Wistar大鼠的正常血糖-高血浆胰岛素钳夹技术

为准确地在体内评价Ｗｉｓｔａｒ大鼠的胰岛素敏感性，我们建立了大鼠的正常血糖－高血浆胰岛素钳夹技术（简称钳夹技术）．并运用该技术初步探讨了年龄，体重、血浆胰岛素及血脂水平对胰岛素敏感性的影响。结果显示，我们建立的钳夹技术所测定的葡萄糖输注率（ＧＩＲ）、细胞外液变化量及其它指标均接近或优于文献报道。同时发现，年龄、体重大于Ⅰ组大鼠的Ⅱ组大鼠（Ｐ＜０．０１）．其ＧＩＲ、血浆高密度脂蛋白组分２水平显著低于Ⅰ组大鼠（Ｐ＜０．０１）．而血浆胰岛素及血浆甘油三酯水平显著高于Ⅰ组大鼠（Ｐ＜０．０１和０．０５）。本研究的结果提示：（１）我们建立的钳夹技术较准确、可靠（２）随着年龄、体重的增大，大鼠的胰岛素敏感性逐渐下降。

清醒状态大鼠高胰岛素-正常血糖钳夹术的建立及其意义

目的 :建立清醒状态下大鼠高胰岛素 -正常血糖钳夹术 ,并探讨短期输注乳化脂肪和手术后麻醉状态对大鼠胰岛素敏感性的影响。方法 :采用颈动、静脉插管术。大鼠按有无输注乳化脂肪随机分为两组 ,先后进行麻醉状态和清醒状态高胰岛素 -正常血糖钳夹术。结果 :短期输注乳化脂肪使胰岛素敏感性降低 30 % (P <0 .0 0 1) :手术后麻醉状态使胰岛素敏感性降低 5 8% (P <0 .0 0 1) ;以上二因素对胰岛素敏感性的影响存在相减效应 (P <0 .0 0 1)。结论 :给大鼠短期输注乳化脂肪会导致胰岛素抵抗。

清醒大鼠高胰岛素-正血糖钳夹技术的建立和应用

目的建立大鼠高胰岛素-正血糖钳夹模型,并探讨短期输注脂肪乳对清醒状态下大鼠葡萄糖输注率(GIR)的影响。方法 SPF级雄性SD大鼠10只,随机数字表法分为2组,每组5只。采用颈动、静脉插管技术,分别经颈静脉给予SD大鼠输注20%脂肪乳(脂肪乳组)和5%葡萄糖6 h(对照组),行高胰岛素-正血糖钳夹实验测定血浆游离脂肪酸(FFA)和GIR。结果与葡萄糖输注的对照组比较,脂肪乳组大鼠输注20%脂肪乳6 h后,血浆FFA水平升高到对照组的17.6倍(P<0.01),GIR下降了27%(P<0.001),胰岛素抵抗非常明显。结论成功建立大鼠高胰岛素-正血糖钳夹技术,给大鼠输注脂肪乳可导致明显的胰岛素抵抗。

两步法高胰岛素正常葡萄糖钳夹技术的建立

目的 建立两步法高胰岛素 正常葡萄糖钳夹技术。 方法 应用两步法高胰岛素-正常葡萄糖钳夹术(第一阶段胰岛素输注速率为 30 mU·m-2 ·min-1,第二阶段为 120 mU·m-2 ·min-1),评估10名健康女性志愿者的胰岛素敏感性,同时监测钳夹试验过程中循环血内源性升糖激素(胰高血糖素、皮质醇、生长激素)和游离脂肪酸(FFA)浓度变化。 结果 (1)两步法高胰岛素 正常葡萄糖钳夹术第一阶段(60~90 min)和第二阶段(150~180 min) 稳态血胰岛素分别维持在(46±7)mU/L和(218±27)mU/L,稳态葡萄糖利用率分别为(7.2±1.4)mg·kg-1·min-1和(13.1±1.2)mg·kg-1·min-1;(2)钳夹试验过程中,血清胰高血糖素、皮质醇和 FFA水平较基础值均有显著下降,而生长激素和C肽水平无明显改变。 结论 成功建立了两步法高胰岛素 正常葡萄糖钳夹术;钳夹试验过程中高浓度的胰岛素抑制了胰高血糖素、皮质醇的分泌,并减少脂肪分解。

高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术进行国产与进口重组人胰岛素注射液的生物等效性临床研究

目的采用高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术评估国产与进口重组人胰岛素注射液在健康人体内的生物等效性。方法回顾性选取2014年12月至2015年9月空军军医大学第一附属医院的健康志愿者481例,按照注射药物的不同将受试者分为实验组和对照组,各362、119例。2组患者均采用高胰岛素正常血糖葡萄糖钳夹技术进行10 h钳夹试验,实验组患者皮下注射国产重组人胰岛素注射液,对照组患者皮下注射进口重组人胰岛素注射液。比较2组受试者试验前后30 min体格检查、血常规、血生化指标[体重、舒张压(DBP)、收缩压(SBP)、心率、白细胞计数(WBC)、血小板计数(PLT)、血红蛋白(Hb)、中性粒细胞百分比、总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)]变化差异。结果试验前2组受试者体格检查、血常规、血生化指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。试验后2组体重、DBP、SBP、心率与试验前比较差异无统计学意义(P>0.05),且实验组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。试验后2组WB、PLT与试验前比较明显升高(P<0.05),Hb与试验前比较明显降低(P<0.05),中性粒细胞百分比与试验前比较差异无统计学意义(P>0.05),实验组的WBC、PLT、Hb、中性粒细胞百分与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。试验后2组TBIL、ALB、ALT、AST与试验前比较明显降低(P<0.05),但实验组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论国产重组人胰岛素注射液和进口重组人胰岛素注射液在健康者体内试验后其体格检查、血常规、血生化指标比较差异不大,具有生物等效性,临床上可根据患者实际情况进行选择。

大鼠创伤性脑损伤后胰岛素抵抗与伤后高血糖的相关分析

目的探讨大鼠创伤性脑损伤后血糖、血清胰岛素及胰岛素敏感性的变化规律,验证机体是否发生胰岛素抵抗现象。方法采用大鼠自由落体脑损伤模型(Feeney's model),分别在伤前1/2h及伤后6、12、24、48、72、120h测定轻、中、重型脑损伤动物的血糖和血清胰岛素值。运用正常血糖-高血胰岛素钳夹技术,检测大鼠重型创伤性脑损伤6、24、48、72h后BG60-120、GIR60-120、胰岛素敏感性指数(ISI)等3个反映胰岛素敏感性的指标。结果中、重型创伤性脑损伤后大鼠血糖含量升高的同时血清胰岛素水平升高,大鼠重型创伤性脑损伤6、24、48、72h后BG60-120显著地升高,GIR60-120、ISI显著地降低。重型脑损伤组大鼠伤后血糖与相应时间段血清胰岛素值呈现正相关,与相应时间段BG60-120呈现正相关,与相应时间段GIR60-120、ISI呈现负相关。结论在重型创伤性脑损伤急性期,大鼠血糖和血清胰岛素水平均显著地升高,高水平的胰岛素未能起到相应的降低血糖的作用,机体产生胰岛素抵抗现象。

高胰岛素-正常血糖钳夹技术的护理研究与改进

目的探讨高胰岛素-正常血糖钳夹试验操作方法及护理改进方法。方法对33例代谢综合征(MS)患者和22名健康成人进行高胰岛素-正常葡萄糖钳夹试验,评估其胰岛素敏感性。分析高胰岛素-正常葡萄糖钳夹试验的操作要点及经验,总结护理方面的改进方法。结果55例受试者中50例成功实施了高胰岛素-正常血糖钳夹试验,5例操作失败。稳态时120～150min MS患者和正常人的葡萄糖代谢率(M)分别为(4.13±1.34)mg/(kg·min)和(8.33±1.59)mg/(kg·min),MS患者的M值显著低于正常人,差异有统计学意义(P<0.01)。结论进行高胰岛素-正常葡萄糖钳夹试验前应做好充分的物品及操作准备工作,在整个试验过程中保持血管通畅、取血侧上肢保温,以保证钳夹试验的顺利完成。

构建伴高血压与胰岛素抵抗的大鼠模型

目的:研究表明,长期食用以脂肪为代表的高热量饮食可导致胰岛素抵抗,而高盐饮食和高血压的发生密切相关。以高脂高盐饮食诱导Wistar大鼠建立伴高血压与胰岛素抵抗大鼠模型。方法:实验于2006-10/2007-03在泰山医学院生命科学研究所完成。①实验分组:选用SPF级雄性Wistar大鼠24只,8周龄,体质量140g左右,随机数字法将大鼠分为对照组和胰岛素抵抗组,每组12只。②实验方法:实验大鼠适应性饲养7d后,对照组继续以普通标准大鼠饲料喂养,胰岛素抵抗组则以高脂饲料取代普通标准大鼠饲料喂养,两组均饮用大鼠专用纯净水,共16周。③实验评估:实验过程中每周测食量、水量和体质量,每4周测1次空腹血糖和尾动脉血压,实验结束前,取血测空腹血浆胰岛素并进行高胰岛素-正常血糖钳夹实验判定胰岛素敏感性。结果:24只大鼠全部进入结果分析。①实验前8周两组大鼠食量差异无显著性意义(P>0.05),8周后胰岛素抵抗组食量较对照组有所下降(P<0.05);实验全程中胰岛素抵抗组饮水量高于对照组(P<0.01);两组大鼠体质量差异无显著性意义(P>0.05)。②喂饲高脂高盐饲料16周后,与对照组相比,胰岛素抵抗组尾动脉血压升高(P<0.01);葡萄糖输注速率降低(P<0.05);胰岛素抵抗组空腹胰岛素浓度高于对照组(P<0.05);两组空腹血糖差异无显著性(P>0.05)。结论:长期高脂高盐饮食可成功诱导出伴高血压胰岛素抵抗大鼠模型。

正常血糖-高胰岛素钳夹技术在胰岛素制剂药物代谢动力学研究中的应用进展

正常血糖-高胰岛素钳夹技术是评价胰岛素敏感性的金标准技术。葡萄糖钳夹技术在糖尿病和胰岛素抵抗相关疾病的研究中具有独特的价值。近年来,随着胰岛素制剂及其类似物的迅速发展,该技术在其药物代谢动力学和药物效应动力学研究中的应用日益广泛。该文就正常血糖-高胰岛素钳夹技术在胰岛素制剂的药物代谢动力学及药物效应动力学研究中的发展历程和应用进展作一简要综述。

糖耐量正常者胰岛素敏感性和β细胞功能的研究

目的探讨糖耐量正常(NGT)者胰岛素抵抗(IR)和胰岛素的分泌功能。方法根据胰岛素曲线下面积(AUCins)水平,将73例NGT者分为A、B两组,其中A组55例,AUCins<100 U/L;B组18例,AUCins≥100U/L。应用胰岛素分泌指数(ΔI30/ΔG30)和Homaβ细胞功能指数(HOMA-β)评价β细胞功能,Homa胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛素敏感指数(ISI)评估IR,高胰岛素-正常葡萄糖钳夹技术评估A组和B组各6例葡萄糖利用率(M)。结果 B组空腹血糖(FPG)、血糖曲线下面积(AUCpg)与A组比较,差异无统计学意义(P>0.05);而空腹胰岛素(FINS)、AUCins增多(P<0.01)。B组ΔI30/ΔG30及HOMA-β较A组增加(P<0.01),HOMA-IR亦增加(P<0.01),IAI降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。B组6例M(7.3±0.4)mg.kg-1.min-1较A组6例M(9.5±0.5)mg.kg-1.min-1降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 NGT人群中部分已经存在明显的IR和β细胞功能代偿性分泌增加,2型糖尿病(T2DM)的预防工作应从NGT期开始。

不同浓度胰岛素输注对胰岛素钳夹大鼠糖代谢的影响

大鼠正糖钳夹技术(Euglycemic clamp technique)是近年来国外广泛应用胰岛素抵抗动物模型的实验研究[1].国内虽有个别报道,但其钳夹术是在麻醉及手术状态下,且未作糖代谢研究[2].我们设计了清醒大鼠胰岛素钳夹模型,用6,6-D2葡萄糖作非放射性示踪剂,给予三种浓度胰岛素输注,观察了大鼠糖代谢及血浆游离脂肪酸(FFA)的改变.

非诺贝特对高脂饮食诱导的胰岛素抵抗大鼠的影响

目的观察非诺贝特对胰岛素抵抗大鼠（insulin resistance，IR）糖脂代谢和血压的影响，探讨非诺贝特改善IR的机制。方法高脂饮食喂养Wistar大鼠6周后再给予非诺贝特4周，测定体重、附睾脂肪重量、FPG、FINS、FFA和血脂；高胰岛素．正常葡萄糖钳夹技术评价胰岛素敏感性；经颈动脉测量血压。结果非诺贝特治疗后IR大鼠的体重、附睾脂肪重量、FINS、TG、FFA降低（P〈0．01或P〈0．05），HDL-C和胰岛素敏感性显著增加（P〈0．01），血压水平也下降明显（SBP和DBP分别下降了19mmHg和21mmHg），但与HF组比较无统计学差异（P〉0．05）。结论非诺贝特可以明显减轻体重和内脏脂肪重量，改善脂代谢紊乱，提高胰岛素敏感性，并可能降低血压。

喂养型胰岛素抵抗动物模型的建立与评价

目的 :以钳夹技术评估高脂膳食建立胰岛素抵抗 (IR)动物模型的可行性。方法 :以脂肪热比为 5 9%(其中猪油占 39% ) ,蛋白质热比为 2 1% (其中酪蛋白占 31% ) ,碳水化合物热比为 2 0 % (其中玉米淀粉占 30 % )的特殊高脂膳食 ,喂养 4周后建立SD大鼠钳夹技术。结果 :高脂膳食喂养大鼠 4周后 ,葡萄糖输注率 (GIR)显著低于正常膳食喂养大鼠 (P <0 .0 1) ,且GIR水平与大鼠体重显著负相关 (γ =- 0 .75 2 ,P <0 .0 1)。结论 :建立SD大鼠的钳夹技术各项指标可靠、准确、稳定 ;高脂膳食喂养 4周后 ,钳夹技术证明大鼠胰岛素敏感性下降 ,提示复制IR大鼠模型成功。

青春期胰岛素抵抗及青春期2型糖尿病动物模型的特点

目的 :分析高脂饮食诱导的青春期胰岛素抵抗大鼠及青春期 2型糖尿病大鼠的特点。方法 :通过正常血糖 -高血浆胰岛素钳夹实验评估两种大鼠模型的胰岛素敏感性 ;对两种模型大鼠的雄激素与胰岛素敏感性的相关性进行研究 ;并与高脂饮食的成年期大鼠比较异同。结果 :青春期胰岛素抵抗雄性大鼠的睾酮水平显著降低 ,且与胰岛素敏感性呈相关关系 ;小剂量链脲佐菌素 (STZ)并不明显破坏胰岛细胞 ,但可使青春期胰岛素抵抗大鼠发生糖尿病 (2型糖尿病 ) ;青春期大鼠高脂饮食后仅仅甘油三酯 (TG)和低密度脂蛋白胆固醇 (LDL -c)升高 ,而成年胰岛素抵抗大鼠血脂代谢已经全面异常。结论 :高脂饮食诱导的青春期大鼠胰岛素抵抗及 2型糖尿病的发生可能与其血浆睾酮水平异常有关。

桑叶黄酮对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗影响的研究

目的运用高胰岛素-正常血糖钳夹实验来评价桑叶黄酮提取物对高脂喂养的2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响。方法高脂(脂肪占热量56.89%)喂养成年雄性SD大鼠8周诱导大鼠胰岛素抵抗,一次性腹腔注射链脲菌素(STZ,25mg/kg),1周后测空腹血糖≥200mg/dl纳入实验,大鼠随机分为4组:糖尿病模型组、罗格列酮治疗组、桑叶黄酮治疗组和对照组。8周后运用高胰岛素-正常血糖钳夹实验测GIR,并取血测血糖、血脂、PPARγ以及胰岛素。结果桑叶黄酮治疗组GIRI、SI和PPARγ明显高于糖尿病组(P<0.05),而血脂明显降低(P<0.05)。结论桑叶黄酮能增加高脂喂养2型糖尿病大鼠胰岛素敏感性,同时具有降低血脂的作用。

胰岛素抵抗大鼠脂肪组织chemerin mRNA的表达和意义

目的探讨胰岛素抵抗大鼠脂肪组织中脂肪因子chemerin mRNA的表达情况及其与胰岛素抵抗之间的关系。方法采用高脂饲料喂养建立胰岛素抵抗大鼠模型,将30只雄性SD大鼠随机分为正常饮食组(NC,n=15)和高脂饮食组(HF,n=15),喂养10周后,以大鼠清醒状态下正常血糖-高血浆胰岛素钳夹技术进行评估,处死后取肾周脂肪组织,应用Real-time PCR方法检测大鼠脂肪组织中chemerin mRNA的表达水平。结果 (1)与NC组比较,HF组60～120 min的平均葡萄糖输注率(GIR60～120)明显降低[分别为(13.87±1.45)mg·kg-·1min-1和(24.10±2.87)mg·kg-·1min-1,P<0.05];(2)与NC组比较,HF组大鼠脂肪组织中chemerin mRNA的表达明显升高[分别为(1.86±1.02)和(0.92±0.32),P<0.01]。结论胰岛素抵抗大鼠脂肪组织chemerin mRNA升高,提示脂肪因子chemerin可能参与胰岛素抵抗的发生。

大鼠创伤性脑损伤后胰岛素抵抗的研究

目的 :探讨大鼠创伤性脑损伤后是否存在胰岛素抵抗现象。方法 :采用大鼠自由落体脑损伤模型 (Feeney’smodel) ,分别在伤前 1/2h及伤后 6、12、2 4、4 8、72、12 0h测定轻、中、重型脑损伤动物的血糖和血清胰岛素值。运用正常血糖 -高血胰岛素钳夹技术 ,检测大鼠重型创伤性脑损伤后 2 4h后BG60 -12 0 、GIR60 -12 0 、ISI等 3个反映胰岛素敏感性的指标。结果 :中、重型创伤性脑损伤后大鼠血糖含量升高的同时血清胰岛素水平升高 ,大鼠重型创伤性脑损伤后 2 4hBG60 -12 0 显著地升高 ,GIR60 -12 0 、ISI显著地降低。结论 :在重型创伤性脑损伤急性期 ,大鼠血糖和血清胰岛素水平均显著地升高 ,高水平的胰岛素未能起到相应的降低血糖的作用 。

胰岛素抵抗大鼠模型的建立与评价

目的探讨应用高胰岛素—正葡萄糖钳夹技术(钳夹法)对模型动物进行胰岛素敏感性评价的可行性。方法雄性Wistar大鼠喂以富含不饱和脂肪酸的特殊高脂肪膳食5周。应用钳夹法评价大鼠的胰岛素敏感性。结果与常规喂养大鼠相比,高脂膳食组的葡萄糖输注率显著降低,空腹血浆胰岛素显著升高。同时,高脂膳食大鼠出现高脂血症。结论应用钳夹法评价大鼠的胰岛素敏感性较为灵敏、准确、可靠。

以自发性大鼠模型评价胰岛素增敏剂药效时的初步探讨

目的研究自发性Zucker fa/fa(ZF)大鼠评价胰岛素增敏剂药效时需要注意的问题,确定入组标准、检测指标、评价标准。方法20只雄性ZF大鼠按照体质量均一原则分为模型对照组和罗格列酮组(每组10只),10只Zucker fa/?大鼠设为正常对照组。罗格列酮组以胰岛素增敏剂罗格列酮作为阳性药物,6mg/kg灌胃给药;模型对照组和正常对照组给予水。结果罗格列酮能明显降低大鼠的血清胰岛素、甘油三酯及游离脂肪酸水平(P<0.05);高胰岛素-正常血糖钳夹实验结果表明,能明显提高罗格列酮组大鼠的葡萄糖输注率与胰岛素敏感指数(P<0.05)。胰腺病理组织学检查表明罗格列酮能缓解大鼠胰岛细胞的增生肥大。结论以ZF大鼠模型评价胰岛素增敏剂药效时,选用7～8周龄自发性ZF雄性大鼠,以空腹胰岛素水平高于4ng/ml为纳入标准,以甘油三酯、游离脂肪酸及血清胰岛素水平与高胰岛素-正常血糖钳夹实验结果为评价指标,由此方法建立的动物模型可用于评价胰岛素增敏剂的药效作用。

伴高血压2型糖尿病大鼠模型的建立

目的制备与人类发病过程类似的伴高血压2型糖尿病大鼠模型。方法选择40只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为对照组12只和实验组28只,对照组以标准大鼠饲料饲喂,实验组以高脂高盐饲料喂养,两组均饮用大鼠专用去离子水,16w进行正糖钳实验,确定胰岛素抵抗,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)造成2型糖尿病。实验过程中每周测食量、水量和体重,每4w测血糖和尾动脉血压,实验16w时取血测空腹血浆胰岛素。结果饲喂高脂高盐饲料16w后,与对照组相比,实验组尾动脉血压明显升高,差异显著(P<0.01);实验组空腹胰岛素浓度明显高于对照组(P<0.01);与对照组相比,实验组葡萄糖输注速率明显降低,两组差异有统计学意义;STZ注射后实验组血糖明显升高,达到了糖尿病的诊断标准。结论高脂高盐饮食配合STZ腹腔注射可成功诱导出伴高血压2型糖尿病大鼠模型。