丙泊酚对高糖诱导的人肾小球系膜细胞氧化应激和炎症反应的影响

目的探讨丙泊酚对高糖诱导的人肾小球系膜细胞损伤的影响。方法该研究于2021年3月至2022年3月进行。体外培养人肾小球系膜细胞,采用30 mol/L葡萄糖诱导建立人肾小球系膜细胞细胞损伤模型,用丙泊酚浓度10、20、40μmol/L处理细胞,细胞分为对照组、高糖组、高糖+低、中、高剂量丙泊酚组。酶联免疫吸附测定(ELISA)检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛、活性氧、白细胞介素(IL)-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)IL-1β表达;蛋白质印迹法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、IL-10、TNF-α、IL-1β蛋白表达。结果高糖组的丙二醛[(16.7±1.7)mmol/L比(3.8±0.4)mmol/L]、活性氧[(9.6±0.9)μg/L比(3.5±0.3)μg/L]、IL-10[(65.3±6.9)ng/L比(26.9±3.2)ng/L]、TNF-α[(105.6±10.9)ng/L比(42.8±4.8)ng/L]和IL-1β[(79.7±8.2)ng/L比(31.2±3.6)ng/L]明显高于对照组;iNOS、ICAM-1、MCP-1、IL-10、TNF-α、IL-1β蛋白表达明显高于对照组;SOD、GSH-Px明显低于对照组,均P<0.05。高糖+低剂量丙泊酚组、高糖+中剂量丙泊酚组、高糖+高剂量丙泊酚组的丙二醛、活性氧、IL-10、TNF-α和IL-1β明显低于高糖组;iNOS、ICAM-1、MCP-1、IL-10、TNF-α、IL-1β蛋白表达明显低于高糖组,均P<0.05;SOD、GSH-Px明显高于高糖组,均P<0.05。结论丙泊酚能减轻高糖诱导的人肾小球系膜细胞氧化应激和炎症反应,发挥保护肾脏的作用。

甘草酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞炎性因子及纤维化因子的影响

目的探讨甘草酸(GA)对高糖诱导的肾小球系膜细胞(SV40 MES13)炎性因子及纤维化因子的影响。方法将培养的小鼠肾小球系膜细胞(SV40 MES13)分为对照(NG)组(5.6 mmol/L葡萄糖)、高糖(HG)组(30 mmol/L葡萄糖)及HG+GA组(30 mmol/L葡萄糖+200μmol/L GA)。采用Western blotting检测各组细胞炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-8及纤维化因子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平,免疫荧光检测各组IL-1β、TNF-α、α-SMA在细胞内的荧光表达强度,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组细胞培养上清中IL-1β、TNF-α、IL-6及IL-8的表达水平。结果Western blotting检测结果显示,与NG组比较,HG组IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8及α-SMA蛋白的表达水平明显升高(P<0.01);与HG组比较,HG+GA组IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8和α-SMA蛋白表达量降低(P<0.05)。细胞免疫荧光结果显示,与NG组比较,HG组细胞内IL-1β、TNF-α和α-SMA因子的荧光强度明显增强(P<0.05);与HG组相比,HG+GA组细胞内IL-1β、TNF-α和α-SMA因子荧光强度明显降低(P<0.05)。ELISA检测结果显示,与NG组比较,HG组细胞培养上清中IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-8蛋白表达水平升高(P<0.01);与HG组比较,HG+GA组IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8表达水平明显降低(P<0.05)。结论甘草酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞的炎性因子及纤维化因子的表达均具有不同程度的抑制作用,可能在糖尿病肾病的预防方面发挥重要作用。

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨高糖环境下肾系膜细胞衰老的作用机制

糖尿病肾病(DN)作为一种糖尿病患者最常见且严重的糖尿病微血管并发症,发病机制是复杂且多因素的,涉及许多途径和介质,其主要特点是特定的肾脏形态和功能改变。研究DN机制是预防DN最重要的目标。肾脏衰老是DN的重要病因之一。影响肾脏衰老的因素有很多,其中Wnt/β-catenin信号通路激活失调与损伤与DN的发生和发展有关,对调控高糖环境下系膜细胞衰老具有重要意义。近年来,通过中医药调控糖尿病肾病研究已经取得一定进展和一定优势,但对于延缓肾系膜细胞衰老的具体细胞生物学作用机制尚不明确。该文进一步从分子机制的角度综述细胞外信号通路、Wnt/β-catenin与高糖的关系、Wnt/β-catenin与肾系膜细胞衰老的关系,初步总结中医药在延缓系膜细胞衰老进程的作用机制,希望对DN的中医药临床疗效研究有一定帮助。

草石蚕多糖的制备及其对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞的影响

为研究草石蚕多糖对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)的影响。草石蚕水提液经脱蛋白、AB-8大孔树脂柱层析分离,得草石蚕粗多糖并进行分级醇沉分离得到30%醇沉组分(SSMP-30%)、60%醇沉组分(SSMP-60%)和90%醇沉组分(SSMP-90%),其中SSMP-90%的含量最高。以高糖诱导HBZY-1为细胞模型对醇沉组分进行体外活性测试。结果表明,不同醇沉组分对模型细胞均无毒性,与高糖对照组比较,SSMP-30%和SSMP-90%组分对高糖诱导HBZY-1的增殖具有显著抑制作用(P<0.01),且呈浓度依赖性,其中SSMP-90%的活性最强。提示其对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞具有保护作用。

衣霉素对高糖刺激肾系膜细胞增殖的影响及其机制研究

目的观察N-糖链抑制剂衣霉素(TM)对肾小球系膜细胞(GMC)β1整合素以及其下游重要信号分子粘着斑激酶(FAK)和细胞周期正调控蛋白cyclinD1表达的影响。了解衣霉素在抑制高糖刺激GMC增殖中的重要作用。方法体外培养的大鼠系膜细胞株分为:正常对照组,高糖组,甘露醇组,高糖加不同浓度衣霉素(TM)组。用流式细胞技术检测β1整合素的表达;免疫组化方法测定FAK和细胞周期素D1(cyclinD1)的表达,四唑盐比色(MTT)法测定细胞增殖。结果正常系膜细胞中β1整合素、FAK和cyclinD1均有一定表达,高糖作用24h可以使3者表达明显升高,细胞增殖能力增强,且与渗透压无关。衣霉素(TM)可呈浓度依赖性的抑制高糖的这种作用。结论N-糖链抑制剂TM通过阻断细胞表面糖蛋白的糖基化过程,形成脱糖蛋白,从而抑制β1整合素的表达,并进一步影响细胞FAK和cyclinD1表达,使高糖诱导的细胞增殖受抑制。

细胞因子信号负调控因子3基因转染对高糖刺激下肾小球系膜细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨细胞因子信号负调控因子(SOCS)3基因对高糖培养下人肾小球系膜细胞(HMCs)增殖、凋亡的影响。方法以脂质体为载体将PCR3.1 SOCS3转染至体外培养的HMCs,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学法鉴定转染前后细胞中SOCS3 mRNA和蛋白表达;高糖培养HMCs 12、24、48 h,采用蛋白印迹法分别检测正常对照组(CG)、高糖组(HG)、高糖+空质粒转染(HG+PV)组、高糖+SOCS3基因转染(HG+PS)组蛋白酪氨酸磷酸激酶(JAK)2、信号转导及转录活化因子(STAT)1蛋白酪氨酸磷酸化水平变化;免疫细胞化学法、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)法检测转染前后细胞增殖指数(PI)和凋亡指数(AI)。结果经鉴定,转染后HMCs中有SOCS3 mRNA和蛋白稳定表达;与CG组和HG+PV组相比,HG+PS组细胞中JAK2、STAT1蛋白酪氨酸磷酸化水平显著下降(P<0.05),PI显著减少(P<0.01),AI无明显差异。结论 SOCS3蛋白可能通过降低JAK2、STAT1酪氨酸磷酸化水平抑制HMCs增殖。

西红花酸调控Nrf2/HO-1通路抑制高糖诱导人肾小球系膜细胞铁死亡

目的 探讨西红花酸抑制高糖诱导人肾小球系膜细胞(HGMCs)铁死亡的作用机制。方法 (1)体外培养HGMCs,将细胞分为空白对照组、阴性对照组(60 mmol·L^(-1)甘露醇)和葡萄糖实验组(30、60、90 mmol·L^(-1)),干预培养48 h后,采用CCK-8法检测细胞存活率,采用RT-qPCR法检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)mRNA表达,以确定高糖诱导HGMCs的造模条件。(2)体外培养HGMCs,分为空白对照组和西红花酸给药组(5、25、125μmol·L^(-1)),干预培养24 h后,采用CCK-8法检测细胞存活率。(3)体外培养HGMCs,将细胞分为空白对照组、模型组(60 mmol·L^(-1)葡萄糖)、西红花酸组(60 mmol·L^(-1)葡萄糖+5、25、125μmol·L^(-1)西红花酸)及阳性对照组[60 mmol·L^(-1)葡萄糖+1μmol·L^(-1)铁死亡抑制剂(Ferrostatin-1,Fer-1)]。干预培养48 h后,采用CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平;Western Blot法检测细胞GPX4、血红素加氧酶-1(HO-1)、转铁蛋白受体(TFRC)蛋白表达;采用免疫荧光法与Western Blot法检测HGMCs细胞核中核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达。结果 (1)与空白对照组比较,阴性对照组的细胞存活率及GPX4mRNA表达水平无明显差异(P>0.05);30、60、90 mmol·L^(-1)葡萄糖实验组的细胞存活率及GPX4 mRNA表达水平均显著降低(P<0.01),且以60 mmol·L^(-1)浓度组作用最为明显。(2)与空白对照组比较,5μmol·L^(-1)西红花酸组的HGMCs细胞存活率无明显影响(P>0.05),25、125μmol·L^(-1)西红花酸组的HGMCs细胞存活率显著升高(P<0.01),该浓度西红花酸对HGMCs无明显细胞毒性。(3)与空白对照组比较,模型组的HGMCs细胞存活率显著降低(P<0.01);细胞内ROS水平显著上升(P<0.01);GPX4蛋白表达水平明显下降(P<0.05);细胞核内Nrf2蛋白表达显著下调(P<0.001)。与模型组比较,25、125μmol·L^(-1)西红花酸组的HGMCs细胞存活率明显升高(P<0.05);细胞内ROS水平均显著下降(P<0.01),并呈浓度依赖性;西红花酸125μmol·L^(-1)组HGMCs细胞GPX4、HO-1蛋白表达水平明显上调(P<0.05,P<0.01),与阳性对照药物Fer-1效果相近(P>0.05);西红花酸125μmol·L^(-1)组HGMCs细胞核内Nrf2蛋白表达显著上调(P<0.001)。各组间的HGMCs细胞TFRC蛋白表达无明显差异(P>0.05)。结论 西红花酸能够抑制高糖诱导HGMCs细胞铁死亡,减少细胞内ROS生成,上调GPX4蛋白表达,可能与上调Nrf2/HO-1通路密切相关。

鼠尾草酸调节PINK1/Parkin信号通路对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞的影响

目的探究鼠尾草酸调节磷酸酶基因(PTEN)诱导假定激酶(PINK)1/E3泛素连接酶(Parkin)信号通路对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)的影响。方法将HBZY-1细胞分为对照组(含糖量5.8 mmol/L),高糖组(含糖量26 mmol/L),低剂量鼠尾草酸组(含50 mg/kg鼠尾草酸),高剂量鼠尾草酸组(含100 mg/kg鼠尾草酸)。采用透射电镜、流式细胞仪观察高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞自噬、凋亡变化状况,Western印迹检测PINK1/Parkin信号通路蛋白的表达量。结果与对照组相比,高糖组、低剂量鼠尾草酸组、高剂量鼠尾草酸组HBZY-1细胞自噬率、PINK1、Parkin、超氧化物歧化酶(SOD)表达显著降低,细胞凋亡率、白细胞介素(IL)-1β、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平显著升高(P<0.05);与高糖组对比,低剂量鼠尾草酸组、高剂量鼠尾草酸组HBZY-1细胞自噬率、PINK1、Parkin、SOD水平显著升高,细胞凋亡率、MDA、TNF-α、IL-1β表达显著下降(P<0.05);与低剂量鼠尾草酸组相比,高剂量鼠尾草酸组的HBZY-1细胞自噬率、PINK1、Parkin、SOD表达上升,细胞凋亡率、TNF-α、MDA、IL-1β表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论鼠尾草酸可加强高糖诱导的肾小球系膜细胞自噬率,抑制HBZY-1的凋亡,可能与其调节PINK1/Parkin信号通路有一定的关联性。

地龙成分对高糖刺激下人肾小球系膜细胞转化生长因子β_1和结缔组织生长因子表达的研究

目的:研究地龙成分含药血清对高糖刺激下人肾小球系膜细胞(HMC)增殖、分泌转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)的影响,并探讨其对糖尿病肾脏疾病的可能防治机制。方法:以HMC为研究对象,将培养的HMC分为空白对照组、高糖刺激组、地龙成分低、中、高剂量组和福辛普利组,用家兔的含药血清给药,分别给予相应处理24h、48 h和72 h后,采用4-甲偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,48 h的上清液采用ELISA法检测TGF-β1和CTGF的表达。结果:在同一时间点内,地龙低、中、高剂量组对HMC增殖的抑制作用不断增加,福辛普利组对HMC增殖的抑制作用和地龙中剂量组相当,在24 h、48 h和72 h内,各药物干预组对HMC增殖的抑制作用也不断增大,以地龙高剂量组最佳;与空白对照组比较,高糖刺激组上清液中TGF-β1和CTGF的含量明显增多;与高糖刺激组比较,地龙成分低、中、高剂量组随着药物浓度的增加,TGF-β1和CTGF的含量减少,福辛普利组上清液中TGF-β1和CTGF的含量与地龙成分中剂量组相当,但高于高剂量组,都具有统计学意义。结论:地龙成分对HMC增殖的抑制作用在一定范围内呈浓度、时间依赖关系,能够降低TGF-β1和CTGF的含量,以高剂量组最佳,优于福辛普利组,提示地龙成分可能通过抑制HMC的异常增殖和下调TGF-β1和CTGF的表达而发挥对糖尿病肾病的保护作用。

中药对高糖作用下牛肾小球系膜细胞增殖的影响

目的 研究分别具有益气、养阴、清热、活血功效的中药对高糖作用下牛肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响。方法 采用MTT比色法,观察黄芪、白芍、山楂、知母、当归对体外高糖培养的牛肾小球系膜细胞增殖的影响。结果 黄芪、白芍、山楂、知母对系膜细胞增殖有抑制作用,而当归无抑制作用。结论 养阴益气、清热活血中药是治疗糖尿病肾病的有效药物。

肌肽对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖的影响及机制

目的探讨肌肽(carnosine)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(rat mesangial cells,RMCs)增殖的影响及作用机制。方法以RMCs为研究对象,分别采用MTT法和BrdU-ELISA法观察肌肽对高糖诱导的RMCs增殖的影响;乳酸脱氢酶(LDH)法检测肌肽对细胞的毒性作用;酶生化法测定丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)含量及细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性等。结果肌肽可显著抑制高糖诱导的RMCs增殖,在5～30 mmol/L范围内呈一定的浓度依赖效应,且与其抗氧化作用密切相关。结论肌肽通过抗氧化作用抑制高糖诱导的RMCs增殖,且有浓度依赖趋势。

罗格列酮对高糖刺激的大鼠肾小球系膜细胞B_1整合素、ICAM-1表达的影响

目的观察过氧化脂质体增殖激活受体γ(PPARγ)激动剂噻唑烷二酮类化合物(罗格列酮,RGZ)对高糖刺激大鼠肾小球系膜细胞细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和β1整合素表达的影响,了解PPARγ与粘附分子的关系。方法体外培养大鼠HBZY-1肾小球系膜细胞,分为9组:正常糖组,高糖组,甘露醇组,正常糖及高糖加1、5、10μm o l/L罗格列酮组。干预作用24 h后采用细胞免疫组化染色检测ICAM-1表达,间接免疫荧光染色及流式细胞仪检测β1整合素表达。结果高糖刺激使系膜细胞ICAM-1、β1整合素表达增加,且不依赖于渗透压。罗格列酮能够抑制正常糖和高糖诱导的系膜细胞ICAM-1、β1整合素表达;高糖组罗格列酮抑制作用更强,且呈剂量依赖性。β1整合素与ICAM-1呈正相关。结论粘附分子参与了糖尿病肾病(DN)发病机制,PPARγ激动剂罗格列酮可能通过对高糖刺激粘附分子表达的抑制效应而影响DN系膜扩张和肾小球硬化过程。

泛素蛋白酶体途径对高糖刺激的肾系膜细胞Smad7表达的影响

目的:观察不同浓度高糖刺激后大鼠肾系膜细胞胞内Smad泛素化调节因子-Smurf2和Smad7的表达,并以蛋白酶体特异性抑制剂MG132作为阻断剂,探讨泛素化降解在Smad信号中的作用。方法:将体外培养的大鼠肾小球系膜细胞分别设正常对照组(葡萄糖浓度5.6mmol/L)、20mmol/L高糖组、30mmol/L高糖组、30mmol/L高糖加蛋白酶体抑制剂MG132组等。用细胞免疫荧光染色法及激光共聚焦显微镜检测各组细胞泛素连接酶Smurf2及Smad7的表达。结果:(1)正常组细胞Smurf2蛋白表达较弱(25.93±3.35),Smad7蛋白表达较强(64.09±7.43)。(2)高糖组Smurf2表达较正常组增强(P<0.05),呈浓度依赖性,荧光灰度值分别为20mmol/L高糖组(56.99±7.00)、30mmol/L高糖组(96.36±9.19);Smad7表达减弱(P<0.05),呈浓度依赖性,分别为20mmol/L高糖组(45.33±6.67)、30mmol/L高糖组(30.20±4.41)。(3)30mmol/L高糖组加入MG132后,Smurf2表达减弱、Smad7表达增强。结论:(1)高糖可诱导肾系膜细胞Smurf2表达增强,Smad7表达减弱。(2)MG132可阻止高糖所导致的上述变化。提示泛素-蛋白酶体途径参与了糖尿病肾病Smad通路的信号调节。

生脉注射液对高糖和糖化终末产物诱导的肾小球系膜细胞增殖的影响

目的观察生脉注射液对高糖和糖化终末产物(AGEs)诱导的肾小球系膜细胞增殖的影响。方法用高糖和AGEs作为刺激因子,诱导体外培养的牛肾小球系膜细胞增殖,并用MTT比色法测定生脉注射液对系膜细胞增殖的影响。结果生脉注射液能拮抗高糖和AGEs诱导的肾小球系膜细胞的增殖(P<0.01)。结论生脉注射液治疗糖尿病肾病的主要靶细胞之一是肾小球系膜细胞,其对肾小球系膜细胞增殖的抑制可能是其治疗作用的重要机制。

miR-148b基因对高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖、凋亡及免疫抑制因子的影响研究

目的:探讨miR-148b基因对高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖、凋亡及免疫抑制因子TGF-β1表达的影响。方法:小鼠肾小球系膜细胞(MMCs)分三组处理,即低糖+miR-148b scramble组(LG组)、高糖+miR-148b scramble组(HG组)和高糖+miR-148b inhibitor组(HG+miR-148b inhibitor组),其中miR-148b scramble和miR-148b inhibitor的转染参照脂质体LipofectamineTM2000转染说明进行瞬时转染,收集转染48 h的细胞,通过qRT-PCR检测各组细胞中miR-148b的mRNA表达;CCK8及流式细胞仪分别检测细胞活力及凋亡率;Western blot检测免疫抑制因子TGF-β1及NF-κB信号通路p-IκBα及下游相关基因cyclin D1和Bax的蛋白表达。结果:高糖可上调miR-148b的表达,转染miR-148b inhibitor后miR-148b的表达明显降低;与LG组比较,HG组细胞活力显著升高,细胞凋亡率显著升高,TGF-β1、p-IκBα、cyclin D1和Bax的蛋白表达均明显升高,与HG组比较,HG+miR-148b inhibitor组细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著降低,TGF-β1、p-IκBα、cyclin D1和Bax的蛋白表达均明显降低(P<0. 05)。结论:抑制肾小球系膜细胞miR-148b基因表达可抑制高糖诱导的细胞活力、凋亡率及免疫抑制因子TGF-β1表达的增加,机制可能与下调NF-κB信号通路有关。

洋参御唐方对高糖诱导下人肾小球系膜细胞增殖及TIMP-1 mRNA、MMP-9 mRNA表达影响

目的:通过研究洋参御唐方对高糖刺激下人肾小球系膜细胞(HMC)表达的影响,探讨其对糖尿病肾病(DN)肾脏保护的作用机制。方法:应用血清药理学方法制备洋参御唐方及贝那普利药物血清,再进行药物血清干预的研究。将体外培养的HMC分为对照组、洋参御唐方高剂量组、洋参御唐方中剂量组、洋参御糖方低剂量组、高糖组、贝那普利组共6组。于培养的24 h、48 h及72 h用MTT法检测各组细胞的增殖情况;并于相应干预因素作用48 h及72 h后,运用Real-time PCR技术法检测其相关mRNA即TIMP-1 mRNA、MMP-9 mRNA的相关表达。结果:高糖刺激能诱导TIMP-1 mRNA表达的上调、MMP-9 mRNA表达的下调;与高糖组相比,洋参御唐方高、中剂量组及贝那普利组TIMP-1 mRNA的表达下调、MMP-9 mRNA的表达上调,且以洋参御唐方高剂量组逆转TIMP-1 mRNA、MMP-9 mRNA表达失衡更为显著。结论:洋参御唐方可抑制高糖培养下HMC的增殖,且抑制效果优于贝那普利,其作用与降低TIMP-1蛋白的表达,上调MMP-9蛋白表达有关。洋参御唐方可通过逆转TIMP-1、MMP-9蛋白的表达,从而抑制高糖环境HMC的增殖可能是其降低细胞外基质堆积减轻肾间质纤维化的机制之一。

重楼皂苷Ⅱ对高糖干预下肾小球系膜细胞增殖及氧化应激的影响

目的探讨重楼皂苷Ⅱ对高糖干预下肾小球系膜细胞(GMC)增殖及氧化应激损伤的影响。方法将GMC分为正常对照组、甘露醇对照组、高糖组和重楼皂苷Ⅱ组,分别用含有5.6 mmol/L葡萄糖、5.6 mmol/L葡萄糖+19.5 mmol/L甘露醇、25 mmol/L葡萄糖、25 mmol/L葡萄糖+20μg/mL重楼皂苷Ⅱ的杜氏改良伊格尔培养基培养24 h。检测4组细胞的增殖活性、丙二醛含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及活性氧含量。结果与正常对照组比较,高糖组、重楼皂苷Ⅱ组细胞的增殖活性、丙二醛含量、活性氧含量升高,SOD活性降低(P<0.05);与高糖组比较,重楼皂苷Ⅱ组细胞的增殖活性、丙二醛含量、活性氧含量减低,SOD活性升高(P<0.05)。结论重楼皂苷Ⅱ对高糖干预下GMC增殖有一定的抑制作用,并可减轻细胞氧化应激损伤,这可能与其减少细胞内活性氧产生和提高SOD活性有关。

过表达Sirt1对高糖诱导的人肾小球系膜细胞增殖与TGF-β1表达的影响

目的 :探讨过表达沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,Sirt1)对高糖诱导的人肾小球系膜细胞增殖与转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法:体外培养人肾小球系膜细胞(HMC),利用Sirt1重组慢病毒载体感染细胞获得过表达Sirt1蛋白的人肾小球系膜细胞并分为4组:1NG+LV-CTL组:正常葡萄糖(5.5 mmol/L)+空白对照慢病毒感染;2HG+LV-CTL组:高糖(30 mmol/L)+空白对照慢病毒感染;3NG+LV-Sirt1组:正常葡萄糖+Sirt1慢病毒感染;4HG+LV-Sirt1组:高糖+Sirt1慢病毒感染;再设立3组未感染细胞作为对照,分别为:1NG组(正常葡萄糖);2NM组(正常糖+甘露醇组24.5 mmol/L);3 HG组(高糖处理),培养不同时间后以CCK-8法检测细胞增殖情况;实时定PCR和Western blot法检测各组细胞TGF-β1m RNA和蛋白表达水平。结果:1通过重组慢病毒感染,嘌呤霉素筛选,获取稳定过表达Sirt1蛋白的人肾小球系膜细胞系;2与NG组相比较,各时间点HG、HG+LV-CTL、HG+LV-Sirt1组CCK8的吸光值均明显升高(P均<0.01)。处理24、48 h后,HG+LVSirt1组的吸光值明显低于HG、HG+LV-CTL组。3与NG组相比较,HG、HG+LV-CTL、HG+LV-Sirt1组TGF-β1 m RNA以及蛋白水平明显上调,差异均有显著性(P均<0.01);HG+LV-Sirt1组的TGF-β1 m RNA以及蛋白水平明显低于HG、HG+LV-CTL组(P均<0.01);而NG、NM、NG+LV-CTL及NG+LV Sirt1组间相比较,无统计学差异(P>0.05)。结论 :过表达Sirt1能够抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞增殖与TGF-β1表达,Sirt1可能成为防治糖尿病肾病的作用靶点。

虫草益肾颗粒对高糖培养下人肾小球系膜细胞增殖的影响

目的:研究虫草益肾颗粒对体外高糖培养下人肾小球系膜细胞(HMC)增殖的影响,探讨其在防治糖尿病肾病(DKD)中的意义。方法:将常规培养的HMC分为正常组、高糖组、虫草益肾颗粒高、中、低剂量组及福辛普利组,分别给予相应对照的动物含药血清处理后,用CCK-8法检测24 h、48 h及72 h细胞增殖情况。结果:HMC经高糖刺激后表现出明显的增殖现象,且在48 h增殖效果最明显,72 h时呈下降趋势。虫草益肾颗粒及福辛普利药物血清对高糖刺激下的HMC增殖均有抑制作用,其中虫草益肾颗粒高剂量组血清对HMC的抑制作用优于福辛普利组,且虫草益肾颗粒对HMC增殖的抑制作用呈时间与剂量依赖性关系。结论:高糖可促进HMC的增殖,虫草益肾颗粒能明显抑制高糖条件下HMC增殖,从而预防肾小球纤维化及硬化的发生、发展,延缓DKD病情进展。