高盐沉淀CTAB法提取温室菊花基因组DNA

根据温室菊花植物组织富含多酚、多糖的具体特性,对CTAB法加以改进:在待沉淀液中加入1/2体积5 mol.L-1NaCl。改进后的方法获得的DNA质量良好,电泳条带清晰,提取过程无明显的DNA降解,基本上排除了多酚物质的干扰。以提取的DNA为模板,用一对引物扩增菊花中18S基因,得到条带单一,大小与已知一致,说明获得的DNA可以进行PCR扩增,EcoRI酶切基因组DNA图谱表明,提取的DNA能被限制性内切酶完全酶切,可以满足相关的分子生物学研究。

氯化钠胁迫下的蒙古黄芪基因组MSAP分析

利用甲基化敏感扩增多态性(Methylation-sensitive amplified polymorphism,MSAP)技术研究高盐胁迫过程中蒙古黄芪(Astragalus membranaceus)基因组DNA甲基化变化。结果表明,扩增22对引物共检测出不同盐浓度间甲基化位点179个。总体趋势是高盐引起蒙古黄芪基因CCGG序列发生DNA去甲基化现象。

棉花根际促生菌基因组DNA的提取及其鉴定

植物根际微生物基因组的提取往往因为细胞壁不能完全裂解以及内含物的成分和含量受到影响,获得完整的基因组DNA一直是土壤微生物分子生物学研究的关键。本文以新疆盐碱地棉花根际促生菌为材料,比较了SDS法、CTAB法以及高盐结合的CTAB法提取棉花根际促生菌基因组DNA的效率,结果显示,SDS法和CTAB法在细胞裂解后,由于过多的多糖类物质混于上清液中使其过于粘稠而无法分层,没能得到DNA样品。高盐结合的CTAB法则有效弥补了上述方法的不足,能够获得A260/A280为1.82、A260/A230为2.43的高质量基因组DNA。同时实验还以细菌16SrDNA为内标进行PCR扩增,结果证明所获得的棉花根际促生菌基因组DNA可直接用于PCR等分子生物学进一步研究。