经裸鼠体内多次传代所致的高致瘤HL-60细胞模型的建立及其细胞生物学特征

本研究探讨裸鼠体内多次传代的高致瘤性HL-60细胞的生物特性的变化,探索高致瘤性HL-60细胞致瘤率提高的机制。用裸鼠体内和体外传代方法建立高致瘤性白血病细胞系HL-60模型,并对其生物特性改变进行比较。用台盼蓝染色法检测HL-60细胞生长水平,流式细胞术分析细胞周期,电子显微镜观察HL-60细胞的超微结构和荧光水平。结果表明:细胞生长速度加快,细胞群体倍增时间缩短;S期细胞比率有上升的超势。细胞线粒体数目显著下降(p<0.01),且多数内室扩张,嵴数目减少,有的空泡化;细胞微丝荧光减弱,差异显著(p<0.01);克隆形成率有明显的增加。结论:裸鼠体内多次传代的HL-60细胞高致瘤性与致瘤细胞增殖能力增强,细胞中线粒体数目与结构的改变和细胞骨架微丝的变化有关。

黄芩苷对高致瘤HL-60细胞裸鼠移植瘤模型的体内抑瘤作用和机制探讨

本研究旨在探讨黄芩苷对高致瘤人白血病HL-60细胞裸鼠异种移植瘤的体内抑瘤作用及其作用机制。制备高致瘤HL-60细胞裸鼠异种移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为6组:阴性对照组(注射5%NaHCO3),黄芩苷25、50和100 mg/kg剂量组,联合用药组(黄芩苷50 mg/kg+VP16 2 mg/kg)和VP16 4 mg/kg阳性对照组,每组10只裸鼠。采用腹腔注射方式给药,14 d后每组处死5只裸鼠,对剥取的瘤块称重计算抑瘤率;通过电子显微镜观察瘤组织超微结构,病理组织学观察裸鼠各主要脏器结构改变,瘤块组织蛋白检测信号转导通路指标。观察裸鼠生存时间。结果表明,黄芩苷可抑制裸鼠HL-60细胞皮下移植瘤的生长,呈剂量依赖性。瘤组织病理组织学和透射电子显微镜检查结果显示,黄芩苷组和联合用药组的肿瘤坏死和细胞凋亡现象较阴性对照组多见。黄芩苷可能通过抑制Akt活性,下调p-Akt、mTOR和p-mTOR的表达来抑制裸鼠异种移植瘤的增长。联合用药组裸鼠中位生存时间明显长于阴性对照组(P<0.05)。结论:黄芩苷可抑制高致瘤HL-60细胞裸鼠异种移植瘤的生长,诱导瘤组织中HL-60细胞的凋亡,其机制之一可能与抑制Akt活性并下调PI3K/Akt/mTOR信号通路有关;黄芩苷与VP16联用可明显提高荷瘤裸鼠的中位生存期,具有协同抗高致瘤HL-60细胞裸鼠异种移植瘤的作用。

益气抗瘤分化剂对HL-60细胞的诱导分化的实验研究

益气抗瘤分化剂对ＨＬ－６０细胞的诱导分化的实验研究晏雪生张建军李瀚日文肖琳已有实验报道，一些单味中药对ＨＬ－６０细胞具有诱导分化作用［１］。我们观察了由黄芪、苦参等组成的益气抗瘤分化剂对ＨＬ－６０细胞的诱导作用。现将实验结果报道如下。１材料与方法１．...

515抗瘤方剂诱导白血病HL60细胞凋亡的研究

目的:观察中药515抗瘤方剂对白血病HL60细胞的影响。方法:采用光镜、透射电镜观察形态及结构,流式细胞术测量凋亡率,原位末端标记检测DNA断裂。结果:细胞与药物共同孵育一定时间后出现核固缩、核碎裂等典型的凋亡形态学变化,药物浓度在0013～004g/ml之间,药物组与对照组凋亡率有显著性差异(P<001)。结论:515抗瘤方剂能诱导HL60细胞发生凋亡,细胞凋亡率随时间延长增加,且呈现剂量依赖性。

雷公藤内酯醇体内外对HL-60细胞作用的研究

目的探讨雷公藤内酯醇(triptolide,TPL)在体内外对人髓系白血病细胞株HL-60的作用。方法运用MTT比色法检测TPL对HL-60细胞的增殖抑制作用,采用TdT酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测TPL对HL-60细胞的诱导凋亡作用;建立HL-60裸鼠异种移植瘤模型,观察经TPL治疗后的肿瘤抑制率。结果在体外,TPL对HL-60细胞的增殖具有明显的抑制及诱导凋亡作用,呈时间和剂量依赖性;在体内,TPL可抑制HL-60细胞裸鼠异种移植瘤生长,抑制率最高可达53.5%。结论TPL在体内外均可抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡。

Nispex体内外抑制白血病细胞HL-60的生长

背景与目的:植物多酚类成分不仅有防癌抗癌作用,也可增强放化疗的效果,还可以保护正常细胞免受放化疗的毒性。本研究探讨一种主要成分为多酚的寄主为夹竹桃的红花桑寄生提取物(简称Nispex)的体内外抗急性髓性白血病HL-60的效果。方法:采用MTT法研究Nispex的体外抑瘤作用;以对小鼠的近似LD50值评估Nispex的急性毒性;以HL-60细胞裸鼠移植瘤模型为对象,研究Nispex及其与多柔比星(阿霉素)联用的体内抑瘤效果。以相对瘤体积和瘤重来评价药物的体内抑瘤效果,以药物相互作用指数(CDI)来评价药物联合作用疗效。结果:Nispex显著抑制HL-60细胞的增殖,存在明显的量效关系和时效关系,24、48、72和96h的IC50值分别是0.75、0.70、0.54和0.48μg/ml。Nispex对小鼠的近似LD50值为126.81mg/kg。Nispex(ip)-剂量为30mg/kg时,肿瘤生长抑制率达60.6%;10mg/kg与多柔比星联用时,肿瘤生长抑制率达94.4%,CDI=0.21<0.7,均有统计学意义。结论:Nispex体内外有一定的抑瘤效果,与多柔比星联用的协同作用非常显著,可能是一种有潜力的抗肿瘤植物提取物。

猫儿眼植物酸对人HL-60细胞抑制作用的机制

目的:分离提取猫儿眼植物酸并探讨其对人HL-60细胞抑制作用机制。方法:实验于2003-07/2004-07在甘肃省医学科学研究院药理毒理学实验室完成。采用流式细胞仪、克隆形成和噻唑蓝(简称MTT)法对猫儿眼植物酸抗肿瘤细胞增殖作用进行分析。结果:分别给予人HL-60细胞猫儿眼植物酸0.1,1.0和10.0ng/L,MTT法测定,对人HL-60细胞增殖的抑制率分别为24.6%,69.6%,83.1%;克隆形成抑制率分别为29.3%,55.8%和71.4%;凋亡率分别为6.4%,8.8%和21.8%。结论:猫儿眼植物酸对人HL-60细胞增殖具有明显的抑制作用。

白英对人急性早幼粒白血病HL-60细胞生长的影响

为研究白英的体外抑瘤作用 ,观察白英水提液对人急性早幼粒白血病 HL -60细胞生长的影响 ,结果显示白英水提液对 HL -60细胞的作用 ,既表现为短时间作用后的细胞杀伤 ,也表现为药物持续作用后的增殖抑制 ,说明白英水提液具有较强的体外抑瘤活性 。

DADS对人白血病细胞和淋巴瘤细胞诱导凋亡作用比较研究

大蒜及其烯丙基硫化物的抗肿瘤作用正日益受到关注[1-2].我们的前期研究显示,DADS对人白血病HL60细胞具有双效作用,小剂量DADS（〈1.25mg·L^-1）诱导人白血病细胞分化,而中等剂量DADS（〉1.25mg·L^-1）可诱导人白血病细胞凋亡[3-4].我们的前期研究表明,Rac2与DADS诱导人白血病细胞凋亡相关[5],且DADS通过活性氧介导的JNK信号通路诱导HL-60细胞的凋亡,且NADPH氧化酶的活化是DADS诱导HL-60细胞凋亡过程ROS的主要来源[6-7].本研究在前期工作基础上.

榄香烯静脉输注浓缩液体外抗人体肿瘤细胞疗效实验研究

[目的]了解榄香烯静脉输注浓缩液的体外抑瘤效果。[方法]用CremophorEL作增溶剂配合丙二醇制成2%榄香烯静脉输注浓缩液,进行体外细胞增殖抑制实验(MTT活细胞染色法)。[结果]榄香烯静脉输注浓缩液体外细胞毒实验对多种人体肿瘤细胞:SHG-44人体神经胶质瘤、LAX人体肺腺癌、HL-60人白血病、人体肝细胞癌QGY及人体胃癌MGC,IC50依次为56.07～60.47μg/mL、88.76～92.80μg/mL、39.37～40.14μg/mL、90.26～100.82μg/mL、61.29～83.64μg/mL。[结论]榄香烯静脉输注浓缩液对上述人体肿瘤细胞具有一定的增殖抑制作用。

Nucleostemin基因特异性短发夹状干扰RNA在裸鼠移植瘤模型体内的抗白血病作用

目的探讨核干细胞因子(NS)特异性短发夹状干扰RNA(NS-shRNA)在裸鼠移植瘤模型体内的抗白血病作用。方法对数生长期HL-60细胞接种于裸鼠皮下使其致瘤并洗脱,体外传至第5代再次接种裸鼠,Transwell法验证HL-60细胞体外侵袭力,建立高致瘤性HL-60白血病细胞异种移植瘤裸鼠模型。腹腔注射体外合成的NS-shRNA脂质包裹体,观察治疗前后瘤体体积、重量的变化,组织切片、HE染色观察肿瘤细胞学改变,免疫组织化学检测瘤体细胞内NS蛋白含量,TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(Tunel)检测细胞凋亡情况。结果制备的高致瘤性HL-60细胞使30只裸鼠均形成异种移植瘤,成瘤率为100%,瘤体大小均一。腹腔注射NS-shRNA脂质包裹体13天后,治疗组裸鼠移植瘤体积增长率为207.1%,阴性和空白对照组分别为497.1%和569.6%。治疗组瘤体重量为(1.18±0.27)g,阴性和空白对照组为(2.04±0.73)g和(2.35±0.41)g。切片观察治疗组有大量斑片状组织结构破坏,并出现"凋亡特征"样细胞改变。免疫组织化学检测治疗组移植瘤细胞NS蛋白阳性率和积分值分别为(71.59±1.80)%和(110.26±13.46),阴性对照组为(90.72±1.47)%和(195.11±9.71),空白对照组为(97.33±1.76)%和(220.93±16.54),与阴性和空白对照组相比,NS蛋白表达抑制率分别为43.5%和50.1%。Tunel法检测治疗组移植瘤内出现较多凋亡细胞。结论 NS-shRNA在裸鼠移植瘤模型体内具有抗白血病作用,其作用机制之一可能是通过下调NS表达诱发白血病细胞凋亡增加。

不同灵芝菌株菌丝体乙醇提取物体外抑瘤活性的比较和机理

以人急性早幼粒白血病细胞HL-60细胞株作为模型,用MTT法测定生长抑制率,流式细胞Annexin Ⅴ实验和DNA含量法研究抑瘤机制,比较了8个灵芝Ganoderma lucidum菌株发酵菌丝体乙醇提取物的体外抗肿瘤活性和抑瘤机制。筛选结果得到了能产生高抑瘤活性乙醇提取物的灵芝菌株L5。其对HL-60细胞的抑制率为91.4±0.9%(72小时,125μg/mL); 作用48小时后,13.3%的细胞发生早期凋亡,G0/G1期细胞比例比对照组增加15.9%,而S期细胞比例则下降了8.4%,G2/M期细胞数减少7.6%。本研究证明了灵芝菌丝体乙醇提取物能有效抑制HL-60肿瘤细胞的体外生长,抑制率与菌株相关,其抑瘤机制与细胞G0/G1期阻滞和诱导凋亡有关。

二烯丙基二硫对HL-60细胞SCID小鼠移植瘤的生长抑制作用

二烯丙基二硫（DADS）为大蒜的主要有效成分之一，我们的前期研究表明，DADS对HL-60细胞、MGC803细胞均有生长抑制与诱导分化作用^[1-3]。我们在前期研究的基础上，从组蛋白乙酰化水平进一步探讨DADS对小鼠体内HL-60细胞生长的抑制作用及其机制。

二十碳五烯酸联合视黄酸对HL-60细胞增殖与分化的影响及其机制

目的 探讨二十碳五烯酸 (EPA)联合视黄酸 (RA)对HL 6 0细胞的增殖与分化功能的影响及其机制。方法 MTT比色法测定细胞增殖功能 ;硝基四氮唑蓝 (NBT)还原试验鉴定细胞分化 ;RT PCR半定量分析视网膜母细胞瘤 (RB)mRNA表达 ;Westernblot法检测RB基因的蛋白质 (PRB)表达。结果 EPA单独用药组细胞增殖抑制率为 2 4.38% ,RA单独用药组为 35 .74% ,EPA +RA组为42 75 % ;EPA +RA组细胞分化能力约为对照组的 5 .9倍 ,而RA组为 2 .6倍 ,EPA组仅为 1.3倍 ;EPA组RB基因表达与对照组比较 ,差异无显著性 ,RA组RB基因表达降低 ,EPA与RA联合应用组则最低 ,且各实验组PRB去磷酸化水平均增加。结论 EPA和RA联合应用对HL 6 0细胞中RB基因表达及PRB磷酸化的改变 ,可能是EPA协同RA抑制HL 6

曲古菌素A诱导Raji细胞和HL-60细胞表达共刺激分子CD80、CD86及其与免疫的关系

目的 研究曲古菌素A（TSA）诱导Raji细胞和HL-60细胞表达共刺激分子CD80和CD86及其与免疫应答的关系.方法 采用MTT法观察不同浓度TSA对Raji细胞和HL-60细胞的抑制作用,流式细胞仪检测150 nmol/L TSA作用Raji细胞和HL-60细胞的细胞活力及表达共刺激分子CD80和CD86,RT-PCR分析150 nmol/LTSA作用Raji细胞和HL-60细胞CD80和CD86 mRNA表达情况.结果 TSA对Raji细胞和HL-60细胞的抑制作用具有时间和剂量依赖性,流式细胞仪检测Raji细胞培养12、24、48 h表达CD80分别为（76.2±4.6）％、（78.7±6.9）％、（79.2±3.4）％,CD86表达极低,150 nmol/L TSA作用Raji细胞12、24、48 h后,可提高Raji细胞表达CD80,分别为[（82.4±7.2）％,t =2.56,P =0.047]、[（84.8土5.6）％,t=2.57,P=0.042]、[（93.9±8.7）％,t=2.67,P=0.038],CD86不上调;RT-PCR检测Raji细胞表达CD80 mRNA对照组条带亮度为0.45±0.32,150 nmol/L TSA作用Raji细胞12、24、48 h后表达CD80 mRNA增强,分别为（0.49±0.22,t=2.45,P =0.047）,（0.76 ±0.33,t=3.67,P=0.0071）,（0.85±0.34,t=4.25.P=0.0048）.CD86 mRNA不升高.流式细胞仪检测HL-60细胞12、24、48 h表达CD86分别为（28.8±5.3）％、（29.6±6.3）％、（29.2±1.4）％,CD80表达极低,150 nmol/LTSA作用HL-60细胞12、24、48 h后,提高HL-60细胞表达CD86,分别为[（38.5±4.3）％,t=2.87,P=0.037]、[（42.9±7.1）％,t=3.01,P=0.032]、[（61.4±9.7）％,t=4.56,P=0.0076],CD80不上调.RT-PCR检测HL-60细胞表达CD86 mRNA对照组为0.52 ±0.16,150 nmol/L TSA作用HL-60细胞12、24、48 h后表达CD86mRNA增强,分别为（0.63±0.45,t=2.67,P=0.042）,（0.75 ±0.61,t=3.97,P=0.0078）,（0.92±0.36,t=5.01,P=0.0032）,CD80 mRNA不升高.结论 TSA可诱导Raji细胞表达共刺激分子CD80及诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86,促进细胞的免疫应答,为抗恶性血液病提供了一个新的免疫治疗方法.