高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征弱毒疫苗在规模化猪场中的临床应用与分析

疫苗的免疫程序对疾病的防控效果有较大影响,本临床试验通过科学调整高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征弱毒疫苗(TJM-F92株)在某规模化猪场中的免疫方案,使得猪的育肥期成活率有显著提高,免疫的安全性也得到提升,猪群健康度明显好转,对此笔者进行了总结和分析,以期对广大养殖户有借鉴和参考意义。

HuN4-F112株高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗免疫后病毒血症和抗体消长规律的试验报告

应用高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗（HuN4-F112株）对28—30日龄的仔猪进行免疫，并定期采样检测，研究免疫后病毒血症持续时间和抗体消长规律，结果表明，病毒血症在免疫后第1周即可出现，最长可持续至免疫后第6周；疫苗免疫后，母源抗体明显下降，免疫后第3周平均阻断率最低为18％，此后开始上升，至免疫后第7周平均阻断率达到最高值85％，随后开始缓慢下降，至免疫后第16周时为54％。研究表明，HuN4-F112株高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫后病毒血症持续时间最长为6周，抗体水平在免疫后第7周时达到最高。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒活疫苗安全试验

2010年青海省高致病性猪繁殖与呼吸综合征防治，改用弱毒活疫苗进行免疫预防，因弱毒活疫苗在青海省第一次使用，为确保免疫预防工作的顺利进行，掌握疫苗安全性，在全省进行大面积使用前，确定湟源县和平安县做高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒活疫苗试点工作，并在平安县做高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗小区试验。现就疫苗的免疫安全试验总结如下：

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株及其致弱过程中的不同代次病毒的分子特征分析

为了追踪高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syn-drome virus,HP-PRRSV)毒力逐渐减弱的分子轨迹,我们以HP-PRRSV亲本毒HuN4株及其系列传代致弱毒株为研究对象,对HuN4株及其不同代次毒株其全基因序列进行了序列比较分析。结果显示由高致病性的亲本毒HuN4株到无致病性的F112代的疫苗毒,共有65个核苷酸发生突变,其中导致41个氨基酸发生突变,这些突变的氨基酸分散性的存在于不同基因区域。与已经报道的高致病性JXA1株及其致弱毒株JXA80株相比较,可以看到两个强毒株毒力致弱的演变轨迹并不完全相同,二者之间不仅氨基酸突变数量不一致,而且突变氨基酸的位置也不完全相同,但其共同特点是由强毒株到弱毒株的变化过程中,突变率较高的结构蛋白相一致,突变率较高的非结构蛋白基本一致。分析结果提示我们决定高HP-PRRSV毒力强弱的因素可能不是由单个氨基酸的突变来决定的,推测是由一个基因或多个基因或多种因素共同造成的,同时也使我们认识到PRRSV的非结构蛋白区在病毒毒力变化中可能发挥重要作用。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征GD强弱毒株感染对猪外周血淋巴细胞亚群的影响

为了从细胞水平探讨PRRSV GD强毒株和PRRSV弱毒疫苗接种仔猪后对其外周血淋巴细胞亚群的影响,运用血常规技术和流式细胞技术分析了猪体外周血淋巴细胞亚群的动态变化。将30日龄20头SPF猪分成3组,分别感染HP-PRRSV GD第5代强毒株、GDr180弱毒疫苗株及留作对照。于感染后第0、3、7、10、14、21、28及35天采血进行外周血淋巴细胞亚群测定,分析淋巴细胞亚群的变化。结果表明:HP-PRRSV GD强毒株感染可导致白细胞、淋巴细胞数量、单核细胞、粒细胞、B细胞、Tc细胞、Th细胞、Tm细胞、和γδT细胞数量的下降;而弱毒疫苗GDr180株免疫则表现为白细胞、淋巴细胞、单核细胞、引起粒细胞、B细胞、Tc细胞、Th细胞和Tm细胞的上升,对γδT细胞的影响不大;阴性对照组在整个检测期间各种细胞基本上保持稳定状态。从实验结果可以看出:与HP-PRRSV GD强毒株破坏免疫细胞不同,PRRSV弱毒疫苗GDr180株免疫接种能刺激猪免疫细胞增殖,给试验猪提供良好的免疫反应。

建立快速区分猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株、高致病性毒株、天津疫苗株RT-PCR方法的研究

为了快速区分猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）经典毒株、高致病性毒株和天津疫苗株,试验通过建立的RT-PCR方法获得电泳条带大小不同的PCR产物,以此区分猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株、高致病性毒株和天津疫苗株,并用RT-PCR方法检测实验室保存的12份临床阳性样品。结果表明：可以通过RT-PCR方法区分经典毒株、高致病性毒株、天津疫苗株,并且与猪瘟病毒、猪圆环病毒2型等猪常见病毒无交叉反应;临床样品检测试验显示,1份为经典毒株、5份为高致病性毒株、5份为天津疫苗株,与测序结果相符。说明试验成功建立了同时区分猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株、高致病性毒株和天津疫苗株的RT-PCR方法,且特异性强、灵敏度较高、重复性好、操作简单。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(TJM-F92株)安全性和免疫保护效果研究

为进一步研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征（HP-PRRS）活疫苗（TJM-F92株）的安全性和免疫保护效果，本研究将HP-PRRS弱毒株TJM-F92与耐热保护剂混合制备疫苗，将该疫苗以每头猪2mL（10^6.4TCID50／mL）的剂量接种4周龄～5周龄仔猪进行安全性试验；并以每头猪1mL（10^5.0TCID50/mL）的剂量免疫仔猪28d后，利用同源强毒株（TJ株）攻毒进行保护效力检测。此外，分别采用10^3.5TCID50mL、10^4.0TCID50/mL、10^4.5TCID50/mL和10^5.0TCID50/mL的剂量，每头猪接种1mL，通过攻毒试验确定疫苗最小免疫剂量。结果表明：疫苗接种后，试验猪无不良反应，免疫组攻毒保护率为80％～100％，每头份疫苗病毒含量为10^4.5TCID50时对强毒攻击的保护率可达100％。本研究表明，该疫苗对猪安全，免疫保护效果良好，对HP-PRRS的防控将起到较大的推动作用。

猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗研究进展

经典的猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是一种主要表现为母猪繁殖障碍与新生仔猪呼吸道症状的传染病。近年来,国内新暴发和流行的高致病性PRRS,则以高热、高发病率和高死亡率为特征，给国内养猪业带来巨大的经济损失。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株致弱毒株特异性抗原表位的鉴定

通过对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株亲本毒及其不同代次传代毒株Nsp2蛋白氨基酸序列比较分析，发现不同代次的Nsp2蛋白存在4处氨基酸点突变，针对每个突变点分别人工合成编码短肽的核苷酸序列，经原核表达后进行Westernblot分析。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒ORF1a、ORF1b、ORF2-ORF7片段互换嵌合病毒的构建及其生物学特性的分析

本实验分别以HP-PRRSV强毒HuN—F5株及其传代致弱的疫苗病毒株HuN4-F112为亲本病毒，利用反向遗传操作技术分别将ORF1a、ORF1b或ORF2-7编码序列在强弱毒之间互换。将6种舍有不同嵌合基因的全长病毒基因组的重组质粒体外转录后转染BHK-21细胞，然后在Marc-145细胞中传代，拯救的重组病毒经RT-PCR、测序和免疫荧光鉴定，并分别命名为rHuN4-F5-ORFlaxrHuN4-F5-ORFlb、rHuN4-F5-ORF2-7（以强毒为骨架）和rHuN4-F112-ORF1a、rHuN4-F112-ORF1b、rHuN4-F112-ORF2—7（以弱毒为骨架）。进-步测定这些病毒在Marc-145-k．的生长曲线．

猪繁殖与呼吸综合征病毒嵌合感染性克隆的构建和应用

高致病性猪蓝耳病近年来在我国广泛流行,目前尚无高效疫苗用于该病的防制。本研究以PRRSV弱毒感染性克隆-pAPRRS作为主要骨架,将高致病性猪蓝耳病病毒江西分离株(JX143)的主要结构蛋白基因(ORF4-7)以及3′UTR区域替换入pAPPRS相应编码区域,构建了pSX12(ORF4-7-3′UTR)、p5NX12(ORF5-7-3′UTR)以及p56N12(ORF5-6)三个PRRSV全长嵌合克隆。经DNA转染Marc-145细胞后拯救出嵌合病毒,并对拯救病毒进行了病毒生物学特性的分析;选取拯救病毒v56N12(ORF5-6)和vSX12(ORF4-7-3′UTR)免疫29日龄猪进行免疫原性试验,结果表明,以v56N12免疫后抗体水平相对较低,故免疫原性相对较差;而vSX12病毒免疫后14d血清ELISA抗体达到阳性值(IDEXXELISA值s/p≥0.4),免疫后28d中和抗体效价从原来的1:5以下上升到1:15以上,说明vSX12具有良好的免疫原性并可进行免疫监测;免疫后28d以强毒JX143株攻毒,结果vSX12免疫组未见发病,而未免疫攻毒对照组全部发病并有1头死亡,vSX12免疫猪攻毒后病毒血症持续6d后消失,而对照组攻毒后至少持续13d,说明vSX12可对高致病性猪蓝耳病提供有效的免疫保护。本研究构建的三个嵌合病毒为开发同时抗经典和变异株PRRSV感染的二价疫苗,以及探寻高致病性猪蓝耳病病毒的毒力因子奠定了基础。

基因缺失高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗与猪瘟兔化弱毒疫苗在实验室和田间猪场的联合免疫试验

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）又称猪蓝耳病,是全球养猪业的头号猪病,给世界养猪业造成巨大的经济损失,美国在2005年的统计显示由PRRS引起的损失为5.6亿美元[1]。同样,蓝耳病也给我国养猪业带来严重危害,尤其是2006年发生的高致病性蓝耳病[2],更是让中国养猪业雪上加霜。

高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗与灭活苗免疫效果评估

高致病性猪蓝耳病又称“猪繁殖与呼吸综合症（PRRS）”，是在编码Nsp2的基因上发生缺失变异毒株引起的一种猪只死亡率高、造成损失巨大的烈性传染病。该病病毒致病性强，传播迅速，可以致使猪大批死亡，尤其以仔猪最为明显。为进一步做好高致病性猪蓝耳病防控工作，科学制定免疫程序，避免该病的发生和蔓延，笔者在某大型养猪企业饲养的35日龄的仔猪中进行了高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗与灭活苗免疫效果对比实验，并根据农业部规定的《2014年高致病性猪蓝耳病监测方案》中制定的标准对使用不同疫苗的仔猪抗体水平进行跟踪监测，摸清两种不同疫苗抗体产生的规律，分析制约免疫抗体水平的主要原因，为合理选择疫苗类型和制定免疫方式及免疫时间等提供科学依据。

高致病性猪蓝耳病的防控离不开弱毒疫苗免疫

2006～2007年我国发生高致病性猪繁殖与呼吸综合征(简称蓝耳病)以来,养猪界对该病危害的认识迅速普及,但对于如何实施有效防控措施,特别是对蓝耳病弱毒疫苗防控效果及是否应该使用方面专家们众说纷纭,让养猪业人士无所适从。本文根据我们所掌握的国内外对高致病性猪蓝耳病防控技术的一些研究资料,介绍了养猪业发达国家对PRRS的控制办法,并对这些措施是否适合我国国情进行分析;阐述了蓝耳病疫苗免疫效果和不实行免疫的危害;探讨了蓝耳病弱毒疫苗发生副反应的原因和人们所担心的病毒重组与变异问题;列举了猪场如何正确使用蓝耳病疫苗以达到最佳免疫效果的措施和注意事项,希望对猪场高致病性蓝耳病的防控有所帮助。

巴马香猪超前免疫高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗的免疫效果评价

为了评价高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗(JXA1-R)对仔猪超前免疫的免疫效果及安全性,给3头巴马香猪超前免疫弱毒疫苗JXA1-R 1头份/头,以3头同窝仔猪为对照组,接种等量疫苗稀释液,观察疫苗免疫后的临床表现,测定疫苗免疫后的抗体动态变化及排毒情况;免疫后第35天,采用高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(JXA1)攻毒,测定攻毒后的抗体变化、排毒情况及免疫保护作用。结果表明,巴马香猪超前免疫后第14天发生抗体阳转,鼻拭子样品、肛门拭子样品和血清样品中均检测到病毒核酸,同居的阴性对照组中有1头仔猪发生抗体阳转,提示该疫苗存在排毒现象。攻毒前免疫组和对照组的抗体阳性率分别为3/3和1/3;攻毒后免疫组和对照组的免疫保护率分别为3/3和1/3,表明该疫苗具有一定的免疫保护作用,但初生巴马香猪超前免疫后表现生长缓慢,被毛粗乱,提示该疫苗对仔猪具有一定的毒力,不适合用作超前免疫。

高致病性猪蓝耳病弱毒苗与灭活苗评估

高致病性猪蓝耳病又称“猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）”，是在编码Nsp2的基因上发生缺失变异毒株引起的一种猪只死亡率特别高、造成损失巨大的烈性传染病。该病病毒具有致病性强、传播迅速等特点，可以致使猪大批死亡，尤其以仔猪最为明显。

暴发蓝耳病猪场紧急接种高致病蓝耳病弱毒疫苗的案例分析

蓝耳病阴性猪群发生高致病性蓝耳病感染后会导致严重的经济损失。在两个暴发蓝耳病的猪场中做了相关实验,结果表明,在暴发蓝耳病的猪场中紧急接种蓝耳病弱毒疫苗是有效的防控措施之一,同时,不同的弱毒疫苗毒株在紧急接种的效果上存在一定的差异性。高致病性猪蓝耳病（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）变异株引起的一种急性、高致死性的猪传染病,不同年龄、品种和性别的猪均能感染,妊娠母猪和1月龄以内的仔猪最易感，该病以母猪返情、流产，产木乃伊胎、死胎、弱胎，以及仔猪、肥猪的高烧、呼吸困难、败血症、高死亡率为主要特征，伴有神经症状，母猪流产率可达30％以上，仔猪发病率可达100％，死亡率40％～100％，育肥猪发病也可死亡。

首个可鉴别诊断高致病性PRRS野毒和疫苗株（TJM）的标准化一步法RT—PCR试剂盒研制成功

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS。俗称蓝耳病）是影响养殖业的首要传染病。为了在猪群中有效地区别接种疫苗和受野毒感染的猪。华威特生物科技有限公司于日前成功开发了“鉴别诊断高致病性PRRS野毒和疫苗株（TJM）RT-PCR一步法试剂盒”。应用本方法能快速确诊蓝耳病野毒感染。为蓝耳病疫情监测、优化防疫方案及蓝耳病毒的净化提供了关键技术手段。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗的研制

将高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒致弱株TJM株与耐热冻干保护剂混合制备弱毒活疫苗,并对该活疫苗进行安全性、免疫保护效果和保存期试验。结果显示,4～5周龄仔猪接种该疫苗后体温正常,无任何临床可见异常。该疫苗接种猪对强毒攻击的保护率达4/5以上;将其置于2～8℃保存24个月,病毒效价降低不超过100.5 TCID50/mL。表明该疫苗对猪安全,免疫保护效果良好,且便于保存。

高致病性蓝耳苗又添新毒株“GDr180”

近日，记者从农业部官方网站获悉，由中国兽医药品监察所、广东永顺生物制药股份有限公司和北京信得威特科技有限公司，共同研发的高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（GDr180株），已获得农业部颁发的三类新兽药注册证书。据悉，GDr180株蓝耳苗为冻干疫苗，10头份、20头份、50头份三种不同的包装，5月底产品投向市场。