高渗法制备过程中红细胞及其吗啡载体的形态学

目的 了解高渗法制备吗啡红细胞载体过程中红细胞形态及体积的变化规律,为阐明红细胞药物载体的载药机制提供依据。方法 采用自动化血细胞分析仪及倒置显微镜、扫描电子显微镜等技术,对正常红细胞、脱水红细胞及载药红细胞的体积、体积分布宽度、直径、厚度、外观等指标进行观测,比较载体形成前后红细胞的形态学变化。结果 经高渗脱水的红细胞的体积较正常的缩小18.7％,载药红细胞的体积分别较正常及脱水红细胞增大20.4％和49.8％;载药红细胞趋球形状态,脱水红细胞则趋扁平状态;有一定量的脱水红细胞呈空泡状态;部分脱水红细胞表面皱缩,当其形成载药红细胞时,皱缩现象基本消失。结论 利用红细胞在高渗液中脱水在低渗药液中膨胀的原理,制备红细胞药物载体。

高渗制备法对吗啡红细胞载体生成数及其血红蛋白含量的影响

目的 :了解高渗法制备过程中渗透压变化对吗啡红细胞载体生成数及其血红蛋白 (Hb)含量的影响。方法 :采用冰点渗透压仪测定高渗法制备吗啡红细胞载体过程中的渗透压变化 ,利用自动化血细胞分析仪、氰化高铁法、显微镜等仪器及技术 ,对制备过程中Hb释出量、红细胞计数及其显微图像等进行研究。结果 :高渗法制备过程中环境的最低渗透压为 382 1± 2 2 7mOsmol/L ;载体形成前后红细胞计数的变化无统计学意义 (P >0 0 5 ) ;红细胞经高渗法制备成吗啡载体后 ,Hb释出百分率为 (38 6± 2 8) % ;显微图像上高渗液处理的红细胞中有大量圆形空泡。结论 :高渗法制备中渗透压对吗啡红细胞载体的生成数无影响 ,但可导致红细胞中血红蛋白的大量释出 ,此现象可能与高渗糖处理后红细胞膜通透性发生了改变有关。

研究水稻种子萌发特性和抗旱性关系的高渗溶液法

鉴定农作物抗旱的方法大致可分为田间鉴定法、干旱棚或人工模拟气候箱法以及实验室法。在实验室法中根据高渗溶液中种子萌发百分率评价品种苗期的抗旱性是常用的一种方法,例如Ashraf等的模拟不同水分张力的方法以及陈培元等对采用甘露醇溶液模拟水分胁迫条件测定小麦种子萌发特性等。但由于标准掌握不一,因而对实验室法尚有不同的看法。有人认为,高渗溶液下的发芽率不能代表出苗期的抗旱性。

用高渗盐水冲洗鼻腔法对56例妊娠期鼻炎患者进行治疗的效果探究

目的:探讨用高渗盐水冲洗鼻腔法对56例妊娠期鼻炎患者进行治疗的临床效果。方法:对2016年1月至2016年12月期间某院收治的112例妊娠期鼻炎患者的临床资料进行回顾性研究。随机将这112例患者分为生理盐水组(56例)和高渗盐水组(56例)。对生理盐水组患者使用生理盐水冲洗鼻腔法进行治疗,对高渗盐水组患者使用高渗盐水冲洗鼻腔法进行治疗,然后比较两组患者治疗前后鼻塞症状的评分以及治疗的总有效率。结果:治疗前,两组患者鼻塞症状的评分相比差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组患者鼻塞症状的评分均明显降低,其中高渗盐水组患者鼻塞症状评分下降的幅度更大,与生理盐水组患者相比差异有统计学意义(P<0.05)。高渗盐水组患者治疗的总有效率为92.86%,生理盐水组患者治疗的总有效率为78.57%,二者相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:用高渗盐水冲洗鼻腔法对妊娠期鼻炎患者进行治疗的效果显著,能有效地改善其临床症状。

不同方法提取的肿瘤抗原对小鼠CTL的体外激活效应的比较

目的 梯度高渗法，弱酸洗脱法，43℃加热处理等方法提取小鼠HepA22肝癌细胞抗原，用以致敏小鼠脾细胞，观察其对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的体外激活效应。方法①梯度高渗法，即2．7％NaCl，1．8％NaCl和蒸馏水3次低温高速离心，收集上清提取。②弱酸洗脱，以pH3．3的枸橼酸—磷酸盐缓冲液室温下处理HepA-22细胞5min，低速离心，收获上清。③43℃加热处理，将HepA-22细胞置于43℃．恒温水浴16h。④用提取的抗原致敏小鼠脾细胞，MTT法检测其体外CTL杀伤活性。结果 ①相同抗原浓度，不同条件或不同提取方法所获得的抗原对小鼠脾细胞CTL杀伤能力的激活作用不相同。②经过43℃处理后提取的抗原比未经加热处理提取的抗原作用大。③弱酸洗脱提取的膜抗原作用最明显。④去掉膜抗原后再提取的蛋白激活作用最小。⑤同种提取方法不同浓度抗原作用不同，随着浓度增高，CTL活性增强。结论 ①43℃加热处理可以诱导HepA-22细胞产生HSP-抗原肽复合物，增加其对小鼠CTL活性激活作用。②弱酸可以洗脱肿瘤细胞表面的I类抗原肽，该多肽致敏的小鼠脾细胞可以有效地诱导特异性抗肿瘤免疫功能。

几种快速提取新生隐球菌DNA的方法

目的 探讨几种快速提取新生隐球菌DNA方法的效果。方法 分别用玻璃珠机械破裂法、酶消化法、高渗剂破裂法及三法联合法提取有荚膜的新生隐球菌B 3 50 1野生株DNA ,用联合法提取 5种血清型新生隐球菌标准株的DNA ,用紫外分光光度计检测提取DNA的浓度和纯度。结果 4种方法抽提 2ml新生隐球菌培养液 (菌体数约为 1×10 8个 /ml) ,可获得DNA的量约是 64～ 2 0 3 μg。酶消化法、高渗剂破裂法及三法联合法抽提的DNA ,其OD2 60 /OD2 80比值均小于 1.8。结论 除玻璃珠机械破裂法外 ,酶消化法、高渗剂破裂法 ,以及三法联合法均可用于快速抽提新生隐球菌的DNA。

碱性蛋白酶PB92在枯草芽孢杆菌中高效转化方法的建立及其分泌表达

枯草芽孢杆菌转换效率低一直制约着该菌基因改造技术的应用,本研究比较了化学法和高渗电转化法对枯草芽孢杆菌转化率的影响,发现高渗电转化法的转化效率较高。从Bacillus alcalophillus PB92中扩增出碱性蛋白酶基因Mapr,构建成重组分泌型表达载体pWB980-Mapr,碱性蛋白酶基因在枯草芽孢杆菌DB104中得到表达。SDS-PAGE分析,重组蛋白酶的分子量为28000。pWB980-Mapr在枯草芽孢杆菌中表达的酶活为1563 U/ml。

高渗雾化治疗急性咽喉炎的初步探讨

用高渗雾化吸入法治疗急性咽喉炎50例,总有效率为100％。结果表明,此法较普通雾化法见效快、疗效高,无副作用。对高渗雾化液的配制、药理作用、使用方法进行了讨论。

红细胞作为吗啡载体延长吗啡镇痛时效的研究(英文)

探讨用高渗法制备红细胞包蔽吗啡溶液(RBC-M)的可行性,对RBC-M制备过程中红细胞(RBC)的体积和形态的变化、RBC-M溶液内外的吗啡(M)浓度及含量的变化以及择期上腹部手术患者应用RBC-M溶液术后镇痛的时效和吗啡的血药浓度进行了研究.研究发现:(1)用高渗法制备红细胞包蔽吗啡溶液是可行的.(2)RBC-M溶液与单纯M溶液相比其术后镇痛作用显著延长;其药代动力学指标消除半衰期(T1/2)延长3倍多,曲线下面积(AUC0→∞)增加约11倍,而清除率(CL)明显减小约9倍.(3)用RBC-M溶液行术后镇痛的患者其时效明显优于单纯用吗啡的患者.

一种新型无细胞真皮基质的研制

目的:研制一种新型的无细胞真皮基质。方法:用高渗盐除去异体皮肤的表皮细胞,经戊二醛交联后以低浓度NaOH消蚀以除去真皮中的细胞成分,得到无细胞真皮基质。结果:皮肤中所有细胞成分都被消除,胶原纤维稍松散,结构完整,排列正常。结论:经高渗盐-NaOH消蚀法能完全去除皮肤中的细胞成分而不损伤胶原纤维的三维结构,制备过程简单,具有很大的临床应用价值。

猪小肠黏膜下层基质支架材料复合脂肪基质干细胞的生物相容性

背景:小肠黏膜下层具有良好的细胞、组织相容性和降解性,是一种理想的组织工程支架材料,将脂肪基质干细胞与小肠黏膜下层复合后进行定向诱导,可构建靶组织,具有一定的临床应用潜能。目的:制备脱细胞猪小肠黏膜下层基质,并检验其与家兔脂肪基质干细胞的生物相容性。方法:使用酶消化-高盐水脱细胞法处理猪小肠黏膜下层,石蜡切片检测脱细胞效果,扫描电镜观察小肠黏膜下层表面结构。体外分离培养家兔脂肪基质干细胞,分别将第3代脂肪基质干细胞单面复合和双面复合至小肠黏膜下层培养1周观察材料上下表面细胞复合情况。结果与结论:小肠黏膜下层材料为白色半透明膜状物,石蜡切片显示细胞去除彻底,扫描电镜显示小肠黏膜下层黏膜结构紧密,浆膜面纤维结构松散。脂肪基质干细胞与材料复合后,通过相差显微镜观察到细胞在小肠黏膜下层上附着生长,扫描电镜检测提示单面复合脂肪基质干细胞的小肠黏膜下层,仅在上表面有大量细胞生长,下表面无细胞或仅有少量细胞生长,双面复合脂肪基质干细胞的小肠黏膜下层上下表面均可见大量细胞融合生长,石蜡切片可见细胞贴附于材料表面生长。提示酶消化-高渗盐水法可彻底去除小肠黏膜下层表面细胞成分,小肠黏膜下层对脂肪基质干细胞的生长具有良好的支持作用。

粒用菜豆种质资源芽期抗旱性研究

对６１５份粒用菜豆资源采用蔗糖高渗溶液鉴定法，筛选出高度抗旱优异资源１４份，对不同省（区）资源的抗旱性分布及优异资源的生物学性状进行了论述，阐明了抗旱性与生态环境及性状间的关系。

戊二醛交联优化脱细胞真皮基质的生物相容性

目的通过体内包埋实验将优化的脱细胞真皮基质(ADM)与成纤维细胞(FB)体外培养,探讨是否具有生物相容性。方法用高渗盐-NaOH消蚀法制备得到大鼠ADM,用低浓度戊二醛交联ADM,未交联A组(0min)作为对照,根据交联时间不同分成B组(10min)、C组(15min)和D组(30min)。通过大鼠体内包埋实验对比各组ADM物理性状、包埋后面积、炎性反应、浸润生长的FB和毛细血管数目,选择出最佳交联时间。制备优化的人ADM,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测ADM的细胞毒性;人FB与ADM复合培养检测其细胞相容性,用免疫组织化学和透射电镜观察FB的生长和增殖情况;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测FBⅠ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结果大鼠体内包埋实验显示,4周取材,未交联组不易触及移植物,植入物和周围的软组织基本融合难以分开;未交联组ADM的面积较包埋前缩小;未交联组ADM内有少量炎性细胞,胶原纤维嗜酸性弱;交联组ADM内未见炎性细胞,浸润生长的FB数目、血管数目与戊二醛交联时间的单因素相关性分析呈负相关;最佳的交联时间为10min。体外培养显示,优化ADM的细胞毒性反应0～1级;人FB能够很好地在优化的ADM表面贴附、生长和增殖;ADM内FBⅠ型、Ⅲ型前胶原mRNA的表达降低。结论高渗盐-NaOH消蚀法制备ADM,工艺简单、成本低、生物相容性好,可以提供细胞生长的空间,并可在细胞间转导通讯和信号,下调细胞外基质代谢系统。

ADM调控细胞生长的生物学性质及修复皮肤缺损的实验研究

目的:探讨高渗盐-NaOH消蚀法制备脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)调控成纤维细胞(fibroblast,FB)生长的生物学性质并进行皮肤缺损修复的动物实验。方法:用高渗盐-NaOH消蚀法制备得到人ADM,将人FB与ADM体外复合培养,免疫组化和透射电镜鉴定细胞生长和增殖情况;通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测FBⅠ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。同样方法制备大鼠ADM,观察其结构;制备SD大鼠全厚皮肤缺损的模型,将ADM移植到创面进行修复。术后2周、4周、6周对修复创面进行大体形态学和组织学观察。结果:人FB可以在ADM上贴附、生长和增殖;与培养板上的人FB相比,ADM内FBⅠ型、Ⅲ型前胶原mRNA的表达降低。鼠ADM三维结构完整,排列整齐;移植后6周,皮肤表面光滑韧性好;表皮、真皮交界处乳头状结构出现,表皮细胞分化良好,约7～8层细胞,真皮内胶原纤维排列整齐。结论:ADM具有良好的调控细胞生长的生物学特性,修复皮肤创伤效果好。

成纤维细胞与脱细胞真皮基质复合培养的实验研究

目的本研究用酶消化法体外培养高纯度的人皮肤成纤维细胞(FB),将FB与高渗盐-氢氧化钠(NaCl-NaOH)消蚀法制作的人脱细胞真皮基质(ADM)复合培养并评价其生物相容性。方法中性蛋白酶-Ⅰ型胶原酶消化法体外培养人FB,通过组织学方法鉴定其纯度。携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(Ad-GFP)转染人FB,组织学方法观察荧光蛋白的表达情况,流式细胞仪检测转染比例。将FB和Ad-GFP转染的FB接种在NaCL-NaOH消蚀法制作的人ADM上,组织学方法观察细胞的生长和增殖情况;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测ADM内FB角质细胞生长因子(KGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA的蛋白表达。结果体外培养的人FB形态为细长梭形,有较长的突起和明显的核分裂相,波形蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白的表达均为阳性。Ad-GFP转染FB的比例为72%。复合培养显示人FB不仅黏附在ADM表面,还可以较为均匀地在ADM天然孔隙中生长和增殖;与正常FB比较,ADM内FB KGF、bFGF mRNA的蛋白表达无明显变化。结论中性蛋白酶-Ⅰ型胶原酶消化法体外可以培养出高纯度的人FB。Ad-GFP转染FB获得成功。NaCL-NaOH消蚀法制作的ADM蕴含丰富的生物信息,FB作为种子细胞与其生物相容性好,为进一步开展皮肤创伤修复的实验研究奠定了基础。