高致病力禽流感流行新特点及预防控制对策

AI是一种全球性的禽类疾病 ,被国际兽疫局 (OIE)列为A类烈性传染病 ,至今许多国家都暴发过。高致病性禽流感的暴发和流行给养禽业带来了毁灭性的打击。目前此病已严重地威胁到了人类 ,而对于AI现在仍没有较好的特异性治疗方法。

我国流行的非洲猪瘟病毒:高致病力,强传播能力

非洲猪瘟(African Swine Fever,ASF)是一种急性、烈性、病毒性传染病,主要感染家猪和野猪,其发病率和死亡率极高,接近100%,被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的动物疫病,被我国列为一类动物疫病。当前该病缺乏有效的防控用疫苗及药物,主要通过捕杀发病动物及严格的生物安全措施来控制。该病病原是非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus,ASFV),属于非洲猪瘟病毒科(Asfarviridae)非洲猪瘟病毒属(Asfivirus)唯一成员,其基因组长约170 kb^193 kb,为双链DNA,编码151~167个病毒蛋白。

高致病力禽流感H5N1亚型病毒逃避宿主细胞免疫应答的机制

禽流感H5N1亚型病毒于1997年在对人的传染中表现出高致病力,但是人类对其在人群中的致病机制所知甚少。我们看到的这个高致病力的H5N1亚型禽流行性感冒病毒,不象其他的人、禽和猪的流行性感冒病毒,它对干扰素的抗病毒效果和肿瘤坏死因子a的杀病毒效果都有抵抗力。这种抵抗力与禽流行性感冒H5N1亚型病毒的非结构基因有关,当猪感染带有这种H5N1NS基因的重组型人流行性H1N1亚型病毒后,所产生的病毒血症、发烧和体重下降比感染野生型人流行性H1N1亚型病毒更明显,时间更长。当禽流行性感冒H5N1亚型病毒的非结构基因的第92位存在有谷氨酸时就会出现这样结果。这些研究结果可解释禽流行性感冒H5N1亚型病毒对人表现高度致病力的机制。

撒坝猪源E.coli高致病性毒力岛通过NLRP3/ASC/Caspase-1途径诱导IPEC-J2细胞焦亡

旨在研究撒坝猪源E.coli高致病性毒力岛(highly pathogenic virulence island,HPI)诱导IPEC-J2细胞焦亡的机制,本研究以LPS+ATP为阳性对照,将实验室前期筛选的E.coli HPI及通过CRISPR/Cas9基因敲除技术构建完成的E.coliΔHPI感染IPEC-J2细胞,观察细胞损伤情况;RT-qPCR测定各组作用0.5、3、6、9、12 h后细胞内焦亡通路中关键因子NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、胱天蛋白酶-1(caspase-1)、消皮素D(gasderminD,GSDMD)及炎性因子白介素-18(IL-18)、白介素-1β(IL-1β)的mRNA转录水平;激光共聚焦观察NLRP3/Caspase-1炎性复合体组装及表达情况;Western blot测定GSDMD及其活化形式GSDMD-N蛋白表达水平,PI染色检测胞膜完整性。结果表明:LPS+ATP处理显著促进细胞焦亡的发生,阴性对照组细胞正常生长、轮廓清晰,E.coli感染组及LPS+ATP组细胞出现变形、脱落、边界模糊等明显细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),且HE染色显示,E.coliHPI感染相较于E.coliΔHPI感染对细胞的损伤更严重;E.coli HPI组中的焦亡通路关键因子及炎性因子mRNA水平在3~9 h均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于E.coliΔHPI组;NLRP3/Caspase-1炎性复合体在细胞质中发生组装,且E.coli HPI组NLRP3/Caspase-1蛋白荧光强度、GSDMD、GSDMD-N蛋白表达水平及PI染色阳性率均极显著(P<0.01)高于E.coliΔHPI组;E.coli HPI组的CPE、HE染色、焦亡通路关键因子及炎性因子mRNA水平、GSDMD及GSDMD-N蛋白表达量、NLRP3/Caspase-1共定位情况均与LPS+ATP组相似。结果提示,撒坝猪源E.coliHPI通过上调NLRP3/ASC/Caspase-1信号通路中关键因子mRNA水平,诱导NLRP3/Caspase-1炎性复合体的组装,促进焦亡标志蛋白GSDMD及GSDMD-N的表达,并对IPEC-J2细胞膜进行打孔,从而诱导细胞发生焦亡。

高致病性毒力岛Irp1介导的细菌对Vero细胞黏附作用

高致病性毒力岛(HPI)已经在多种类型大肠杆菌中被发现。为了解HPI-Irp1在细菌致病中的作用,通过生物软件DNAStar的分析,筛选出HPI中irp1和fyuA基因上10个表位作用优势较强的区域。设计特异性引物10对,进行PCR扩增,将获得的PCR产物,插入原核表达载体pET32a,构建重组质粒;将获得的重组质粒转化进入菌毛阴性宿主菌BL21,获得的重组菌用IPTG诱导表达后与Vero细胞混合进行体外作用。结果表明:带有irp1-1基因片段的重组菌BL21-rpET32a-irp1-1表现出对Vero细胞较强的聚集黏附作用,空载体对照和宿主菌对照均未出现相关现象。因而推测irp1-1基因片段编码的产物在细菌对宿主致病过程中,介导了细菌与宿主细胞的相互作用。

致病性大肠埃希菌高致病性毒力岛irp2基因序列的扩增与分析

目的探讨致病性大肠埃希菌(EPEC)中高致病性毒力岛(HPI)irp2基因与致病性的关系。方法根据Genebank中irp2基因设计特异性引物,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增基因全长,克隆入pUCm-T载体,并通过酶切和测序鉴定。结果160株EPEC中有16株(10.00%)扩增出278bp基因片段,该基因片段与GeneBank中公布的耶尔森菌HPIirp2基因的同源性高达97%以上。结论部分EPEC具有耶尔森菌毒力岛HPI基因序列,该毒力岛可能与EPEC的致病性有一定相关性。

高致病性猪蓝耳病流行特点与综合防控策略研究

猪蓝耳病又称猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪的一种高度接触性传染病,不同年龄,品种和性别的猪均能感染,但以妊娠母猪和1月龄以内的仔猪最易感;该病以母猪流产,死胎,弱胎,木乃伊胎以及仔猪呼吸困难,败血症,高死亡率等为主要特征。在我国生猪养殖规模化和集约化发展的同时,猪瘟的流行形势也日趋严峻,多种细菌、病毒、寄生虫等都能导致猪瘟等疾病的流行,有的大型猪瘟还会导致生猪大量死亡。其中,高致病性蓝耳病(PRRS)所导致的高致死率、高患病率已成为制约国内养猪业发展的主要原因。

猕猴源大肠杆菌药敏试验与高致病性毒力岛基因的检测

为探究腹泻猕猴粪便中分离出的大肠杆菌(E.coli)是否携带高致病性毒力岛(HPI)相关基因,并分析其耐药性和致病性,本试验采集23只腹泻猕猴的粪便,用麦康凯培养基、LB琼脂和生化鉴定管对E.coli进行分离鉴定,通过PCR试验、纸片扩散法和动物回归试验,研究分离菌株的HPI基因携带情况、耐药性、致病性,并且进行全基因组测序验证。结果显示,23份样品中均分离出E.coli,分离率为100%;分离出的E.coli中HPI标志基因irp 2携带率高达47.83%,其余基因irp 1、irp 3、irp 4、irp 5、irp 6、irp 7、irp 8、irp 9、fyuA、intB和ybtA携带率分别为65.22%、34.78%、47.83%、69.57%、56.62%、43.48%、39.13%、43.48%、34.78%、65.22%和26.09%;在分离出的23株E.coli菌株中携带HPI全岛基因的有5株,占21.74%,这5株E.coli HPI阳性菌株(HPI+)对阿米卡星、环丙沙星、头孢哌酮、头孢噻肟、苯唑西林、四环素、头孢唑林、头孢曲松的耐药性都极高,对氯霉素较敏感;接种E.coli HPI+菌株后8 h小鼠死亡率为100%,接种E.coli HPI-菌株后12 h小鼠死亡率为25%;用2株E.coli HPI+全基因检测的结果构建了2个基因组圈图,其中1株(H-7)预测到5300个编码基因,其总长4728917 bp;另1株(H-23)预测到5460个编码基因,其总长4811637 bp。结果表明,猕猴腹泻源致病性E.coli HPI基因携带率较高、耐药性普遍存在,同时致病性E.coli HPI+可提高小鼠死亡率,本试验通过COG、GO、KEGG获得大量的基因功能注释结果,从基因组水平加深了对E.coli HPI+的认识。

撒坝猪源大肠杆菌高致病性毒力岛诱导病理损伤的超微结构特征

为探究撒坝猪源大肠杆菌(E.coli)高致病性毒力岛(HPI)诱导小鼠病理损伤的超微结构特征,本研究将实验室保存的E.coli HPI阳性株(HPI^(+))和E.coli HPI基因缺失株(ΔHPI)进行复苏和培养,分别用E.coli HPI^(+)、E.coli^(Δ)HPI菌株以腹腔接种的方式感染昆明小鼠,检测菌株的半数致死量(50%lethal dose,LD50),通过HE染色和透射电镜观察并分析菌株对小鼠病理损伤的超微结构特征,利用免疫组织化学标记白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)阳性细胞在被感染小鼠肝脏和肾脏组织中的分布,以反映E.coli HPI+及E.coliΔHPI菌株所引起炎症水平的差异。结果显示,E.coli HPI^(+)和E.coli^(Δ)HPI菌株的半数致死量分别为1×10^(7.39)和1×10^(8.62)CFU/mL;HE染色显示,E.coli感染小鼠后,可见肝脏细胞肿胀、变性,肝窦淤血,肾脏间质淤血,肾小管上皮细胞变性脱落等病理变化;超微结构变化显示,肝脏细胞的完整形态消失,胞核呈不规则形态,线粒体畸形,粗面内质网上核糖体脱落,滑面内质网增生;多数肾小管上皮细胞出现胞核固缩,部分细胞核核仁边移、体积增大,足突融合,系膜细胞间隙变宽。此外,E.coli HPI^(+)感染组小鼠于肝脏、肾脏的水肿现象较E.coli^(Δ)HPI菌株感染的小鼠更为明显。免疫组化结果显示,大肠杆菌感染小鼠后,IL-1β蛋白主要表达于肝细胞、中央静脉周围、肾间质细胞和肾小管上皮细胞,且E.coli HPI^(+)感染组的IL-1β表达量高于E.coli^(Δ)HPI感染组。综上所述,撒坝猪源E.coli HPI能够调控E.coli对小鼠的致病性,HPI的调控作用可使E.coli对小鼠肝脏、肾脏造成的病变及超微结构变化更明显,并且能够增加小鼠的炎症反应。

突发高致病性禽流感应急实施方案

高致病性禽流感是由A型禽流感病毒的高致病力亚型毒株引起的一种急性、高度传染性疾病.禽流感病毒极易发生变异,可能造成病毒在人群中感染和传播.为做好应对秋冬季可能突发的高致病性禽流感疫情,把高致病性禽流感可能带来的影响和损失降到最低限度,根据<国家突发重大动物疫情应急预案>和<全国高致病性禽流感应急预案>规定,农业部特制定本实施方案.