糖尿病视网膜病变高糖细胞模型的建立

目的建立一种高糖刺激下的糖尿病视网膜病变的细胞模型。方法分别采用不用葡萄糖浓度的培养基培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC），观察细胞在不同时间点的细胞活性和细胞利用葡萄糖的能力，HUVEC分别与不同浓度的葡萄糖（5．5、10、15、20、25、30、35、40、45、50mmol／L）共同孵育不同时间（6h、12h、24h、48h、72h），570nm处测OD值。结果各葡萄糖组对HUVEC活力的抑制率随着葡萄糖浓度的升高，作用时间的延长而升高。30mmol／L和35mmol／L的葡萄糖作用48h及48h以上对HUVEC活性（OD值）有明显抑制作用（P〈0．01）；各实验组葡萄糖浓度随时间延长均有不同程度的降低，且各组减低程度不同，其中30mmol／L的实验组中的葡萄糖浓度在48h和72h处降低最显著。结论30mmol／L是筛选糖尿病视网膜病变药物细胞模型中最佳的细胞培养浓度，培养时间48h是观测药物干预效果的最佳时间点。

脂联素通过NF-κB通路调节高糖所致内皮细胞损伤的保护作用

目的:探究脂联素对高糖诱导的内皮细胞HUVEC存活、氧化应激、炎症和线粒体功能的影响及其潜在机制。方法:将5、25 mmol/L葡萄糖培养的HUVEC细胞分为正常(NC)组、高糖(HG)组。不同浓度脂联素(1、2、4μg/ml)处理高糖诱导的内皮细胞设为低剂量(L)组、中剂量(M)组、高剂量(H)组。PBS、LPS联合4μg/ml脂联素处理的HUVEC细胞记为H+PBS组、H+LPS组。CCK8、Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞增殖、凋亡;Western blot检测细胞Cleaved caspase-3、NLPR3、氨基酸转运蛋白(ASC)、Caspase-1、p-NF-κB和p-核因子κB抑制蛋白(p-I-κBα)表达;ELISA检测细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、IL-4、IL-6、IL-1β浓度;免疫荧光法检测细胞ROS荧光活性;JC-1染色检测细胞线粒体膜电位;RT-qPCR检测NLRP3表达。结果:与NC组相比,HG组内皮细胞48 h、72 h、96 h存活率均显著降低,凋亡率显著升高,细胞上清LDH、SOD、MDA、线粒体膜电位水平、IL-4、IL-6、IL-1β浓度显著升高,ROS、GSH-Px浓度显著降低,Cleaved caspase-3、NLRP3、Caspase-1、p-NF-κB蛋白表达明显升高,p-I-κBα蛋白表达明显降低(P<0.05)。脂联素浓度依赖性抑制高糖诱导的内皮细胞上述指标变化。LPS减弱脂联素对HG诱导的内皮细胞的保护作用。结论:脂联素减轻高糖诱导的内皮细胞存活抑制、氧化应激、炎症反应和线粒体功能障碍,其保护作用机制可能与NF-κB通路有关。

高糖驯化对脐带间充质干细胞抗高糖能力的影响

为了探究高糖驯化后,人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stemcell,hUC-MSC)对高糖环境的抵抗能力,为糖尿病治疗提供高适应性细胞及方法,利用梯度糖浓度培养基驯化hUC-MSC至P5代,获得高糖驯化细胞(high glucose acclimated cell,HGAC);利用1.0 g/L葡萄糖完全培养基培养hUC-MSC至P5代,获得低糖培养细胞(lowglucose cell,LGC);取1.0×10^(6)个融合度80%~90%的LGC,用4.5 g/L葡萄糖完全培养基培养48 h,获得高糖培养细胞(high glucose cell,HGC)。取同代次LGC、HGAC及HGC进行细胞大小及增殖情况检测,同时通过流式细胞术检测细胞表型;利用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸比色法测定细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;采用qRT-PCR方法、Western-blot方法检测细胞抗衰老及抗氧化基因表达水平。结果显示,HGAC显著小于HGC(P<0.05),且增殖更快;HGAC的CD73、CD90及CD105表达率均在95%以上,而CD34和CD45的表达率均小于2%;与HGC相比,HGAC的SOD活性显著升高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05),同时,抗衰老基因p21及抗氧化基因Nrf2、HO-1、NQO1的表达水平显著升高(P<0.05)。上述结果表明,高糖驯化可增加hUC-MSC活性,使之抵抗高糖环境。

骨形态发生蛋白7在高糖环境下对成骨细胞分化的影响

目的:研究对于重组人骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein7,BMP7)在持续稳定高糖环境下对成骨细胞生物学性能及成骨活性的影响。方法:细胞取小鼠颅顶前成骨细胞亚克隆14(MC3T3-E1Subclone 14,MC3T3),分为4组:正常生理糖浓度组(葡萄糖浓度为5.5mmol/L)为对照组,生理糖浓度+BMP7组高糖组(葡萄糖浓度为5.5mmol/L,BMP7浓度为100μg/L)(葡萄糖浓度为25 mmol/L),高糖+BMP7组(葡萄糖浓度为25mmol/L,BMP7浓度为100μg/L)。甲基噻唑基四唑(MTT)法检测不同条件培养后1d、3d、5d、7d后的细胞增殖情况,成骨诱导检测细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性。罗丹明-鬼笔环肽染色后以激光共聚焦显微镜观察MC3T3细胞骨架于BMP7作用24h后的形态变化,荧光实时定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测BMP7作用48h后成骨基因特异性转录因子2(Runx2),骨钙素(osteocalcin,OCN)、碱性磷酸酶(ALP)的mRNA表达。结果:MTT实验显示25mmol/L葡萄糖可抑制MC3T3增殖(P<0.05),加入BMP7后可提高细胞增值率(P<0.05)。并可上调高糖导致的ALP活性下降。细胞骨架观察结果显示,对照组细胞骨架成束状铺开,交织成网,较为均匀。高糖组细胞微丝解聚成团状,模糊不清。RT-qPCR结果显示BMP7可促进MC3T3细胞的ALP、OCN及Runx2(P<0.05)的表达。结论:持续稳定高糖环境能够抑制成骨细胞的增殖及ALP活性,影响细胞骨架结构,抑制成骨基因表达,添加BMP7可以在不同程度上反转该趋势,但仍较正常水平低。

基于JAK/STAT3信号通路探讨SLIT3对高糖诱导的人肾小球足细胞炎症反应的影响

目的探讨SLIT3能否调控JAK/STAT3信号通路调控高糖诱导的肾小区足细胞炎症反应。方法将肾小球足细胞MPC-5随机分为L-Glucose+NC siRNA组、L-Glucose+SLIT3组、L-Glucose+SLIT3 siRNA组、H-Glucose+NC siRNA组、H-Glucose+SLIT3组、H-Glucose+SLIT3 siRNA组。流式细胞仪检测细胞凋亡率;ELISA检测细胞中炎症因子水平;蛋白质印迹检测细胞中JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达;RT-PCR检测细胞中SLIT3、IL-1β、IL-6、TNF-α相对表达量。结果与Ctrl组相比,SLIT3-siRNA1组(0.67±0.04)、SLIT3-siRNA2组(0.26±0.03)和SLIT3-siRNA3组(0.71±0.08)MPC-5细胞中SLIT3对表达量均明显降低,且SLIT3-siRNA3组变化最显著(P<0.01);与L-Glucose+NC siRNA组相比,L-Glucose+SLIT3组和H-Glucose+NC siRNA组MPC-5细胞凋亡率(分别为11.84%±1.06%、11.88%±1.07%)、细胞中IL-1β(分别为164.69±6.92、155.31±8.62)、IL-6(分别为162.16±5.56、105.35±3.44)、TNF-α(分别为103.31±6.84、128.43±4.82)水平及mRNA相对表达量、细胞中p-JAK2/JAK2(分别为1.74±0.14、3.93±0.17)和p-STAT3/STAT3比值(分别为1.99±0.24、4.43±0.16)明显增加,L-Glucose+SLIT3siRNA组细胞凋亡率(2.73%±0.25%)、细胞中IL-1β(78.09±7.47)、IL-6(46.48±2.63)、TNF-α水平(42.61±3.10)及mRNA相对表达量、细胞中p-JAK2/JAK2(0.16±0.04)和p-STAT3/STAT3(0.20±0.03)比值明显降低(P<0.01);与H-Glucose+NC siRNA组相比,H-Glucose+SLIT3组MPC-5细胞凋亡率(16.24%±1.28%)、细胞中IL-1β(214.09±9.28)、IL-6(205.44±6.80)、TNF-α水平(192.11±4.93)及mRNA相对表达量、细胞中p-JAK2/JAK2(5.00±0.39)和p-STAT3/STAT3比值(5.71±0.33)明显增加,H-Glucose+SLIT3 siRNA组细胞凋亡率(6.25%±0.43%)、细胞中IL-1β(118.60±8.05)、IL-6(74.37±4.91)、TNF-α水平(98.76±4.81)及mRNA相对表达量、细胞中p-JAK2/JAK2(2.99±0.13)和p-STAT3/STAT3(2.05±0.14)比值明显降低(P<0.01)。结论敲减SLIT3可抑制高糖诱导的肾小球足细胞中炎症反应和细胞凋亡,改善足细胞损伤,其作用机制可能比抑制JAK2/STAT3信号通路激活有关。

高糖对足细胞转分化和Smad7表达的影响

目的:通过观察高糖刺激下的足细胞表达synaptopodin、desmin和Smad7的变化,探讨高糖对足细胞的损伤机制。方法:将培养的小鼠足细胞分为正常糖组、高糖组、甘露醇组。倒置显微镜下观察足细胞的形态变化,采用RT-PCR和Western印迹技术分别检测synaptopodin、desmin、Smad7mRNA和蛋白的表达。结果:高糖刺激48h后的足细胞形态发生改变,并且synaptopodin、Smad7mRNA和蛋白表达较对照组减少,desmin mRNA和蛋白表达较对照组增加(P<0.01)。结论:高糖能够诱导足细胞发生转分化,并且这一作用可能与Samd7表达减少有关。

糖痛方及其有效成分对高糖培养的施万细胞增殖的影响

目的 探讨中药糖痛方含药血清及其主要有效成分川芎嗪、黄芪多糖对高糖培养的施万细胞增殖的影响.方法 利用CCK-8细胞增殖试剂观察不同浓度的糖痛方含药血清、川芎嗪单体、黄芪多糖单体及川芎嗪和黄芪多糖混合物在24～96h之间对高糖培养的施万细胞增殖的影响.结果 高糖培养下施万细胞增长受抑制,而不同浓度的糖痛方含药血清、川芎嗪单体、黄芪多糖单体及川芎嗪和黄芪多糖混合物在96h内均可促进高糖培养的施万细胞增殖；不同浓度的糖痛方含药血清对施万细胞增殖作用明显优于川芎嗪单体、黄芪多糖单体及川芎嗪和黄芪多糖混合物（P＜0.05）.结论 糖痛方含药血清可以减轻高糖对施万细胞增殖的抑制作用,且中药复方的作用明显优于中药单体.

高糖培养人肾小球系膜细胞对TGF-β1、FN、Smad7表达的影响

目的:通过观察高糖对人肾小球系膜细胞(HMCs)转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤维连接蛋白(FN)、Smad7表达的影响,探讨糖尿病肾病(DN)的发病机制。方法:将HMCs于高糖(30mmol/L)环境培养不同时间后,采用RT-PCR方法检测TGF-β1、FN、Smad7 mRNA表达,Western blotting检测Smad7蛋白的表达,采用ELISA检测TGF-β1、FN蛋白水平,同时以低糖培养作为对照组。结果:高糖培养24h、48h、72h后,TGF-β1 mRNA及蛋白的表达均较低糖培养对照组增加,在48h时达到高峰;FN mRNA及蛋白的表达亦较对照组增加,且呈时间依赖性;而Smad7 mRNA及蛋白表达下降。结论:TGF-β1/Smad信号转导途径负反馈调节Smad7蛋白的表达减少,可能是DN发病过程中的重要环节之一。

高糖对体外培养的乳鼠心肌细胞脂代谢的影响

目的探讨高浓度葡萄糖对高胰岛素水平作用下乳鼠心肌细胞脂代谢的影响。方法用胰岛素抵抗心肌细胞模型,以不同浓度葡萄糖培养基和胰岛素为干预因素进行实验。以脂蛋白脂肪酶的表达来观察心肌细胞脂代谢的改变;用电镜观察心肌细胞的病理性损伤。结果80 mmol/L葡萄糖作用下,胰岛素抵抗心肌细胞的脂蛋白脂肪酶mRNA的表达及活性明显增强(P<0.05);加用10-8mol/L胰岛素共同孵育后,脂蛋白脂肪酶mRNA的表达及活性减弱;不同浓度葡萄糖作用下,相同状态心肌细胞脂蛋白脂肪酶活性及脂质含量无显著性差异(P>0.05);相同浓度葡萄糖作用下,胰岛素抵抗心肌细胞脂质含量明显增加(P<0.05),加用10-8mol/L胰岛素共同孵育后,细胞脂质含量减少。高浓度葡萄糖作用下,正常心肌细胞和胰岛素抵抗心肌细胞出现线粒体肿胀,髓样结构形成,胞内脂滴增多等细胞结构损伤性改变,加用10-8mol/L胰岛素共同孵育后,细胞线粒体无增多及肿胀,胞内脂滴减少。结论胰岛素抵抗心肌细胞脂蛋白脂肪酶表达上调,脂代谢加速,细胞内脂质含量增加,脂蛋白脂肪酶mR-NA表达强度增加,细胞结构发生变化,而较高胰岛素水平可逆转这些变化的发生。

余甘子中没食子酸抑制高糖诱导胰岛β细胞凋亡

目的探究余甘子中没食子酸对高糖诱导胰岛β细胞凋亡的保护作用,为从中药中发现治疗糖尿病的天然化合物提供一定参考依据.方法体内实验造模:以wistar雄性大鼠作为体内研究对象,腹腔注射50mg/kg STZ,造模成功后口服给予25 mg/kg的没食子酸,阳性药选用西格列汀,给药4周后,取血、摘取胰腺,进行HE染色,采用Western blot法测定高糖状态下胰腺组织中NLRP3、TXNIP蛋白表达;体外实验造模:以胰岛瘤细胞株INS-1细胞作为体外研究对象,建立高糖诱导细胞凋亡模型,在无糖RPMI1640完全培养基中添加25mmol/L葡萄糖培养INS-1细胞,以没食子酸为受试样品,将实验分为正常对照、高糖模型、没食子酸低、中、高剂量组.采用MTT法测定细胞活性,采用QPCR法、Western blot法测定高糖状态下INS-1细胞中NLRP3、TXNIP的m RNA表达,检测NLRP3、TXNIP蛋白表达.结果 (1)INS-1细胞在葡萄糖浓度为25 mmol/L的培养基中培养48 h后,与对照组比较,凋亡率升高(P<0.01),表明高糖状态下细胞凋亡模型建立成功.(2)10、5、2.5μmol/L的GA分别处理对照组和高糖模型组细胞,对照组细胞存活率没有明显变化(P>0.05).体内实验中与对照组比,高糖模型组中INS-1细胞中NLRP3、TXNIP的蛋白表达具有统计学差异(P<0.05);GA处理后蛋白表达水平明显下调,有统计学差异(P<0.05),体外实验中与对照组比,高糖模型组中INS-1细胞中NLRP3的蛋白表达有统计学差异(P<0.01),GA处理后蛋白表达水平明显下调(P<0.01);TXNIP的蛋白表达水平上调(P<0.05);GA处理后蛋白表达水平明显下调(P<0.05);(3)与对照组比,高糖模型组中INS-1细胞中NLRP3、TXNIP m RNA表达水平均上调(P<0.01);GA处理后蛋白表达水平明显下调(P<0.01).结论将细胞置于添加25 mmol/L浓度葡萄糖的无糖RPMI1640完全培养基中培养48 h.GA对正常INS-1细胞增殖无影响,GA具有保护高糖状态下INS-1细胞凋亡的作用,其机制可能与GA下调NLRP3、TXNIP的基因表达有关.

高糖环境下P物质活化Akt通路促进间充质干细胞增殖和成血管内皮细胞分化的研究

目的揭示高糖环境下P物质(SP)对人骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖、迁移及成血管内皮细胞分化的影响,为其应用于治疗糖尿病皮肤溃疡等并发症提供依据。方法细胞高糖模型分为高糖对照组、高糖SP组和高糖蛋白激酶B(Akt)抑制剂组;正常环境培养的BMSC为正常对照组。CCK-8法检测细胞增殖情况;Transwell细胞小室迁移实验检测BMSC迁移数目;各组BMSC进行成血管内皮细胞分化实验,酶联免疫吸附试验检测成血管内皮细胞分化后各组BMSC的CD31蛋白含量;基质胶网眼形成实验检测成血管形成能力。Western blot检测各组BMSC的Akt和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达情况。结果与正常对照组比较,高糖对照组吸光度(A_(450))值、迁移数目、CD31蛋白含量、网眼数目、Akt和p-Akt蛋白相对表达量均降低;与高糖对照组比较,高糖SP组A_(450)值、迁移数目、CD31蛋白含量、网眼数目、Akt和p-Akt蛋白相对表达量均升高;与高糖SP组相比,高糖Akt抑制剂组上述指标均降低(P<0.01)。结论高糖环境下,SP可活化Akt通路促进BMSC增殖、迁移和血管内皮细胞分化。

当归多糖调控miR-148a-3p对高糖诱导视网膜神经节细胞损伤的影响

探讨当归多糖调控 miR-148a-3p 对高糖诱导视网膜神经节细胞损伤的影响。 方法:将高糖诱导视网膜神经节细胞(RGCs)分为 9 组,均进行 CCK-8 实验和流式细胞术检验 RGCs 增殖抑制率和凋亡率,测定 RGCs 内 SOD、MDA,用 RT-qPCR 检测 miR-148a-3p 表达。 结果:HG+当归多糖+miR-148a-3p In￣hibitor 组中 RGCs 增殖抑制率和凋亡率均低于其他组(P<0.05);HG+当归多糖+miR-148a-3p Inhibitor 组中RGCs 内 SOD 含量最高,MDA 最低(P<0.05);HG+当归多糖+miR-148a-3p Inhibitor 组中 miR-148a-3p 表达低于其他组(P<0.05)。 结论:当归多糖可上调 miR-148a-3p,促进 RGCs 增殖,抑制凋亡,减轻对高糖诱导RGCs 的损伤。

BCA-1通过ErK信号通路促进高糖环境下人脂肪间充质干细胞增殖和迁移

目的探讨高糖环境下B淋巴细胞化学引诱物(BCA-1)对人脂肪间充质干细胞(hAdMSCs)增殖和迁移的影响及其分子机制。方法在细胞高糖模型下,设立高糖对照组、高糖BCA-1组、高糖Erk抑制剂组;正常环境下为正常对照组。CCK8实验检测各组hAdMSCs增殖的吸光度值(A值),Transwell细胞迁移实验检测各组hAdMSCs的迁移率,酶联免疫(ELISA)方法检测各组hAdMSCs中PI3K、MAPK和VEGF蛋白的表达。结果细胞高糖环境下,高糖BCA-1组hAdMSCs的A值、迁移率均升高,差异有高度统计学意义(P<0.01);高糖BCA-1组hAdMSCs的PI3K、MAPK、VEGF蛋白含量高表达,差异有高度统计学意义(P<0.01);与高糖BCA-1组hAdMSCs比较,高糖Erk抑制剂组hAdMSCs的A值和迁移率均明显降低,差异有高度统计学意义(P<0.01),高糖Erk抑制剂组hAdMSCs的PI3K、MAPK和VEGF蛋白表达均分别低于高糖BCA-1组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论高糖环境下,高糖BCA-1通过PI3KErk-MAPK信号通路,上调hAdMSCs旁分泌VEGF蛋白,促进hAdMSCs增殖和迁移。

高糖环境下BCA-1通过Erk信号通路促进人脂肪间充质干细胞增殖和迁移

目的探讨高糖环境下B细胞趋化因子(BCA)-1对人脂肪间充质干细胞(hAdMSC)增殖和迁移的影响及其分子机制。方法高糖培养基培养的hAdMSC分为高糖对照组、BCA-1组(浓度分别为25、50、75μmol/L)和细胞外信号调节激酶(Erk)抑制剂组。CCK8实验检测各组hAdMSC增殖的吸光度值(A值),Transwell实验检测各组hAdMSC迁移率,Western印迹或酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组hAdMSC的磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、丝裂原活化蛋激酶(MAPK)或血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。结果细胞高糖环境下,25、50、75μmol/L BCA-1组hAdMSC的A值逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05),hAdMSC的迁移率逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.01);BCA-1组hAdMSC的PI3K、MAPK、VEGF蛋白含量均随着BCA-1浓度的增加而高表达,差异有统计学意义(均P<0.01);与25、50、75μmol/L BCA-1组hAdMSC分别相比,相应各Erk抑制剂组hAdMSC的A值和迁移率均明显降低(均P<0.01),各Erk抑制剂组hAdMSC的PI3K、MAPK和VEGF蛋白表达均分别低于相应的BCA-1组hAdMSC,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论高糖环境下,BCA-1通过PI3K-Erk-MAPK信号通路,上调hAdMSC旁分泌VEGF蛋白,促进hAdMSC增殖和迁移。

左旋紫草素通过减轻坏死性凋亡抑制高糖心肌细胞炎症的作用研究

目的研究左旋紫草素抑制高糖心肌细胞炎症的机制。方法培养H9C2心肌细胞株,分为正常糖对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)和左旋紫草素低、中、高浓度(25、50、100μmol/L)分别预处理30 min的高糖组。CCK8测定各组心肌细胞活力;ELISA测定各组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)表达;2,7-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针测定活性氧簇ROS水平;蛋白质印迹技术检测坏死性凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP表达;Hoechst 33258核染色测定心肌凋亡细胞数量。结果高糖处理H9C2心肌细胞24 h能明显降低细胞存活率、增加ROS生成,升高TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平,上调Cleaved Caspase-3及Cleaved PARP蛋白表达和增加凋亡细胞数量。左旋紫草素可抑制高糖诱导的心肌细胞损伤,升高细胞存活率,降低ROS生成,降低TNF-α、IL-1β和IL-6炎症因子水平,减轻凋亡细胞数量及坏死性凋亡蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP表达,呈剂量依赖性。结论左旋紫草素抑制高糖心肌细胞炎症可能是通过降低坏死性凋亡实现。

珠子参皂苷对缺氧/复氧损伤高糖心肌细胞PI3K-AKT-mTOR信号通路的影响

目的研究珠子参皂苷对缺氧/复氧损伤高糖心肌细胞的保护作用和可能机理。方法将高糖小鼠心肌细胞分成正常对照组、模型组、珠子参皂苷组(200μg/mL)、LY294002(200μg/mL)组、珠子参皂苷(200μg/mL)+LY294002(200μg/mL)组,共五组。应用CCK-8法测定细胞生长量、流式细胞法测定细胞凋亡量、Western-blot法测定PI3K/Akt/mTOR通路中关键蛋白的表达状况。结果与正常组相比,模型组细胞增殖活性显著降低(P<0.05)。与模型组相比,珠子参皂苷组中p-PI3K、p-Akt以及Bcl-2的表达均显著升高,Bax表达显著降低(P<0.05)。珠子参皂苷对缺氧复氧损伤高糖心肌细胞的保护作用可被抑制剂LY294002抑制。结论珠子参皂苷可能通过介导PI3K/Akt/mTOR信号通路与细胞凋亡来保护高糖心肌细胞。

沉默GFAP基因调控高糖诱导的视网膜微血管内皮细胞增殖与凋亡

目的:研究沉默胶质纤维酸性蛋白(GFAP)基因对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(hRMECs)增殖和凋亡的影响及其机制。方法:采用qRT-PCR法检测高糖(30mmol/mL)和低糖(5mmol/mL)处理的hRMECs中GFAP的表达。通过慢病毒介导法建立GFAP基因稳定沉默的高糖诱导的hRMECs细胞模型,用SRI-011381(TGF-β信号通路特异性激活剂)、二甲基亚砜(DMSO)处理该细胞模型,采用Western blot法检测细胞中GFAP、转化生长因子-β1(TGF-β1)、转录激活因子2(Smad2)、Smad3蛋白的表达,并分别采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡。结果:高糖处理的hRMECs中GFAP表达水平显著升高。通过慢病毒介导法可成功构建GFAP基因沉默的高糖诱导的hRMECs细胞模型,且沉默GFAP后,细胞的增殖能力明显提高,凋亡率明显抑制,TGF-β信号通路关键基因TGF-β1、Smad2、Smad3的蛋白表达均明显抑制,而激活TGF-β信号通路可逆转沉默GFAP对高糖诱导的hRMECs细胞的增殖促进和凋亡抑制作用。结论:沉默GFAP基因可促进高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞增殖,抑制细胞凋亡,其机制可能与TGF-β信号通路失活相关。

黄芪多糖调控TXNIP/NLRP3炎症小体对高糖诱导的人视网膜内皮细胞凋亡的作用机制

目的探究黄芪多糖调控TXNIP/NLRP3炎症小体对高糖诱导的人视网膜内皮细胞凋亡的作用机制。方法将hRECs细胞随机分为Control组、HG组、APS组和APS+pcDNA3.1-TXNIP组。采用CCK-8和流式细胞仪检测细胞存活率和凋亡率;DCFH-DA荧光探针检测活性氧(ROS)水平;检测细胞中氧化应激和炎症因子水平;蛋白质印迹法检测细胞中TXNIP、NLRP3、IL-1β和caspase-1蛋白表达。结果和Control组相比,HG组细胞存活率、SOD活性和GSH-Px含量明显降低,细胞凋亡率、ROS相对荧光强度、MDA含量、IL-1β和IL-18含量及细胞中TXNIP、NLRP3、IL-1β、caspase-1蛋白表达明显增加(P<0.05);和HG组相比,APS组细胞存活率、SOD活性和GSH-Px含量明显增加,细胞凋亡率、ROS相对荧光强度、MDA含量、IL-1β和IL-18含量及细胞中TXNIP、NLRP3、IL-1β、caspase-1蛋白表达明显降低(P<0.05);和APS组相比,APS+pcDNA3.1-TXNIP组细胞存活率、SOD活性和GSH-Px含量明显降低,细胞凋亡率、ROS相对荧光强度、MDA含量、IL-1β和IL-18含量及细胞中TXNIP、NLRP3、IL-1β、caspase-1蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论黄芪多糖可抑制高糖诱导的视网膜内皮细胞凋亡、炎症反应和氧化应激损伤,其作用机制可能和抑制TXNIP/NLRP3通路激活有关。

808nm激光介导的光生物调节对高糖环境下成纤维细胞活性氧稳态的影响

创面愈合延迟是最具挑战性的糖尿病临床并发症之一,其与活性氧(ROS)的过量生成有关。光生物调节作用(PBM)可以从多方面促进创面愈合,可作为糖尿病患者创面延迟愈合的一种治疗方法。本文研究了PBM对高糖培养的人胚胎皮肤成纤维细胞(CCC-ESFs)活性氧稳态的影响,探讨了PBM对改善细胞氧化应激损伤的作用。首先体外培养CCC-ESFs,细胞被随机分为对照组(正常培养基和高糖培养基)和808 nm激光照射组(功率密度分别为10,20,40 mW/cm2,能量密度分别为1.5,3,6,12 J/cm2),对照组不照光。高糖造模48 h后进行激光照射,随后分别检测细胞的增殖活力、ROS含量、总超氧化物歧化酶含量、总抗氧化能力、线粒体膜电位和相关细胞因子表达量。结果表明:高糖环境降低了细胞的增殖活力,ROS含量显著增多,抗氧化能力下降,细胞凋亡增多;采用808 nm激光照射后,细胞的增殖效应没有得到明显改善,但细胞的ROS含量下降,抗氧化酶表达量出现上升趋势,促炎细胞因子表达量降低。这些结果表明,PBM可以修复高糖环境下产生的氧化应激损伤,调节炎症反应,促进创伤愈合。

衣霉素对高糖刺激肾系膜细胞增殖的影响及其机制研究

目的观察N-糖链抑制剂衣霉素(TM)对肾小球系膜细胞(GMC)β1整合素以及其下游重要信号分子粘着斑激酶(FAK)和细胞周期正调控蛋白cyclinD1表达的影响。了解衣霉素在抑制高糖刺激GMC增殖中的重要作用。方法体外培养的大鼠系膜细胞株分为:正常对照组,高糖组,甘露醇组,高糖加不同浓度衣霉素(TM)组。用流式细胞技术检测β1整合素的表达;免疫组化方法测定FAK和细胞周期素D1(cyclinD1)的表达,四唑盐比色(MTT)法测定细胞增殖。结果正常系膜细胞中β1整合素、FAK和cyclinD1均有一定表达,高糖作用24h可以使3者表达明显升高,细胞增殖能力增强,且与渗透压无关。衣霉素(TM)可呈浓度依赖性的抑制高糖的这种作用。结论N-糖链抑制剂TM通过阻断细胞表面糖蛋白的糖基化过程,形成脱糖蛋白,从而抑制β1整合素的表达,并进一步影响细胞FAK和cyclinD1表达,使高糖诱导的细胞增殖受抑制。