简易-高盐沉淀法提取云南松针叶DNA的条件优化

[目的]优化简易-高盐沉淀法提取云南松针叶DNA的条件。[方法]采用正交试验设计,对简易-高盐沉淀法提取云南松针叶基因组DNA的提取条件进行优化,然后用浓度1%琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量,并用微量紫外分光光度计检测DNA溶液的纯度和浓度,以定性和定量检测为指标,得出简易-高盐沉淀法提取云南松针叶基因组DNA的最佳处理组合。[结果]最佳处理组合为:水浴温度为70℃,V氯仿∶V异戊醇=25∶1,离心时间为8 min,NaCl浓度为2.2 mol/L。[结论]该结果可为开展云南松分子生物学的研究奠定基础。

高质量竹黄菌全基因组DNA的提取方法比较

真菌的细胞壁,增加了提取基因组DNA的难度,为找到满足竹黄菌全基因组序列分析的高质量DNA的提取方法,分别使用改良CTAB法、蛋白酶K法和高盐沉淀法提取竹黄菌菌丝体的基因组DNA,并进行琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计测定浓度和纯度、ITS序列的PCR扩增和酶切检测。结果表明:3种方法提取等量竹黄菌菌丝体的基因组DNA,蛋白酶K法和高盐沉淀法均能得到较为完整的且大于15kb的DNA,改良CTAB法DNA发生降解;通过PCR和酶切检测,3种方法所得基因组DNA均能有效地进行相应的酶反应。综合考虑基因组DNA的浓度、纯度、完整性和有无降解等,蛋白酶K法提取得到的基因组DNA(浓度为233.495ng/μL,OD_(260)/OD_(280)为1.806)最适用于全基因组的序列分析。

4种油松针叶DNA提取方法的比较

采用SDS法、简易提取法、高盐沉淀法和改良的CTAB法从油松(Pinus tabulaeformis)针叶提取基因组DNA,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法和PCR检测提取的DNA质量。结果表明,改良的CTAB法提取的油松针叶基因组DNA浓度和纯度高,适合用于ISSR-PCR分析,优于其他3种提取方法。

从皂苷糖基水解酶产生菌sp.48g提取基因组DNA

采用试剂盒法、饱和酚抽提法、高盐沉淀法和氯化苄法从皂苷糖基水解酶产生菌sp.48g提取基因组DNA。经比色法和琼脂糖凝胶电泳分析检测。结果用氯化苄法提取的基因组DNA在质量上和得率上优于其他方法。A260/A280为1.7,DNA产量为0.11mg/g湿菌体。达到下部实验要求。

钉螺线粒体基因组DNA提取方法的优化及比较

目的优化提取钉螺线粒体基因组DNA(mt DNA)的方法。方法应用高温裂解、蛋白酶K变温消化和醋酸钾纯化对传统的高盐沉淀法进行优化,并将优化的高盐沉淀法与蔗糖密度梯度离心法、传统的高盐沉淀法进行比较。用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和线粒体COX1基因PCR扩增产物鉴定提取的mt DNA,并用核ITS基因PCR扩增产物检测有无核DNA污染。结果优化的高盐沉淀法获得的mt DNA浓度和产量较高,差异有统计学意义(F=3 032.65、10185.00,P均<0.01)。用凝胶电泳检测后未发现核DNA与蛋白质污染,质量可满足于PCR、测序等分子生物学研究。结论优化的高盐沉淀法简易高效,成本低,获得的mt DNA能满足相关分析要求。