高肺血流肺动脉高压形成机制的研究

目的：研究高肺血流幼猪模型肺动脉血流动力学及组织学变化与血清基质金属蛋白酶、血清内皮素、白细胞介素6、8以及肺组织P38MAPK变化的关联性。方法：采用生后2-3月龄的幼猪,体重7-10 kg,分为两组,每组12只。对照组（control group,n=12）：即假手术组,只开胸无手术处理;高肺血流组（treatment group,n=12）：行左侧开胸,降主动脉与左肺动脉搭桥术。所有动物正常饲养3个月。然后正中开胸,检测肺动脉收缩压（PASP）、肺血管阻力（PVR）,观察肺动脉标本的结构和组织学变化。ELISA检测血清基质金属蛋白酶、血清内皮素、白细胞介素6、8水平、取两组动物的左侧肺脏标本,以免疫印迹方法测量肺组织P38MAPK活性。结果：高肺血流组肺动脉收缩压（PASP）、肺血管阻力（PVR）显著升高（P〈0.01）;左肺动脉出现平滑肌细胞显著增生,部分血管中膜及内膜增厚,管腔狭窄;血清基质金属蛋白酶、血清内皮素、白细胞介素6、8水平升高、肺组织P38MAPK活性升高。结论：在幼猪动物模型中,高肺血流可导致肺动脉结构重塑,可导致肺动脉压力的升高,与血清基质金属蛋白酶、血清内皮素、血浆白细胞介素6、8、肺组织P38MAPK活性变化呈正相关。为进一步研究高肺血流先天性心脏病肺动脉高压的形成过程提供实验依据以及实验平台,以期在治疗上提供新的方法。

缺氧诱导因子在高肺血流性肺动脉高压大鼠肺组织中的动态变化及意义

目的观察缺氧诱导因子(hypoxia inducible factors,HIFs)在高肺血流性肺动脉高压大鼠肺组织的动态表达,探讨HIF-1α、HIF-2α在高肺血流性肺动脉高压形成过程中的作用。方法 64只6周龄雄性健康SD大鼠采用随机数字法均分为假手术组与肺动脉高压组,肺动脉高压组大鼠通过腹主动脉-下腔静脉分流法建立高肺血流性肺动脉高压模型,在两组大鼠术后第4、8、12、16周测量平均肺动脉压力(mean pulmonary artery pressure,mPAP)、右心室肥厚指数(right ventricular hypertrophy index,RVHI)及肺血管形态学观察,Western blot检测肺组织HIF-1α、HIF-2α蛋白表达,RT-PCR检测HIF-1αmRNA、HIF-2αmRNA的表达。结果肺动脉高压组大鼠术后mPAP及RVHI随时间延长持续增高,肺动脉形态学变化与mPAP变化一致;肺动脉高压组大鼠肺组织HIF-1α、HIF-2α蛋白表达在术后随着时间的延长,均呈现先升高后下降的趋势,于术后8、12周明显高于同时间点对照组(P<0.05);HIF-1αmRNA、HIF-2αmRNA的表达亦呈现先升高后下降的趋势,于术后8、12周明显高于同时间点对照组(P<0.05)。结论 HIF-1α和HIF-2α可能在大鼠高肺血流性肺动脉高压形成过程中的肺血管病变可逆阶段发挥了一过性的血管保护作用,但仍无法遏制肺动脉高压的形成。

尾加压素Ⅱ受体拮抗剂对高肺血流性肺动脉高压大鼠肺组织TGF-β1表达的影响

目的:研究尾加压素-Ⅱ(UⅡ)受体拮抗剂在大鼠高肺血流性肺动脉高压(PAH)模型中对转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法:雄性SD大鼠60只随机均分为PAH组(S组)、假手术组(C组)、UⅡ抑制组(M组,给予UⅡ受体拮抗剂帕洛舒仑),每组20只。S组和M组行外科分流术建立PAH模型。造模后4、8、12周,每组取5只大鼠测右心室压力,于第12周留取肺组织标本,Western blot测肺组织中UⅡ和TGF-β1蛋白的表达;RT-PCR检测肺组织中TGF-β1 mRNA表达。多组间比较采用单因素方差分析,相关性采用Pearson相关分析。结果:3组肺动脉压力比较:和C组相比,S组大鼠肺动脉压力显著升高(P<0.05),M组较S组显著降低(P<0.05)。造模后第12周,和C组相比,S组大鼠肺组织中UⅡ蛋白表达量显著升高(P<0.05),M组较S组均显著降低(P<0.05)。造模后第12周,和C组相比,S组大鼠肺组织中TGF-β1 mRNA及蛋白表达量均显著升高(P<0.05),M组较S组均显著降低(P<0.05)。UⅡ蛋白表达量与肺动脉压力、TGF-β1 mRNA及蛋白表达量均呈正相关(r=0.987、0.979、0.966,P<0.05)。结论:UⅡ受体拮抗剂帕洛舒仑可能通过下调TGF-β1表达而缓解大鼠高肺血流性PAH形成。

高肺血流性肺动脉高压大鼠血清和肺组织补体成分1q/肿瘤坏死因子相关蛋白9水平及其与血流动力学和右心室肥厚的相关性分析

目的观察高肺血流性肺动脉高压大鼠血清和肺组织补体成分1q/肿瘤坏死因子相关蛋白9(C1q/tumor necrosis factor-related protein 9,CTRP9)水平,及其与血流动力学和右心室肥厚的相关性。方法将50只成年雄性SD大鼠按照完全随机数字表法分为假手术组和分流组,每组各25只,分流组大鼠制作高肺血流性肺动脉高压模型。比较两组大鼠血流动力学指标[肺动脉平均压(mean pulmonary artery pressure,mPAP)、右心室平均压(mean right ventricular pressure,mRVP)]、右心室肥厚指数(right ventricular hypertrophy index,RVHI)、CTRP9和一氧化氮(nitric oxide,NO)水平。结果分流组大鼠mPAP、mRVP、RVHI、血清NO水平、血清和肺组织CTRP9水平均显著高于假手术组(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,高肺血流性肺动脉高压大鼠血清和肺组织CTRP9水平与其mPAP、mRVP、RVHI、血清NO水平均呈显著正相关(均P<0.05)。结论高肺血流性肺动脉高压大鼠血清和肺组织中存在CTRP9高表达,CTRP9可能参与了高肺血流性肺动脉高压的形成。

高肺血流幼猪模型中肺动脉血流动力学及组织学变化对血清基质金属蛋白酶的影响

目的研究高肺血流幼猪模型肺动脉血流动力学及组织学变化与血清基质金属蛋白酶的关联性。方法采用生后2-3月龄的幼猪,体重7-10kg,分为两组,每组12只。对照组(control group,n=12):即假手术组,只开胸无手术处理;高肺血流组(shunt group,n=12):全部行左侧开胸,降主动脉与左肺动脉搭桥术。所有动物正常饲养3个月。然后正中开胸,检测肺动脉收缩压(PASP)、肺血管阻力(PVR),观察肺动脉标本的结构和组织学变化。Elisa检测血清基质金属蛋白酶水平。结果高肺血流组肺动脉收缩压(PASP)、肺血管阻力(PVR)显著升高(P<0.01);左肺动脉出现平滑肌细胞显著增生,部分血管中膜及内膜增厚,官腔狭窄;血清基质金属蛋白酶水平升高。结论在幼猪动物模型中,高肺血流可导致肺动脉结构重塑,可导致肺动脉压力的升高,与血清基质金属蛋白酶变化呈正相关。为进一步研究高肺血流先天性心脏病肺动脉高压的形成过程提供实验依据以及实验平台,以期在治疗上提供新的方法。

高肺血流性肺动脉高压大鼠模型的优化方法

目的:研究优化构建高肺血流性肺动脉高压大鼠模型的制备方法,提高成模率。方法:将SD大鼠随机分为假手术组、传统分流组及优化分流组,每组25只。假手术组只进行开腹操作而不进行分流术,传统分流组采用传统分流术,优化分流组采用优化分流术。于术后11周,观察3组大鼠血管变化、右心室压力、肺动脉病理改变和右心室心肌肥厚指数,并比较传统分流组与优化分流组模型成模率。结果:优化分流组成模率为88%,高于传统分流组的48%,差异有统计学意义(χ~2=7.445,P=0.006)。苏木精—伊红(HE)染色显示:与假手术组相比,传统分流术组与优化分流术组大鼠中,可见肺动脉壁较假手术组明显增厚。优化分流组和传统分流组右心室收缩压、舒张压及右心室心肌肥厚指数均较假手术组明显增大(均P<0.05),而优化分流组与传统分流组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:优化分流手术可成功制备高肺血流性肺动脉高压大鼠模型,并提高成模率,具有一定的推广应用价值。

自体血管内皮祖细胞移植治疗高肺血流量肺动脉高压

目的 观察自体血管内皮祖细胞（EPCs）移植对高肺血流肺动脉高压（PAH）的治疗作用.方法 将30头实验幼猪随机分为3组,每组10头.假手术组（Sham组）仅开胸;对照组（Control组）行左胸后外侧切口,降主动脉与主肺动脉分流术;EPCs治疗组（EPCs组）手术操作同对照组,术后2周给予EPCs 2＆#215;10 7个细胞,颈静脉输入.术前与术后30 d,观察3组猪的肺动脉收缩压（PASP）、肺血管阻力（PVR）,血清基质金属蛋白酶（MMP）-9、内皮素-1（ET-1）、白细胞介素（IL）-6、IL-8水平变化,以及肺组织p38丝裂原激活蛋白激酶（p38 MAPK）表达活性,肺动脉标本的组织学变化.结果 术后30 d,与Sham组比较,PASP、PVR、MMP-9、ET-1、IL-6、IL-8、p38MAPK在Control组[（6.63±1.20） kPa、（10.44 ±2.53） wood＇s U、（76.63±10.39） μg/L、（103.66±17.31） μg/L、（43.00 ±7.33） ng/L、（67.39±9.65） ng/L、3.63 ±0.33]和EPCs组[（4.07 ±0.77） kPa、（6.27±0.65） wood＇s U、（64.11 ±9.73） μg/L、（90.44±13.11） μg/L、（30.44±8.17） ng/L、（53.23±7.37） ng/L、1.73 ±0.37]明显升高（P＜0.01）;EPCs组明显低于Control组（P＜0.05）;肺组织病理学改变,Control组最为明显,EPCs组轻度改变,Sham组未见明显病理改变.结论 EPCs移植对高肺血流肺动脉高压具有治疗作用,其机制可能为抑制MMP-9、ET-1等致肺组织重构因素的水平,以及抑制肺动脉高压过程中的炎症损伤而发挥作用.

氯离子通道阻断剂对大鼠高肺血流性肺动脉高压的影响

目的 研究氯离子通道阻断剂尼氟灭酸（NFA）对大鼠高肺血流性肺动脉高压的作用.方法 雌雄不限的SD大鼠50只,随机数字表法分为5组：正常组、假手术组、模型组、给药1组、给药2组,每组10只.腹主动脉下腔静脉分流术后所有大鼠在相同条件下饲养11周,分别测定肺动脉平均压（mPAP）,右心室肥厚指数（RVHI）,肺动脉管壁面积与管总面积比（W/V）、管壁厚与管外径比（T/D）.结果 1.模型组的mPAP[（25.79±4.03） mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）]均高于正常组[（16.48±1.70） mmHg]、假手术组[（17.03±2.01） mmHg]、给药1组[（21.78 ±2.77） mmHg]及给药2组[（20.31±2.15）mmHg] （F=18.983,P＜0.01）.给药1组的mPAP较给药2组略高,但差异无统计学意义（P＞0.05）;给药组的mPAP均高于正常组及假手术组,差异有统计学意义（P均＜0.01）.2.模型组的W/V及T/D均高于正常组、假手术组、给药1组及给药2组,差异有统计学意义（F =26.135、15.527,P均＜0.001）.给药1组与给药2组的W/V及T/D相比差异均无统计学意义（P均＞0.05）,但较正常组及假手术组高,差异有统计学意义（P均＜0.01）.结论 氯离子通道阻断剂NFA能部分降低高肺血流性肺动脉高压大鼠的mPAP,抑制血管平滑肌细胞增殖,提示NFA对高肺血流性肺动脉高压有一定的治疗作用.

跨膜蛋白16A与高肺血流性肺动脉高压中炎症反应的关系

目的探讨跨膜蛋白16A (TMEM16A)与高肺血流性肺动脉高压中炎症反应的关系,为诊治肺动脉高压提供参考依据.方法将30只大鼠随机分为对照组(不做任何处理)、假手术组(除腹主动脉夹闭3 min和不穿刺吻合缝合血管外,其余采用分流组方法处理)和分流组(建立高肺血流性肺动脉高压大鼠模型),给予同样的饲养环境,10周后对3组大鼠的右心室心肌肥厚指数(RVHI)、右心室收缩压(RVSP)、肺血管组织的TMEM16A、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、Raf、p38MAPK蛋白进行检测.结果分流组RVSP、RVHI均显著高于假手术组、对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);分流组的TMEM16AmRNA表达及TMEM16A蛋白表达显著高于假手术组与对照组(P<0.05);分流组的TNF-α、Raf、p38 MAPK表达显著高于对照组和假手术组.结论在高肺血流性肺动脉高压大鼠中,TMEM16A介导的钙激活性氯离子通道(CaCC)显著高表达,可能通过MAPK途径影响肺血管炎症.