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高温中性蛋白酶基因的克隆、表达及验证研究 被引量:2
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作者 茆军 王玮 +2 位作者 张志东 谢玉清 罗淑萍 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2008年第5期956-959,共4页
对地衣芽孢杆菌XJT9503高温中性蛋白酶基因进行了克隆、测序及表达研究。以高温中性蛋白酶产生菌地衣芽孢杆菌XJT9503基因组DNA为模板,通过PCR扩增,获得特异性片段。经测序分析,其具有一个942 bp的蛋白酶完整阅读框。通过表达载体构建,... 对地衣芽孢杆菌XJT9503高温中性蛋白酶基因进行了克隆、测序及表达研究。以高温中性蛋白酶产生菌地衣芽孢杆菌XJT9503基因组DNA为模板,通过PCR扩增,获得特异性片段。经测序分析,其具有一个942 bp的蛋白酶完整阅读框。通过表达载体构建,获得质粒pPL-tnp,并转化至蛋白酶缺失受体菌枯草芽孢杆菌AB97013,经表达验证其蛋白酶最适作用温度和pH与出发菌相符。证明研究获得了高温中性蛋白酶基因及表达质粒pPL-tnp,并正确表达。 展开更多
关键词 高温中性蛋白酶 克隆 表达 地衣芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌
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高温中性蛋白酶基因的克隆及毕赤酵母表达研究 被引量:1
2
作者 王玮 张志东 +3 位作者 茆军 王涛 谢玉清 唐琦勇 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期635-638,共4页
对地衣芽孢杆菌XJT9503高温中性蛋白酶进行了克隆,并在毕赤酵母中进行了表达。以高温中性蛋白酶产生菌地衣芽孢杆菌XJT9503基因组DNA为模板,通过PCR扩增,获得高温中性蛋白酶(Tnp)基因的特异性片段,大小约为1 kb。通过EcoRI、NotI双酶切... 对地衣芽孢杆菌XJT9503高温中性蛋白酶进行了克隆,并在毕赤酵母中进行了表达。以高温中性蛋白酶产生菌地衣芽孢杆菌XJT9503基因组DNA为模板,通过PCR扩增,获得高温中性蛋白酶(Tnp)基因的特异性片段,大小约为1 kb。通过EcoRI、NotI双酶切后,将该基因连入毕赤表达载体pPIC9K,并整合到毕赤酵母SMD1168基因组中,构建的基因工程菌,进行甲醇诱导表达。结果表明,基因工程菌发酵72 h,有最大酶活,为19 U/mL;酶的最适作用温度为65℃,与原始酶的最适作用温度相符。证明研究成功克隆了高温中性蛋白酶基因,并在毕赤酵母中正确表达。 展开更多
关键词 高温中性蛋白酶 毕赤酵母 克隆 表达
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XJT-9503高温中性蛋白酶基因Gp1的克隆、表达及序列分析 被引量:2
3
作者 冯蕾 杨新平 +1 位作者 古丽努尔 陈竞 《皮革科学与工程》 CAS 2005年第4期26-30,共5页
试验根据地衣芽孢杆菌XJT9503的高温中性蛋白酶酶蛋白所测定的N-端及部分肽段氨基酸序列及质谱分析结果设计了PCR引物,用PCR方法从地衣芽孢杆菌XJT9503中扩增了高温中性蛋白酶基因Gp1,对所获得的基因进行序列分析测定,并与蛋白酶的氨基... 试验根据地衣芽孢杆菌XJT9503的高温中性蛋白酶酶蛋白所测定的N-端及部分肽段氨基酸序列及质谱分析结果设计了PCR引物,用PCR方法从地衣芽孢杆菌XJT9503中扩增了高温中性蛋白酶基因Gp1,对所获得的基因进行序列分析测定,并与蛋白酶的氨基酸序列分析对比。GP1基因全序列共1129bp,包括整个阅读框,共编码376个氨基酸。将扩增的DNA片段插入到大肠杆菌载体pET-28a中,构建成重组分泌型表达载体pGp1。并在大肠杆菌宿主BL21中得到表达。SDS-PAGE分析显示产物的分子量为27.0×103,同核酸序列测定所推导的值相符。同时,对地衣芽孢杆菌XJT9503中性蛋白酶基因序列进行了测定和比较分析,发现与地衣芽孢杆菌6816丝氨酸蛋白酶和地衣芽孢杆菌1411T角蛋白水解酶基因的同源性为97%。 展开更多
关键词 地衣芽孢杆菌 高温中性蛋白酶 基因的克隆和表达 序列分析 大肠杆菌
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含XJT-9503高温中性蛋白酶基因Gp1重组菌B-pGp1表达条件的研究 被引量:1
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作者 冯蕾 古丽努尔 杨新平 《皮革科学与工程》 CAS 2005年第5期27-30,35,共5页
用PCR方法从地衣芽孢杆菌XJT9503中扩增得到了高温中性蛋白酶基因Gp1,将扩增的DNA片段与表达载体pET-28a连接构建成重组分泌型表达载体pGp1。转化大肠杆菌BL21,得到重组大肠杆菌B-pGp1。酶活测定结果表明,表达产物具有正常的生物学活性... 用PCR方法从地衣芽孢杆菌XJT9503中扩增得到了高温中性蛋白酶基因Gp1,将扩增的DNA片段与表达载体pET-28a连接构建成重组分泌型表达载体pGp1。转化大肠杆菌BL21,得到重组大肠杆菌B-pGp1。酶活测定结果表明,表达产物具有正常的生物学活性。SDS-PAGE电泳结果显示具有明显的特异性表达条带,单体融合表达产物的分子量为27.0×103,同核酸序列测定所推导的值相符。实验证明,重组质粒在宿主BL21中有很好的稳定性,在有选择压力条件下传代60次基本稳定,传代80次重组质粒保留68%以上。摇瓶实验确定了重组菌的最佳表达条件为IPTG 0.75 mmol/L,培养起始pH=6,培养温度为37℃。重组菌所得酶活为2184μ/mL,是受体菌株酶活的11倍。 展开更多
关键词 地衣芽孢杆菌 高温中性蛋白酶 克隆 表达 大肠杆菌
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耐热芽孢杆菌XJT9503高温中性蛋白酶的中试发酵工艺 被引量:7
5
作者 活泼 茆军 石玉瑚 《无锡轻工大学学报(食品与生物技术)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期89-92,共4页
对耐热芽孢杆菌(Thermophilicbacillus)XJT9503保藏、菌种活化、种子培养基和发酵培养基及7,25,250,3000L发酵罐的中试发酵工艺参数进行了研究,确定了耐热芽孢杆菌XJT9503高温中性蛋白酶的中试发酵工艺.在3000L发酵罐上控制罐温为46℃... 对耐热芽孢杆菌(Thermophilicbacillus)XJT9503保藏、菌种活化、种子培养基和发酵培养基及7,25,250,3000L发酵罐的中试发酵工艺参数进行了研究,确定了耐热芽孢杆菌XJT9503高温中性蛋白酶的中试发酵工艺.在3000L发酵罐上控制罐温为46℃、转速180r/min、通气量4L/(L·min),培养18h后发酵酶活最高达13240U/mL. 展开更多
关键词 耐热芽孢杆菌XJT9503 中试 发酵工艺 高温中性蛋白酶 保藏 菌种活化 种子培养基
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嗜热芽孢杆菌XJT9503高温中性蛋白酶的研究──Ⅰ.XJT9503菌的特性 被引量:4
6
作者 活泼 潘惠霞 +2 位作者 冯蕾 王志方 石玉瑚 《生物技术》 CAS CSCD 1996年第3期24-27,共4页
从新疆吐鲁番盆地土壤里分离到一株嗜热芽孢杆菌,代号XJT9503.能产生胞外高温中性蛋白酶,该菌在旋转式摇床上110r/min,45℃下培养60小时,发酵液产酶为5600单位/ml,但在45℃静止培养产酶可达7400... 从新疆吐鲁番盆地土壤里分离到一株嗜热芽孢杆菌,代号XJT9503.能产生胞外高温中性蛋白酶,该菌在旋转式摇床上110r/min,45℃下培养60小时,发酵液产酶为5600单位/ml,但在45℃静止培养产酶可达7400单位/ml,Ca2+、Mg2+对产酶有明显促进作用,Cu2+等抑制产酶。 展开更多
关键词 芽孢杆菌 高温中性蛋白酶 蛋白酶 发酵微生物
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耐热芽孢杆菌高温中性蛋白酶制备工艺研究 被引量:3
7
作者 活泼 茆军 石玉瑚 《生物技术》 CAS CSCD 2003年第4期26-27,共2页
为使耐热芽孢杆菌 (ThermophilicBacillus)XJT95 0 3高温中性蛋白酶产业化并在生产中应用 ,对XJT95 0 3高温中性蛋白酶的制备工艺进行了研究。结果表明 ,可采用加热真空薄膜浓缩 ,在 4 0℃ ,- 0 .0 94~ - 0 .0 96MPa真空度下 ,经过 4 5... 为使耐热芽孢杆菌 (ThermophilicBacillus)XJT95 0 3高温中性蛋白酶产业化并在生产中应用 ,对XJT95 0 3高温中性蛋白酶的制备工艺进行了研究。结果表明 ,可采用加热真空薄膜浓缩 ,在 4 0℃ ,- 0 .0 94~ - 0 .0 96MPa真空度下 ,经过 4 5~ 5 5min浓缩 ,可使发酵处理液浓缩 2~ 3倍 ,其酶活力仅损失 10 %左右。确定了采用喷雾干燥法生产固体酶制剂的最优工艺条件 :进口温度170℃、出口温度 75℃、流量 30kg·h- 1 。在此条件下 ,酶得率为 6 8%。对固体酶与液体酶保存期稳定性的测定结果表明 ,固体酶的保存效果远比液体酶好 ,当保存 2 10d时 ,固体酶制剂的酶活损失仅为 2~ 8%。 展开更多
关键词 耐热芽孢杆菌 高温中性蛋白酶 制备工艺 喷雾干燥
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高温中性蛋白酶及其产生菌的初步研究 被引量:24
8
作者 活泼 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期30-34,共5页
对高温中性蛋白酶产生菌耐热芽孢杆菌(Thermophilic Bacillus)XJT9503的产酶条件及酶的提取进行了初步研究。耐热芽孢杆菌XJT9503产酶的摇瓶培养基最适碳源为葡萄糖,最适氮源为豆饼粉,100r/min,46℃培养60h酶活最高。实验结果表明高温... 对高温中性蛋白酶产生菌耐热芽孢杆菌(Thermophilic Bacillus)XJT9503的产酶条件及酶的提取进行了初步研究。耐热芽孢杆菌XJT9503产酶的摇瓶培养基最适碳源为葡萄糖,最适氮源为豆饼粉,100r/min,46℃培养60h酶活最高。实验结果表明高温中性蛋白酶提取可采用硫酸铵分级沉淀法。 展开更多
关键词 高温中性蛋白酶 产生菌 耐热芽孢杆菌 产酶条件 酶活力
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水产用耐高温中性蛋白酶菌种诱变及提高发酵水平的研究
9
作者 李伟 陈权军 邓岳松 《内陆水产》 2008年第10期63-65,共3页
水产饲料生产要经过调质,调质温度一般超过90%,普通蛋白酶在这个温度容易失去活性,广州市博仕奥生化技术研究有限公司用诱导的方法,培养出能分泌耐受饲料制粒高温蛋白酶的菌种(AS1.398)。为提高菌种的产生蛋白酶能力,对生产菌... 水产饲料生产要经过调质,调质温度一般超过90%,普通蛋白酶在这个温度容易失去活性,广州市博仕奥生化技术研究有限公司用诱导的方法,培养出能分泌耐受饲料制粒高温蛋白酶的菌种(AS1.398)。为提高菌种的产生蛋白酶能力,对生产菌AS1.398进行紫外线照射和亚硝基胍(NTG)诱变处理,并对发酵培养基进行优化,提高了菌株的发酵活力,其产酶活力达到9578u/mL,比原菌株提高了37.2%。 展开更多
关键词 高温中性蛋白酶 菌种诱变 发酵水平 水产 发酵培养基 调质温度 高温蛋白酶 紫外线照射
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嗜热脂肪芽孢杆菌高温中性蛋白酶在枯草芽孢杆菌中的表达、纯化及其酶学性质的研究 被引量:5
10
作者 张敏 赵丛 +2 位作者 杜连祥 路福平 高晨 《中国科学(C辑)》 CSCD 北大核心 2008年第2期166-172,共7页
本文中嗜热脂肪芽孢杆菌(B.stearothermophilus)的高温中性蛋白酶基因在sacB基因启动子的调控下,以蛋白酶自身或sacB基因的序列为信号肽,分别实现了在枯草芽孢杆菌DB104中的高效表达.表达产物经纯化后,酶的比活力可达16530U/mg,纯化倍... 本文中嗜热脂肪芽孢杆菌(B.stearothermophilus)的高温中性蛋白酶基因在sacB基因启动子的调控下,以蛋白酶自身或sacB基因的序列为信号肽,分别实现了在枯草芽孢杆菌DB104中的高效表达.表达产物经纯化后,酶的比活力可达16530U/mg,纯化倍数达到3.8倍,分子量约为35kD.对酶学性质的研究结果表明,此酶的最适反应温度为65℃,最适作用pH为7.5,在65℃下反应1h后,仍可保留约80%的活力. 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis) 高温中性蛋白酶 表达 纯化 酶学性质
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反胶团萃取嗜热芽孢杆菌HS08发酵液中胞外蛋白酶研究 被引量:1
11
作者 黄光荣 活泼 +1 位作者 戴德慧 蒋家新 《中国计量学院学报》 2007年第2期95-98,共4页
讨论了影响AOT/异辛烷反胶团体系萃取嗜热芽孢杆菌HS08发酵液中耐高温中性蛋白酶的因素.实验结果表明,AOT/异辛烷反胶团在很短的时间内能达到萃取平衡,100 mmol.L-1NaCl的离子强度有助于蛋白酶的反胶团萃取.在50 mmol.L-1AOT、pH4.5、10... 讨论了影响AOT/异辛烷反胶团体系萃取嗜热芽孢杆菌HS08发酵液中耐高温中性蛋白酶的因素.实验结果表明,AOT/异辛烷反胶团在很短的时间内能达到萃取平衡,100 mmol.L-1NaCl的离子强度有助于蛋白酶的反胶团萃取.在50 mmol.L-1AOT、pH4.5、100 mmol.L-1NaCl、油水相体积比为1的条件下萃取5 min能达到80%以上的酶活力回收率. 展开更多
关键词 反胶团 高温中性蛋白酶 液液萃取
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发酵过程中温度自动控制的设计
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作者 张慧涛 侯新强 +1 位作者 常玮 李晨华 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2002年第3期168-170,共3页
对高温中性蛋白酶发酵中试研究中温度控制进行了改进设计 ,采用PID调节器的自动调节 ,由调压器调节加热器的功率 。
关键词 高温中性蛋白酶 发酵过程 温度自动控制 设计 恒温控制
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新疆农业高新技术推广研发及金融支持情况调研报告
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作者 人民银行乌鲁木齐中心支行课题组 《新疆金融》 2001年第9期43-49,共7页
关键词 农业高新科技企业 新疆农业 金融支持 技术推广 情况调研 商业银行 高温中性蛋白酶 天然彩色棉 彩棉 L-蛋氨酸
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科技专题
14
《纺织信息周刊》 2001年第32期15-17,共3页
人们日常所接触到的,对人类的生存和繁衍构成重大影响的射线大致可分为两类:粒子射线和电磁波射线。粒子射线包括中子射线、质子射线、正电子射线和电子射线(阴极射线B射线)等。电磁波射线根据其波长(或频率)的不同,可分为X射线、Y射线... 人们日常所接触到的,对人类的生存和繁衍构成重大影响的射线大致可分为两类:粒子射线和电磁波射线。粒子射线包括中子射线、质子射线、正电子射线和电子射线(阴极射线B射线)等。电磁波射线根据其波长(或频率)的不同,可分为X射线、Y射线、紫外线和电磁辐射等。在这些射线中对人体危害较大而又较难防护的射线有中子射线、X射线、Y射线和电磁波四种。近年来,随着大气臭氧层的破坏。 展开更多
关键词 面料市场 高温中性蛋白酶 X射线 中子辐射 整理技术 非织造布 防辐射纤维 抗静电剂 防护纤维 日均成交量
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