用高胰岛素正糖钳夹技术研究人参皂甙对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠中PI3K的影响

[目的]探讨人参皂甙对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠中PI3K的影响。[方法]运用高胰岛素正糖钳夹技术检测2型糖尿病胰岛素抵抗模型大鼠,通过数学模型计算出葡萄糖输注速率(GIR)。[结果]三组人参皂甙组GIR均较高脂组不同程度的提高,人参皂甙Re组的GIR和正常组、高脂组有显著性差异。以Wstern Blot方法测定肝脏组织中PI3K的含量,Rg1组的蛋白表达要比Rb1组、Re组、高脂组、对照组和正常组有显著性差异。[结论]人参皂甙在肝脏中有显著的促进PI3K磷酸化的作用。

高胰岛素正糖钳夹应用对人参皂苷调控2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠中PI3K的作用

运用高胰岛素正糖钳夹技术(Hyperinsulinemic Euglycemic Clamp,简称钳夹术)检测2型糖尿病胰岛素抵抗模型大鼠,通过数学模型计算出葡萄糖输注速率(Glucose infusion rate,GIR),3组人参皂苷组GIR均较高脂组不同程度的提高,人参皂苷Re组的GIR和正常组、高脂组有显著性差异,接近西药罗格列酮的GIR,但尚未达到正常组的水平。Re:33.05±2.75;Rb:31.14±7.02;Rg:31.08±6.83;高脂组:25.21±1.46;P<0.05,有显著性差异。取大鼠肝脏组织,抽提蛋白,以Western Blot、PCR方法测定肝脏组织中PI3K的含量,Rg1组的蛋白表达要比Rb1组、Re组、高脂组、对照组和正常组有显著性差异,P<0.05,Rb1组、Re组与对照组的蛋白表达相近,但高于高脂组,接近正常组的蛋白表达。正常血糖高胰岛素钳夹技术是在动物清醒状态时,机体对高胰岛素刺激所产生的应激反应,能更准确地反应机体整体对胰岛素敏感的作用,给药组由于增强了胰岛素的敏感性,减少了胰岛素的抵抗,3组人参皂苷组GIR均较高脂组不同程度的提高,人参皂苷Re能促进肝释放葡萄糖的能力及促进周围组织利用葡萄糖的能力增强,能促进胰岛素首先与靶细胞表面的胰岛素受体(IR)结合,激活受体β亚单位(IRβ)的酪氨酸激酶,Rg在肝脏组织中有显著的促进磷酯酰肌醇3酶(PI3K)磷酸化的作用。

清醒状态下大鼠尾动静脉插管高胰岛素-正糖钳夹实验

目的利用尾动静脉插管技术实施清醒状态下大鼠高胰岛素-正糖钳夹实验并对该技术进行评价。方法正常喂养和高脂喂养W istar大鼠各5只,喂养4周后,清醒状态下鼠尾根局部麻醉,分别行尾动静脉插管,由尾静脉输入胰岛素(0.25 U.kg-1.h-1)和葡萄糖,同时尾动脉采血,进行高胰岛素-正糖钳夹实验。结果尾动静脉插管术后大鼠血糖在正常范围内,术后血糖无明显波动,无大鼠死亡;高脂喂养组大鼠的葡萄糖输注率显著低于对照组(P<0.01);血糖变异系数和葡萄糖输入速率变异系数分别为5.361%和14.273%。结论运用尾动静脉插管术进行清醒状态下大鼠的高胰岛素-正糖钳夹实验,安全可行且实验结果稳定、准确,具有操作简便、缩短实验周期等优点。

大鼠高胰岛素-正血糖钳夹实验方法的比较

目的对大鼠在非麻醉状态下,双尾静脉穿刺高胰岛素-正血糖钳夹实验与局麻下尾动静脉插管高胰岛素-正血糖钳夹实验、麻醉状态下颈动静脉插管高胰岛素-正血糖钳夹实验及清醒状态下颈动静脉插管高胰岛素-正血糖钳夹实验进行比较。方法普通饲料和高脂高糖饲料喂养SD大鼠各20只,喂养8 w后,各分为4组,每组5只,其余4只作为备用鼠,分别进行4种不同的高胰岛素-正血糖钳夹实验。结果大鼠在非麻醉状态下双尾静脉穿刺术后血糖在正常范围内,且无明显波动,无大鼠死亡,试验需时最短,操作最简单,成功率最高;颈动静脉插管实验方法死亡率最高,成功率最低,操作需时最长;麻醉状态下颈动静脉插管试验方法与其他三种方法实验结果差异有统计学意义(P<0.01),其他三种方法实验结果之间差异无统计学意义(P>0.05);高脂高糖饲料喂养组大鼠的葡萄糖输注率显著低于正常饲料组(P<0.01)。结论在非麻醉状态下采用双尾静脉穿刺术行大鼠的高胰岛素-正糖钳夹实验,安全可行且实验结果稳定、准确,具有操作简便、实验周期短、术后大鼠恢复快、可多次重复进行等优点;麻醉状态下颈动静脉插管高胰岛素-正血糖钳夹实验结果不准确;大鼠饲喂高脂高糖饲料可诱发明显的胰岛素抵抗。

高脂高糖喂养诱导妊娠期胰岛素抵抗大鼠模型的建立与评价

目的用高胰岛素-正糖钳夹试验评价高脂高糖诱导的妊娠期胰岛素抵抗大鼠模型建立。方法选取雌性SD大鼠40只,分为高脂高糖饮食-孕鼠组、高脂高糖饮食-非孕鼠组、普通饮食-孕鼠组、普通饮食-未孕组,每组10只。喂养42 d后孕鼠组与雄性大鼠2∶1合笼相应受孕,次日清晨做雌鼠阴道分泌物涂片,显微镜下观察到精子(+)定为妊娠第1天,各组继续给予高脂高糖或普通饲料,于妊娠第20天禁食12 h后分别行高胰岛素-正糖钳夹试验。结果高脂高糖饮食良-孕鼠组大鼠葡萄糖输注率(2.9±0.7)mg/(kg·min)明显低于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05);空腹胰岛素(23.1±0.53)pmol/L明显高于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论使用高脂高糖饮食诱导可成功建立妊娠期胰岛素抵抗的大鼠模型。

糖脂平对胰岛素抵抗大鼠影响的研究

[目的]研究糖脂平对胰岛素抵抗大鼠的影响。[方法]SD大鼠40只,随机取10只为对照组,30只为高脂组（分为糖脂平组、罗格列酮组、模型组）。对照组给予普通饮食,高脂组给予高脂饲料喂养,8周后进行高胰岛素-正糖钳夹实验,通过葡萄糖灌流速度M值来评价糖脂平对IR的影响,并测量收缩压、血脂、空腹血糖、体重。[结果]糖脂平组的葡萄糖灌流速度较模型组显著降低（P〈0.05）,并与罗格列酮组、对照组相比无显著差异（P〉0.05）。[结论]糖脂平胶囊可降低胰岛素抵抗。

小鼠葡萄糖钳夹技术方法的建立与操作

葡萄糖代谢是机体能量代谢的核心,在各个组织器官发挥能量供应及代谢调控作用,胰岛素是机体内唯一的降糖激素。胰岛功能及胰岛素敏感性是影响葡萄糖代谢的关键环节。葡萄糖钳夹技术是评估胰岛素敏感性及胰岛功能的金标准,主要类别包括高胰岛素正糖钳夹、高糖钳夹、高胰岛素低糖钳夹等类型。在小鼠葡萄糖钳夹实验中根据是否麻醉分为麻醉和清醒状态钳夹。本文重点阐述了小鼠葡萄糖钳夹技术方法的建立及操作的具体流程,包括器械耗材的准备、手术操作、钳夹过程及注意事项,旨在为实验室搭建各类小鼠葡萄糖钳夹技术平台提供参考。

不同睾酮水平的多囊卵巢综合征患者胰岛素敏感性和β细胞功能特点研究

目的评估不同睾酮水平的多囊卵巢综合征(PCOS)患者胰岛素敏感性和β细胞功能,为血糖正常的PCOS患者早期代谢干预提供依据。方法选取2005年2月—2007年9月在本院妇产科就诊的78例血糖正常的PCOS患者(PCOS组)及20例体质量正常的健康非孕成年女性(对照组)按年龄匹配,测定其血睾酮水平。根据对照组血睾酮水平,将PCOS组患者分为PCOS正常雄激素组和PCOS高雄激素组。所有受试者行口服葡萄糖耐量试验(OG-TT)、Botnia高胰岛素-正糖钳夹术,利用胰岛素敏感指数(M)及β细胞指数(DI指数)分别评估胰岛素敏感性和β细胞功能。组间比较采用方差分析及SNK法。结果 3组受试者的年龄、体质指数(BMI)、空腹血糖(FPG)水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);而3组的餐后血糖(PPG)、睾酮、M值、DI指数比较,差异均有统计学意义(P<0.01);其中对照组、PCOS高雄激素组、PCOS正常雄激素组PPG水平依次升高,对照组、PCOS正常雄激素组及高雄激素组睾酮水平依次升高,组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.01);PCOS正常雄激素组及高雄激素组患者M值及DI指数低于对照组,组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论血糖正常且血睾酮水平未显著升高的PCOS患者已存在胰岛素敏感性和β细胞功能受损,应及早予以干预。

局部制动对老年大鼠胰岛素敏感性的影响

目的了解肢体制动对老年大鼠胰岛素敏感性的影响。方法将老年Wistar大鼠随机分为对照组和制动组。制动组大鼠右后肢石膏固定,对照组不做特殊处理。3w后将两组大鼠行高胰岛素-正常葡萄糖钳夹技术,术后分离大鼠右比目鱼肌测量重量、肌细胞直径及肌纤维截面积。结果制动组稳态葡萄糖输入速率、右侧比目鱼肌湿重、肌细胞直径、肌纤维截面积均明显低于对照组。结论局部制动可导致老年大鼠骨骼肌萎缩,并使机体对胰岛素的敏感性降低。

局部制动对大鼠胰岛素敏感性影响的研究

目的:了解肢体制动对大鼠胰岛素敏感性的影响.方法:将SD大鼠随机分为对照组、制动组,每组20只.制动组大鼠右后肢石膏固定,对照组不做特殊处理.3wk后将两组大鼠行高胰岛素—正常葡萄糖钳夹技术,术后分离大鼠右比目鱼肌测量质量、肌细胞直径及肌纤维截面积.结果:制动组稳态葡萄糖输入速率[(35±5)mg(/kg·h)vs(13±4)mg/(kg.h)]、右侧比目鱼肌湿质量[(169.2±4.1)gvs(67.1±6.3)g]、肌细胞直径[(49.8±2.7)μmvs(20.6±3.2)μm]、肌纤维截面积[(998±21)μm2vs(579±14)μm2]均明显低于对照组.结论:局部制动可导致大鼠骨骼肌萎缩,并使机体对胰岛素的敏感性降低.

健脾清化方对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响

目的:研究健脾清化方对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛素抵抗(IR)的影响。方法:采用高脂饮食联合链脲佐菌素(STZ)建立稳定的2型糖尿病大鼠模型,随机分为正常组、模型组、健脾清化方组、吡格列酮组,连续灌胃给药6周,采用高胰岛素-正糖钳夹试验(HEC)、腹腔注射葡萄糖耐量试验(IPGTT)和胰岛素耐量试验(IPITT)综合评价胰岛素抵抗水平。结果:与模型组比较,健脾清化方组IPGTT中60、120min血糖显著下降(P<0.01),药时曲线下面积(AUC)降低(P<0.01),IPITT中各点血糖下降(P<0.01),降糖率显著升高(P<0.01),AUC显著降低(P<0.01);在HEC中葡萄糖输注速率(GIR)显著升高(P<0.01)。结论:健脾清化方可显著改善T2DM大鼠IR,并能降低空腹血糖,提高降糖率,改善糖耐量与胰岛素耐量。

2型糖尿病患者一级亲属胰岛素抵抗与体重关系的研究

目的探讨2型糖尿病一级亲属胰岛素抵抗与体重的关系。方法2007年10月至2008年10月就诊于中国医科大学附属盛京医院的沈阳地区2型糖尿病患者,经知情同意后,选择其一级亲属(父母、同胞、子女)25例,根据75gOGTT试验分为正常糖耐量(FNGT)组、糖耐量减低(FIGT)组,另外选取性别、年龄与之相匹配,无糖尿病家族史的正常糖耐量12名为对照(NC)组,以正糖高胰岛素钳夹试验求得葡萄糖输注速率(GIR),比较3组间胰岛素敏感性的差异。结果FIGT组、FNGT组、NC组BMI依次为27.28±0.68、25.99±0.98和24.12±0.71,FIGT组明显高于NC组(P<0.01),与FNGT组相比差异无统计学意义(P=0.11);FIGT组和FNGT组葡萄糖输注率分别为5.20±0.38和6.38±0.79,均明显低于NC组(9.83±0.86)(P<0.01);葡萄糖输注率与BMI的相关系数为0.477(P<0.01);多元逐步回归分析显示,BMI、糖尿病家族史均为影响胰岛素抵抗的显著因素(校正r2分别为0.39和0.21,P<0.01)。结论2型糖尿病一级亲属不论血糖是否正常均存在胰岛素抵抗,此抵抗和家族史显著相关,独立于肥胖之外。