴晕圈;透射电镜下呈现有尾噬菌体目短尾病毒科病毒的典型形态特征;一步生长曲线显示其潜伏期为15 min,最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.0001,对ST11KL64型肺炎克雷伯菌有广泛裂解范围。基因组分析显示,该噬菌体为双链DNA(总长度为40222 bp),G+C含量为53%,基因组包含49个开放阅读框(open reading frames,ORF),无毒力或抗生素耐药性相关基因。基于系统发育分析,该噬菌体可归属于有尾噬菌体目Studiervirinae亚科Przondovirus属的一个新种。此外,噬菌体PCCM_KpP1172可在体外3 h内有效抑制碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌的生长,并能提高宿主菌感染的大蜡螟幼虫存活率(P<0.01)。结论本研究针对碳青霉烯耐药的高毒力肺炎克雷伯菌分离并鉴定了一株新的T7噬菌体PCCM_KpP1172,具有高裂解力,无耐药基因和毒力基因,对大蜡螟幼虫感染模型具有良好治疗效果。

12株桑源克雷伯菌属细菌耐药性、毒力基因及分子分型分析

目的为了解不同来源的人类条件病原体的特征和耐药机制,预防环境病原体和医院病原体交叉感染,对桑树中分离的克雷伯菌进行耐药性、毒力基因、分子分型特点的探究。方法从广东和广西两地采集桑树和桑树根际土壤样本,其中共分离得到12株克雷伯菌,对其采用纸片扩散法(K-B法)检测菌株耐药性表征;采用PCR技术对6类9个抗生素相关耐药基因和毒力基因进行检测;采用多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术进行遗传分析。结果12株桑源克雷伯菌检测到bla_(SHV)、tet(D)、tet(A)和aadA14种耐药基因,其中携带氨基糖苷类相关基因aadA1的有5株(41.67%);12株桑源克雷伯菌均对氨基糖苷类抗生素红霉素和链霉素表现出耐药,对6种以上抗生素耐药的菌株有6株(50%),对7种抗生素耐药的菌株有2株(16.67%);8株(66.67%)携带脂多糖相关的wabG毒力基因;MLST分析显示12株桑源克雷伯菌划分为3大类,包括产酸克雷伯菌复合体(Klebsiella oxytoca species complex,KoSC)、肺炎克雷伯菌复合体(K.pneumoniae species complex,KpSC)以及产气克雷伯菌(K.aerogenes);可分成7个序列型(sequence typing,ST),ST260为优势序列型,有5株(41.67%)。结论12株桑源克雷伯菌对氨基糖苷类抗生素耐药情况严峻,氨基糖苷类aadA1耐药基因检出率最高;ST260是主要的序列型,菌株之间存在遗传多样性,为环境中桑树来源的克雷伯菌病原体致病机制提供理论依据。

高毒力肺炎克雷伯菌的研究进展

近年来,高毒力肺炎克雷伯菌在全世界广泛传播,与经典肺炎克雷伯菌不同,高毒力肺炎克雷伯菌常引起免疫力正常的健康人群多部位的严重感染。毒力基因与耐药基因不断融合形成耐药高毒力肺炎克雷伯菌问题日益严重,甚至出现耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌。本文从高毒力肺炎克雷伯菌的耐药性、相关毒力因子及疫苗研发等方面进行综述。

耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌形成机制的研究进展

肺炎克雷伯菌(KP)是临床上一种不容忽视的机会性病原体,它能够导致免疫功能低下个体发生社区获得性感染和医院感染。近期,一种新型的肺炎克雷伯菌亚型——耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌(CR-HvKP)的出现引起了关注。CR-HvKP不仅具备CRKP的高耐药性和传播性,还具有HvKP的高致病性,使其在临床治疗中极具挑战性。本文讨论CR-HvKP的三种形成原因,包括CRKP菌株获得毒力、HvKP菌株获得耐药和KP携带一个既有耐药基因又有毒力基因质粒等。此外,还介绍CR-HvKP的流行病学特征,治疗方法和预防措施,以期为临床诊疗提供依据。

高毒力肺炎克雷伯菌侵袭性感染研究进展

高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent Klebsiella pneumoniae, hvKP)作为一种侵袭性肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae, KP)菌株,目前已在全球范围内广泛传播。该菌株的高毒力使其可生存于免疫功能正常的人群中,且容易引起严重的侵袭性感染,包括化脓性肝脓肿、内源性眼内炎、脑膜炎、坏死性筋膜炎等,许多患者经积极治疗后仍出现不可逆的灾难性残疾,整体预后差。本综述就hvKP引起的各类侵袭性感染的临床表现、感染机制、危险因素、临床诊疗及预后等多方面进行论述,总结经验,为临床提供诊疗思路,以期改善相关患者的预后。

广州某三甲医院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药及毒力基因分析

目的统计院内耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)检出率,分析CRKP的主要耐药基因及毒力基因,了解其感染菌株分子流行病学机制。方法回顾性分析2020-2023年广东省第二中医院(下称该院)CRKP检出率,并收集该院2022年7-12月共计84株CRKP,统计菌株临床资料,PCR扩增相应耐药基因及毒力基因,改良碳青霉烯灭活(mCIM)试验检测碳青霉烯酶。结果2020-2023年该院年CRKP检出率较高,均>46.00%;收集2022年7-12月临床分离84例非重复CRKP菌株,呼吸道来源样本最多,占55.95%,患者以针灸康复科为主,占34.52%;药敏试验显示对多种头孢类及超广谱β内酰胺类药物高度耐药,仅对替加环素及多黏菌素E呈现较高敏感性;mCIM试验阳性率为84.52%(71/84),其余15.48%结果为中性,未能判断是否产碳青霉烯酶。73株检出携带碳青霉烯酶基因,占86.90%,共涉及4种基因型,blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaOXA-48的检出率分别为83.33%、2.38%、1.19%、1.19%;其中1株同时携带blaKPC及blaNDM基因,同时检出多种β内酰胺酶,blaSHV、blaTEM、blaCTX-M-9、blaCTX-M-1的检出率分别为96.43%、78.57%、64.29%、2.38%,5种毒力基因blaiucA、blarmpA2、blairoB、blapeg-334、blarmpA检出率分别为42.86%、41.67%、27.38%、3.57%、2.38%;同时携带3种及以上毒力基因的菌株占比为17.85%(15/84)。结论该院CRKP检出率较高,耐药情况严峻,耐药基因以肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)为主;出现较高比例的耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌(CR-hvKP)菌株,感染防控情况不容乐观。应进一步加强院内感控措施,科学合理规范用药。

高毒力肺炎克雷伯菌耐药性及治疗策略应用进展

高毒力肺炎克雷伯菌是一种抗生素耐药性强的细菌。其抗药性主要是由于产生代谢酶以及减少外膜蛋白质等多种原因造成的。高毒力肺炎克雷伯菌感染对常规抗生素抗性较强,很难治疗,因此成为了临床重要的难治疾病之一。肺炎克雷伯菌是一种常见的致病菌,在医院感染和社区获得性感染中都有较高发病率。近年来,KP对多种抗生素的耐药性不断出现和增强,已经成为临床上急需解决的问题之一。本文对高毒力肺炎克雷伯菌的耐药性及治疗策略应用的进展进行了综述。

生物标志物联合大蜡螟感染模型在鉴别临床高毒力肺炎克雷伯菌中的应用

目的探讨生物标志物检测联合大蜡螟感染模型准确鉴别临床高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP)的应用价值。方法非重复收集2020年1月至2021年12月徐州医科大学附属医院分离自重症监护室患者的肺炎克雷伯菌,经拉丝实验和毒力基因检测鉴定出生物标志物阳性的肺炎克雷伯菌,并进行荚膜血清分型和多位点序列分型。使用标准菌株ATCC700603、ATCC43816建立大蜡螟感染模型,将临床分离的肺炎克雷伯菌分别制作4个不同浓度的菌液进行大蜡螟感染试验,每12小时记录死亡情况,绘制生存曲线并计算72 h 50%致死量(LD_(50))。结果共收集15株hvKP,检出3种血清型,分别为K1 ST23型(13.3%,2/15)、K64 ST11型(60.0%,9/15)、K112 ST15型(26.7%,4/15)。K1和K64型的菌株均含有rmpA、rmpA2、iucA和iroN 4个毒力基因,而K112型的4株均只含有rmpA2和iucA 2个毒力基因。K64 ST11型和K112 ST15型菌株均对碳青霉烯类抗菌药物耐药。大蜡螟能够区分出高毒力和低毒力肺炎克雷伯菌,当菌液浓度分别为1×10^(5) CFU/mL、1×10^(6) CFU/mL、1×10^(7) CFU/mL、1×10^(8) CFU/mL时,ATCC700603和ATCC43816对应浓度比较,差异有统计学意义(P=0.0001、0.0023、0.0245、0.0428)。未做任何处理的空白对照和注射了磷酸盐缓冲液的大蜡螟均存活,随着菌液浓度的升高,大蜡螟的病死率也随之升高。与高毒力标准菌株ATCC43816相同,K1、K64、K112型临床菌株均表现出高致死率,当菌液浓度在1×10^(7)~1×10^(8) CFU/mL时,所有大蜡螟在48 h内死亡。1×10^(6) CFU/mL的菌液可区分出hvKP和cKP,差异均有统计学意义(P<0.05)。ATCC700603、ATCC43816、K1型、K64型、K112型和cKP在72 h的LD_(50)分别为5.2×10^(6) CFU/mL、6.8×10^(4) CFU/mL、1.0×10^(4) CFU/mL、1.0×10^(4) CFU/mL、3.1×10^(4) CFU/mL、1.6×10^(6) CFU/mL,对应的Log10LD_(50)分别为6.718、4.834、3.987、3.987、4.504、6.212,临床分离的K1型、K64型、K112型肺炎克雷伯菌均可被定为高毒力菌株。结论生物标志物联合大蜡螟感染模型,可以准确实现临床经典肺炎克雷伯菌和高毒力肺炎克雷伯菌的鉴别。

高黏液表型肺炎克雷伯菌的临床分布特征及毒力分析

目的分析医院临床分离的肺炎克雷伯菌的临床分布特征及毒力基因,为临床治疗及医院感染防控提供参考依据。方法收集2022年1至12月宁波市医疗中心李惠利医院临床分离的96株对常规抗菌药物全敏感肺炎克雷伯菌,分析菌株的临床特征并检测其毒力基因。结果96株全敏感肺炎克雷伯菌中,K1、K2、K57为主要荚膜血清型,ST23为主要流行的多位点序列分型表型,其次为ST25、ST86型;高黏液表型肺炎克雷伯菌的铁载体基因ybtS、菌毛定值与黏附基因ycfM以及pLVPK-like毒力质粒pagO基因的携带率均为100.00%,常见的毒力基因如荚膜多糖生成调节基因(rmpA),铁载体基因(irp-1、fyuA、irp-2、aerobactin、repA),菌毛定值与黏附基因(mrkD),脂多糖形成相关基因(wabG)及pLVPK-like毒力质粒相关基因(rmpA2、iroB、icuA、terB、sills)的携带率均高于非高黏液表型肺炎克雷伯菌,差异均有统计学意义(均P<0.05);另外,分离出33株pLVPK-like毒力质粒阳性肺炎克雷伯菌。结论宁波市医疗中心李惠利医院高黏液表型全敏感肺炎克雷伯菌的毒力基因携带率较高,毒力质粒传播较为严重,提示宁波地区亟需关注医院感染防控,谨防全敏感肺炎克雷伯菌同时获得毒力质粒和耐药质粒成为“超级细菌”,给临床治疗带来严峻挑战。

高毒力肺炎克雷伯菌感染的研究进展

肺炎克雷伯菌是临床上分离率仅次于大肠埃希菌的革兰阴性杆菌,经典的肺炎克雷伯菌(cKP)感染的对象大多为有基础疾病、抵抗力低下、年龄较大的住院患者,而1986年在我国台湾省学者报道的病例中,发现一种新的肺炎克雷伯菌变种,该变种可以感染无肝病基础的患者,使其发生肝脓肿,并且这种化脓性感染病灶可以向远处(如肺、脑等)转移[1]。

32株碳青霉烯类耐药的高毒力肺炎克雷伯菌血清荚膜、毒力基因及多位点序列分型

目的探讨耐碳青霉烯高毒力肺炎克雷伯菌(CR-hvKP)的基因型、耐药现状及相关感染因素,为临床的早期预警提供参考。方法收集2018年2月至2022年11月在浙江中医药大学附属温州市中医院进行细菌培养的非重复耐碳青酶烯类肺炎克雷伯杆菌(CRKP)共230株,采用MALDI-TOF质谱仪细菌鉴定,VITEK-2 Compact进行药敏实验,采用反转录PCR法检测碳青霉烯耐药基因、血清分型和毒力基因,并进行多位点序列分析(MLST)分型。结果230株CRKP中共有CR-hv KP 32株(13.91%),其中32株CR-hv KP对亚胺培南、卮他培南、哌拉西林/他唑巴坦、氨苄西林/舒巴坦耐药率为100%,其次为头孢替坦(82.1%)、头孢吡肟(84.3%)、呋喃妥因(89.3%)、环丙沙星(78.5%)、庆大霉素(60.7%)、妥布霉素(60.6%)、阿米卡星(60.7%)、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑(37.5%)。通过PCR及琼脂糖电泳分析共有K1型2株、K2型2株、K5型1株,部分常见毒力基因携带率超过50%,其中rmp A占56.25%(18/32)、iro N占59.37%(19/32)、aerobactin占18.75%(6/32)、mag A占6.25%(2/32)。MLST主要以ST11、ST23为主,结论血清型以K1、K2为主的碳青霉烯类耐药的肺炎克雷白菌,大部分以rmp A、iro N毒力基因为主,MLST主要以ST11、ST23为主,基因型复杂,临床上要加强该类菌株的流行病学监测与基因型分析。