预防和治疗糖尿病血管并发症的新靶点高级糖基化终产物受体

高级糖基化终产物受体 (RAGE)是细胞膜上的免疫球蛋白超家族成员 ,可与多种相关配体结合而产生不同的病理作用。RAGE配体之一为糖化氧化产物 ,即高级糖基化终产物 (AGE)。AGE主要产生于血浆、血管壁及其他与糖尿病并发症相关的部位。AGE与其受体结合以后会上调受体的表达 ,启动一个正反馈环 ,从而使细胞持续处于激活状态 ,最终导致组织损伤。RAGE可表达于内皮细胞、平滑肌细胞、单核细胞和神经细胞等。体内外实验均证明阻断AGE RAGE相互作用可抑制并部分逆转糖尿病大鼠早期血管通透性增高。在糖尿病伴有加速进行的动脉粥样硬化动物模型中 ,注射可溶性RAGE(sRAGE)阻断配体和受体的结合后 ,可完全抑制血管损伤的进展 ,同时还可以观察到在不改变血糖和血脂的情况下 ,动脉粥样硬化有所好转。目前的研究已表明 ,在糖尿病血管并发症发病机制中 ,RAGE起着重要作用 ,阻断其作用有可能成为预防和治疗糖尿病血管并发症的新途径。

血清晚期糖基化终产物及其可溶性受体对特发性肺纤维化与肺纤维化实质性疾病的鉴别诊断价值

目的 探究老年特发性肺纤维化(IPF)病人血清晚期糖基化终产物(AGEs)、可溶性晚期糖基化终产物受体(sRAGE)的表达及其与肺功能指标的相关性,分析两指标对IPF、慢性过敏性肺炎(cHP)、纤维化非特异性间质性肺炎(fNSIP)的鉴别诊断价值。方法 纳入我院2016年2月至2021年8月就诊的79例老年IPF病人(IPF组)、30例老年cHP病人(cHP组)和30例老年fNSIP病人(fNSIP组),另外纳入同期30例老年健康志愿者作为对照组。比较4组血清AGEs、sRAGE、AGEs/sRAGE以及肺功能指标[用力肺活量占预计值百分比(FVC%)、一氧化碳弥散量占预计值百分比(DLCO%)、肺总容量(TLC)]水平。采用ROC曲线和似然比检验分析血清AGEs、sRAGE、AGEs/sRAGE鉴别诊断3种疾病的价值。采用Pearson相关系数描述老年IPF病人血清AGEs、sRAGE水平与肺功能指标的关系。结果 cHF组、fNSIP组、IPF组病人的FVC%、DLCO%、TLC水平均显著低于对照组(P<0.05)。IPF组和cHP组的血清sRAGE水平低于对照组和fNSIP组(P<0.05),AGEs、AGEs/sRAGE水平高于对照组和fNSIP组(P<0.05);但对照组与fNSIP组血清AGEs、sRAGE水平差异均无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线分析结果显示,AGEs、sRAGE、AGEs/sRAGE对IPF与fNSIP有良好的鉴别诊断价值(AUC均>0.7),且AGEs/sRAGE对IPF与fNSIP的鉴别准确率、似然比均高于血清AGEs和sRAGE。Pearson相关分析结果显示,老年IPF病人血清AGEs与sRAGE呈负相关(r=-0.541,P<0.001),血清sRAGE与FVC%、DLCO%、TLC均呈正相关(r=0.445、0.452、0.312,P均<0.001),但血清AGEs与FVC%、DLCO%、TLC无关(P均>0.05)。结论 AGEs/sRAGE比值有助于对IPF与fNISP进行鉴别诊断,而且血清sRAGE水平可以在一定程度上反映老年IPF病人的肺功能损伤程度。

高迁移率族蛋白B1结合高级糖基化终产物受体可增加人支气管上皮细胞肿瘤坏死因子α的表达

目的:探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对人支气管上皮细胞(16HBE)肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响及相关机制。方法:(1)设置HMGB1不同浓度(0、100、500、2 000 ng/m L)组;(2)设置高级糖基化终产物受体(RAGE)拮抗组:对照,HMGB1 2 000 ng/m L,anti-RAGE,anti-RAGE+HMGB1。用实时荧光定量PCR检测16HBETNF-α mRNA的表达,双抗体夹心酶联免疫吸附实验法(ELISA)检测细胞培养上清TNF-α的浓度,蛋白质印迹法(Western blotting)检测RAGE蛋白表达。结果:(1)16HBETNF-α的表达随HMGB1浓度的增大而增加;(2)16HBE的RAGE蛋白表达随HMGB1浓度的增大而增加;(3)相对于HMGB1 2 000ng/m L刺激组,anti-RAGE+HMGB1组TNF-α表达明显减少。结论 :HMGB1通过结合RAGE受体可以浓度依赖形式增加16HBETNF-α的表达。

槲皮素脂质体对糖尿病大鼠肾脏糖基化终产物及其受体表达的影响

目的观察槲皮素脂质体(LQ)对糖尿病大鼠肾脏糖基化终产物(AGEs)及其受体(RAGE)表达的影响。方法采用旋转蒸发法制备槲皮素脂质体,高糖高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病大鼠模型,并随机分为糖尿病模型组(DM组),槲皮素脂质体低(LQ-L)、中(LQ-M)、高(LQ-H)剂量组,氨基胍(AG)对照组(AG组),另设正常组(N组)。灌胃治疗8周后测定各组大鼠血糖、体质量、肾脏肥大指数(KI)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr),ELISA法测血清AGEs表达和24 h尿微量白蛋白,PAS染色观察肾脏病理改变,免疫组化测肾组织AGEs表达,RT-PCR检测肾皮质RAGE m RNA表达水平。结果与N组比较,DM组大鼠血糖、KI、BUN、Scr、血清AGEs和24 h尿微量白蛋白显著升高,体质量明显降低;肾小球体积萎缩,基底膜增厚;肾组织AGEs和RAGE m RNA表达增高(均P<0.05)。与DM组比较,LQ各剂量组大鼠血糖、KI、BUN、Scr、血清AGEs和24 h尿微量白蛋白均降低,体质量增加;病理改变明显减轻;肾组织AGEs和RAGE m RNA表达降低,以中剂量组作用更明显(均P<0.05)。结论LQ可抑制蛋白质非酶糖基化反应,从而减少肾组织AGEs生成及RAGE m RNA表达水平,对糖尿病大鼠肾脏具有保护作用。

糖基化终产物通过其受体诱导人肾小球系膜细胞表达CTGF和FN

目的:探讨体外培养条件下糖基化终产物(AGEs)对人肾小球系膜细胞(HRMCs)中结缔组织生长因子(CTGF)及纤维连接蛋白(FN)基因表达的影响及其可能的作用机制。方法:将HRMCs与不同浓度的糖化牛血清白蛋白(AGE-BSA)和牛血清白蛋白(BSA)共同培养,或与同一质量浓度的AGE-BSA和BSA共同培养不同时间,以中和性抗RAGE抗体封闭细胞膜上糖基化终末产物受体(RAGE);采用免疫印迹法(Western blotting)观察AGEs对HRMCs中RAGE表达的影响,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测CTGF、FN mRNA的表达。结果:在HRMCs中存在少量RAGE的表达,AGE-BSA能够诱导HRMCs中RAGE的表达增加,并以时间和剂量依赖方式促进HRMCs中CTGF和FN的表达上调;CTGF、FN的表达水平在加入不同浓度(50、100、200、400 mg/L)的AGE-BSA作用48 h后以及加入质量浓度为200 mg/L的AGE-BSA作用不同时间(12、24、48、72h)后,较相应质量浓度或时间的BSA组和空白对照组均明显升高(P<0.05);抗RAGE抗体干预后能够部分抑制AGE-BSA诱导CTGF及FN的表达,而人IgG没有这种作用。结论:AGEs可能通过RAGE诱导CTGF及FN的表达上调,是糖尿病肾病肾脏纤维化的可能机制。

球状脂联素上调脂联素受体1抑制晚期糖基化终产物诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的初步研究

目的:观察球状脂联素(gAd)对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡时脂联素受体1(AdipoR1)表达的影响。方法:体外培养HUVECs,用不同浓度AGEs作用HUVECs,以及预处理gAd后再联合AGEs作用HUVECs。MTT比色法测定细胞活性、Annexin V-FITC/PI双染标记流式细胞仪检测细胞凋亡、实时定量RT-PCR检测内皮细胞AdipoR1 mRNA的表达。结果:AGEs作用HUVECs,细胞凋亡具有AGEs浓度依赖性(P<0.05)。相同浓度AGEs作用HUVECs,有和无gAd预处理的2组比较,用gAd预处理组明显拮抗HUVECs凋亡(P<0.01)。实时定量RT-PCR检测发现,gAd具有上调AdipoR1 mRNA表达的作用,与相同浓度AGEs作用的无gAd预处理组比较,差异显著(P<0.01)。结论:gAd可能通过上调AdipoR1表达拮抗AGEs诱导HUVECs的凋亡。

糖基化终产物及其受体对牙周膜成纤维细胞凋亡影响的实验研究

目的观察糖基化终产物(advanced glycation end products,AGE)促进糖基化终产物受体(receptor foradvanced glycation end products,RAGE)在大鼠牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLF)中的表达情况,并研究RAGE在大鼠PDLF凋亡中的作用。方法第3代大鼠PDLF在含有终浓度为200 mg/L的糖基化牛血清白蛋白(advanced glycation end products-bovine serum albumin,AGE-BSA)培养基内培养,根据孵育时间分为实验组A1、A2、A3、A4组;相同条件下PDLF于终浓度200 mg/L的BSA孵育,按与A1～A4组相同的孵育时间分为实验组B1、B2、B3、B4;在无AGE-BSA、BSA的培养基内培养第3代PDLF设为对照组C组。检测各组细胞活性、细胞凋亡情况、RAGE及细胞凋亡蛋白酶3 mRNA表达情况。结果 AGE干预的大鼠PDLF在细胞形态学及细胞活性检测方面均发生改变。相同时间点A、B各组细胞活性组间比较差异具有统计学意义(P<0.01),A1、A2、A3、A4 4组细胞活性的组间差异无统计学意义(F=2.353,P=0.088),B1、B2、B3、B4 4组的组间差异亦无统计学意义(F=0.468,P=0.706)。经流式细胞术检测,实验组A1、A2、A3、A4组细胞凋亡比例依次明显增高,与C组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。受AGE干预的细胞可以表达RAGE且细胞凋亡蛋白酶3表达阳性。结论 AGE可以刺激大鼠PDLF表达RAGE,促进细胞凋亡。

用T7噬菌体展示系统筛选与晚期糖基化终产物受体胞内段相结合的蛋白

目的 用T7噬菌体筛选系统筛选在细胞内与晚期糖基化终产物受体 (RAGE)结合的蛋白。方法 以重组RAGE为靶蛋白 ,用谷胱甘肽亲和树脂为介质 ,筛选T7人肺cDNA文库。结果 筛选 6轮后选择 6 4个噬菌体单个噬斑克隆 ,经EDTA处理后利用特异性PCR引物扩增插入片段 ,回收PCR产物并进行测序 ,将所得到的序列用BLAST软件搜索GenBank中的同源序列 ,得到了 2 5个编码蛋白的序列。结论 T7噬菌体展示筛选系统是筛选新的结合蛋白的一种简单、快速和有效的手段 ,所筛选的与RAGE胞内段相互作用的蛋白对进一步研究其信号转导通路的复杂功能和调节机制提供了很好的靶点。

高糖和高级糖基化终产物可通过PI3K/Akt信号通路增加足细胞的通透性

除了一些潜在的疾病之外,蛋白尿条件下可引起足细胞高特异性趾状足突发生收缩和消失的超微结构变化。为了研究高糖（HG）和高级糖基化终产物（AGE）是如何引起足细胞表形的变化,

慢性阻塞性肺疾病患者血浆晚期糖基化终末产物和可溶性糖基化终末产物受体浓度变化及其临床意义

目的观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血浆晚期糖基化终末产物(AGEs)和可溶性糖基化终末产物受体(sRAGE)变化,探讨其临床意义。方法选取2012年5月—2013年5月辽宁医学院附属第一医院重症监护病房收治的患者共102例,其中COPD患者53例为COPD组,非COPD患者49例为非COPD组;根据呼吸功能检测结果将COPD患者分为4个亚组,即轻度COPD组15例、中度COPD组13例、重度COPD组15例以及极重度COPD组10例。采用酶联免疫吸附试验测定所有患者血浆AGEs和sRAGE浓度。结果 COPD组患者血浆AGEs浓度为(35.45±3.30)μg/ml,高于非COPD组的(29.62±0.83)μg/ml(P<0.001)。COPD组患者血浆sRAGE浓度为(330.15±112.11)pg/ml,低于非COPD组的(884.53±190.94)pg/ml(P<0.001)。极重度COPD组血浆AGEs浓度高于重度COPD组,重度COPD组高于中度COPD组,中度COPD组高于轻度COPD组,差异均有统计学意义(P<0.01);4个亚组COPD患者血浆sRAGE浓度比较,差异无统计学意义(F=2.71,P=0.84)。直线相关分析结果显示,COPD患者血浆AGEs浓度与一秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1%)呈负相关(r=-0.90,P<0.05);血浆sRAGE浓度与FEV1%无直线相关关系(r=0.270,P>0.05)。结论血浆AGEs浓度升高可能是COPD的危险因素,而血浆sRAGE浓度降低可能是COPD的保护因素,血浆AGEs浓度可以作为判断COPD患者病情严重程度的指标,血浆AGEs浓度升高预示COPD患者预后不良。

晚期糖基化终产物对高糖诱导NRK-52E细胞的转分化作用

目的:探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对高糖诱导大鼠肾小管导管上皮细胞株NRK-52E的转分化干预作用。方法:大鼠肾小管导管上皮细胞株设空白组(不给葡萄糖)、高糖组(25mmol/L葡萄糖)、AGEs干预组(100mg/LAGEs)、高糖AGEs干预组(100mg/LAGEs+25mmol/L葡萄糖),培养72h后,用Westernbolt检测转化因子β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原、金属蛋白酶2(MMP2)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及甲状旁腺素相关肽(PTHrP)在NRK-52E细胞的表达,活性氧(ROS)含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测。结果:高浓度葡萄糖上调TGF-β1、Ⅰ型胶原、MMP2、α-SMA以及PTHrP表达,AGEs显著上调高浓度葡萄糖状态下TGF-β1、Ⅰ型胶原、MMP2、α-SMA和PTHrP表达,提高ROS含量。结论:AGEs可以促进高浓度葡萄糖诱导肾小管导管上皮细胞转分化。

糖基化终产物对心肌微血管内皮细胞表达MCP-1和ICAM-1的影响及机制研究

目的:观察体外孵育的牛血清白蛋白(BSA)非酶促糖基化终末产物(AGEs)对心肌微血管内皮细胞细胞间黏附分子(ICAM-1)和单核细胞趋化因子-1(MCP-1)表达的影响及机制.方法:取50 g/L牛血清白蛋白(BSA)、500 g/L D-葡萄糖,于37℃孵箱内避光孵育12 wk,制备外源性AGEs-BSA.体外培养大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs).分设不同浓度梯度的AGEs实验组、BSA对照组,采用ELISA法测定MCP-1的表达,流式细胞术测定ICAM-1的表达,Western Blot法测定糖基化终末产物受体蛋白(RAGE)的表达,RT-PCR检测RAGE mRNA的表达.结果:100,200,400 mg/L AGEs可显著增加心肌微血管内皮细胞ICAM-1(13.2%,14.5%,38.1%),MCP-1[(52.5±5.5),(116.0±3.1),(139.6±8.7)μg/L]的表达(与对照组相比较,P<0.05),且在蛋白水平及mRNA水平均明显增加RAGE的表达(P<0.05),并呈浓度依赖性.结论:AGE-BSA可刺激心肌微血管内皮细胞过量表达ICAM-1和MCP-1,从而加速心肌微血管炎症的发生与发展.其机制可能是AGEs上调了心肌微血管内皮细胞RAGE的表达.也进一步证实了AGEs-RAGE信号系统的起动是糖尿病心肌微血管病变发生发展一个重要原因.

晚期糖化终产物受体在树突状细胞及T淋巴细胞免疫中的作用

越来越多研究显示晚期糖化终产物受体(RAGE)与其配体反应在炎症及免疫反应中起重要作用。RAGE作为一种模式识别受体表达于树突状细胞、淋巴细胞、单核巨噬细胞和内皮细胞等多种细胞表面,介导非特异性和特异性免疫应答,参与多种炎症免疫性疾病的发生和发展。本文就RAGE对树突状细胞和淋巴细胞成熟及其功能的影响,探讨RAGE在特异性免疫过程中的作用。

食源性晚期糖基化终末产物与非酒精性脂肪肝关系的研究进展

非酒精性脂肪肝(NAFLD)是一组获得性的代谢应激相关性肝病,而晚期糖基化终末产物(AGEs)在NAFLD发病中起着重要的作用。食源性AGEs是人体内AGEs的主要贡献者,食源性AGEs可通过非受体结合的方式、受体结合的方式、影响肠道菌群发挥作用等多种机制促进NAFLD的发生与发展。AGEs特异性受体(RAGE)及RAGE下游信号通路的阻断、基因的敲除或食源性AGEs摄入限制等方法可能成为治疗此类肝病的有效手段,还需更大样本量的临床研究探求食源性AGEs影响NAFLD的确切机制。

晚期糖基化终产物受体特异性小干扰RNA抑制肝星状细胞表达初探

目的探讨晚期糖基化终产物受体（RAGE）特异性小干扰RNA（siRNA）在肝纤维化中对纤维化标志物[层粘连蛋白、透明质酸、血清Ⅲ型前胶原（PHINP）]生成的影响。方法构建RAGE特异性siRNA表达载体pAKD—GR126，分离培养原代大鼠肝星状细胞（HSC），将重组载体转染入原代大鼠HSC，以空白组和转染非特异性siRNA表达载体pAKD-NC组为对照，分别用PCR法和Western免疫印迹法检测各组原代HSCRAGE、层粘连蛋白、透明质酸、PⅢNPmRNA及蛋白的表达。正态分布及方差齐性资料采用方差分析（LSD）及SNK法两两比较，非正态分布及方差不齐资料采用非参数秩和检验。结果转染特异性siRNA表达载体pAKD-GR126的原代HSCRAGEmRNA和蛋白的表达率分别为空白组和pAKD-NC组的（42．32±6．16）％、（43．24±7．50）％和（51．06±13．79）％、（47．94±5．36）％（F=7．791，36．513；P均〈0．05）；层粘连蛋白mRNA和蛋白的表达率分别为空白组和pAKD-NC组的（41．07±3．13）％、（40．59±5．87）％和（53．89±2．25）％、（52．46±4．68）％（F=225．111，88．039；P均〈0．05）；透明质酸mRNA和蛋白的表达率分别为空白组和pAKD-NC组的（45．69±0．87）％、（46．08±2．36）％和（54．20±0．56）％、（52．30±3．42）％（F=178．317，180．646；P均〈0．05）；PⅢNPmRNA和蛋白的表达率分别为空白组和pAKD-NC组的（56．10±4．18）％、（55．15±2．39）％和（54．40±2．79）％、（53．58±6．18）％（F=141．633，49．670；P均〈0．05）。结论RAGE特异性siRNA可抑制原代大鼠HSCRAGE基因的表扶，并能显著降低纤维化标志物（层粘连蛋白、透明质酸、PⅢNP）基因及蛋白的表达。

活络育阴方对糖尿病性脑梗死大鼠脑组织高级糖基化终产物受体表达的影响

目的:建立糖尿病性脑梗死大鼠模型,观察对比高级糖基化终产物受体(RAGE)在模型大鼠中的表达及活络育阴方对其的影响。方法:选SD大鼠以高脂高糖饮食,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导建立糖尿病模型,在此基础上再用线栓法制作大脑中动脉栓塞(MCAO)模型;利用形态学等方法,观察不同剂量和不同时间活络育阴方对糖尿病性脑梗死的脑保护作用;用ABC免疫组化方法观察活络育阴方对糖尿病性脑梗死模型大鼠脑损伤后RAGE表达的影响。结果:活络育阴方治疗糖尿病性脑梗死大鼠,在不同剂量和不同时间内大鼠脑组织RAGE表达均明显降低。结论:活络育阴方可能通过下调RAGE表达,对糖尿病性脑梗死大鼠的神经损伤起到保护作用。

阿尔茨海默病诊断中的sLRP以及sRAGE敏感性和特异性分析

目的研究在阿尔茨海默病(AD)诊断中血浆可溶性低密度脂蛋白相关受体蛋白-1(s LRP)以及可溶性晚期糖基化终产物受体(s RAGE)敏感性与特异性。方法 350例招募的志愿调查患者,根据患病情况分为四组:126例AD患者作为AD组,96例深思血管性痴呆患者作为Va D组,30例非AD变性病痴呆患者作为NND组,98例认知正常患者作为NC组。比较四组患者的s LRP与s RAGE指标检测及其敏感性与特异性。结果四组患者中s LRP以及s RAGE指标整体比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。AD组s LRP水平低于Va D组、NND组、NC组,差异具有统计学意义(P<0.01);Va D组s LRP水平低于NND组、NC组,差异具有统计学意义(P<0.01);AD组s RAGE水平低于Va D组、NC组,差异具有统计学意义(P<0.01);Va D组、NND组s RAGE水平低于NC组,差异具有统计学意义(P<0.01)。NND组与NC组中s LRP指标的特异性分别为93.3%与85.7%,Va D组中的特异性低为58.3%;AD组中s RAGE指标的敏感性为82.5%,NND组中s RAGE指标的特异性为53.3%,s LRP与s RAGE指标检测联合检测能够得到优于单独检测的诊断结果。结论把s LRP与s RAGE联合运用于AD诊断的治疗过程中能够得到比较准确的诊断结果 ,具有重要的临床推广应用价值。

过氧化物酶体增殖物激活受体γ对糖基化终产物诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

目的观察吡格列酮对糖基化终产物(AGEs)刺激下大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的作用及对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因及蛋白表达水平的影响,探讨PPARγ在AGEs诱导VSMCs增殖中的作用。方法(1)MTT法观察不同浓度、不同时间的AGEs对VSMCs增殖的影响及吡格列酮(1.0、10、100μmol/L)与AGEs共孵育对VSMCs增殖的干预作用。(2)用半定量逆转录聚合酶链反应测定VSMCs中PPARγmRNA的表达。(3)用Western blot法检测PPARγ的蛋白表达。结果AGEs作用导致VSMCs增殖,AGEs抑制PPARγmRNA和蛋白表达水平,这种抑制作用随着AGEs干预的时间延长和浓度的增加而增强(P<0.05)。PPARγ激活剂吡格列酮通过增加PPARγ的表达,抑制AGEs诱导的VSMCs增殖。结论PPARγ表达的下降可能是糖尿病易患动脉粥样硬化的重要原因之一。

异氟醚对大鼠认知功能及海马高级糖基化终末产物受体表达的影响

目的观察异氟醚对大鼠海马高级糖基化终末产物受体（receptor for advanced glycation end products，RAGE）表达及认知功能的影响。方法SD雄性老年大鼠（24月龄）45只，SD雄性成年大鼠（4月龄）45只，随机数字表法分为6组（n=15），老年对照组（C1组），成年对照组（C2组）：吸入30％氧气的空氧混合气体对照；老年异氟醚单次吸入组（S1组），成年异氟醚单次吸入组（S2组）：1．5％异氟醚单次吸入2h；老年异氟醚多次吸入组（R1组），成年异氟醚多次吸入组（R2组）：1．5％异氟醚吸入3次，1次／d，2h／次。各组大鼠吸入处理后1d取8只行Morris水迷宫进行认知功能测试，其余大鼠处死取海马，RT—PCR方法测定RAGEmRNA水平，免疫组织化学方法测定RAGE蛋白表达。结果各组大鼠吸入处理过程中生命体征平稳，血氧饱和度及心率均在正常范围。C1组穿越平台次数为（7．30±2．40）次，探索时间为（49．90±6．22）S，S1、R1组与C1组相比穿越平台的次数减少[穿越平台次数分别为S1（3．90±2．42），R1（3．44±2．40），F=7．448，P〈0．01]，探索时间缩短[探索时间分别为S1（43．33±7．08）S，R1（39．09±4．56）S，F=7．63，P〈0．05]，而逃避潜伏期延长（P〈0．05）。R2组较C2组逃逸潜伏期延长[逃逸潜伏期分别为R2（14．65±3．83）S，C2（7．84±2．51）S，F=12．773，P〈0．01]，探索时间缩短（均P〈0．01），穿越平台次数减少（P〈0．01）。S2组与C2组比较，空间探索时间与穿越平台次数均未见显著统计学差异（P〉0．05）；RAGE表达：与C1组比较S1、R1组mRNA表达水平增高[mRNA表达分别为C1（0．11±0．02），S1（0．56±0．09），R1（0．73±0．14）F=169．447，P〈0．01]，免疫组化阳性细胞颗粒数增多（P〈0．01），S1组与R1组比较蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05）；与C2组比较，S2组mRNA水平及蛋白表达未见明显差异（P〉0．05），但R2组mRNA及免疫组化阳性细胞表达增高，与C2组比较差异有显著意义（均P〈0．01）。结论异氟醚导致不同月龄大鼠认知功能改变，尤其对老年大鼠影响显著，可能与海马RAGE表达上调有关。