c-myc反义基因对人高转移肺癌细胞增殖和黏附活性的抑制作用

目的 :观察c myc反义基因抑制人高转移性肺癌PG细胞增殖 ,下调侵袭黏附性的作用和机制。方法 :合成c myc反义寡核苷酸 ,经脂质体包裹 ,转导入c myc高表达的PG细胞中。RT PCR方法检测c mycmRNA表达水平的变化 ,流式细胞术检测c myc蛋白的表达。MTT法检测细胞增殖活性 ,黏附实验检测PG细胞的黏附性。结果 :c myc反义基因 (>0 .6 2 5μmol/L)对PG细胞c mycmRNA、蛋白表达和细胞增殖活性具有明显的抑制作用 ,其处理PG细胞 72h后 ,2 0～ 80min不同时间的细胞黏附百分率 ,从 5 0 .0 %,81.2 7%和 90 .0 %分别显著下降到 31.5 %,37.5 %和 30 .0 %(P <0 .0 5 ) ,下降呈时间依赖效应。结论 :c myc反义基因抑制PG细胞c mycmRNA和蛋白表达水平 ,同时下调增殖活性和侵袭黏附性。

半边旗提取物5F对人高转移肺癌细胞PGCl3侵袭转移的影响

目的研究半边旗提取物5F（以下简称5F）对人高转移肺癌细胞PGCl3转移相关能力的影响。方法MTT法检测5F对PGCl3细胞的增殖抑制作用；Transwellchamber法检测5F对PGCl3细胞侵袭能力和趋化性运动能力的影响；细胞粘附实验检测5F对PGCL3细胞粘附能力的影响。结果：5F对PGCL3细胞的生长和增殖都具有一定程度的抑制作用，当药物浓度为12．5、25、50、100μmol／L作用细胞24小时，抑制率分别为：（5．74±0．20）％、（9．91±0．58）％、（15．02±0．42）％、（36．50±1．15）％。当用浓度为25、50、100μmol／L的药物处理细胞6h后，能明显抑制细胞体外侵袭基底膜成分matrigel的能力，其抑制率分别为：（30．62±0．42）％、（55．30±4．53）％、（76．21±3．21）％。当用浓度为25、50、100μmol／L的药物处理细胞6h后，能明显抑制细胞的趋化运动能力。其抑制率分别为：（18．91±1．43）％、（43．72±2．84）％、（59．614-4．01）％。当用上述浓度的药物处理细胞5h后，测定其在1h内与matrigel的粘附能力。结果表明：5F能使PGCL。

茶硝香酰胺对高转移性Lewis肺癌细胞侵袭和转移的抑制作用

本文旨在从动物体内外、细胞和分子水平上研究探讨茶硝香酰胺(TNC)对高侵袭和高转移性Lewis肺癌(LLC)细胞系侵袭和转移能力的影响.使用Transwell法观察TNC对LLC细胞侵袭能力的抑制作用;建立肿瘤转移动物模型,评估TNC对小鼠LLC细胞肺癌转移的抑制效果;以Western Blotting为检测手段,分析TNC对LLC细胞中相关蛋白表达的影响.实验结果表明,TNC药物浓度与LLC细胞侵袭和转移能力受到的抑制效果成正相关,抑制效果随浓度增大而增强;TNC能下调VEGFR1、VEGFR2、AKT、磷酸化AKT(p AKT)、RELA和MMP9蛋白的表达,并能上调E-cadherin蛋白的表达.分析实验结果可知,TNC能够明显抑制LLC细胞的侵袭,对小鼠体内LLC肺癌的转移同样有显著的抑制作用,从分子水平上,其作用机制与VEGFR介导的AKT/NF-κB信号传导通路有关,TNC有成为抑制高侵袭和高转移肺癌临床治疗药物或者辅助治疗药物的潜力.

DAPK1基因转染对高转移性肺癌细胞PGCl_3的影响

背景与目的:死亡相关蛋白激酶DAPK1失活是影响非小细胞肺癌患者生存的独立因子,过表达的DAPK1可以诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤转移,但抑制转移的机制尚未完全清楚。本文探讨DAPK1基因抑制高转移性肺癌PGCl3细胞生长及转移的可能机制。方法:利用基因重组技术构建含DAPK1基因开放读码框(ORF)的真核表达载体pcDNA3.1-DAPK1,用脂质体LipofectAMINE2000介导转染PGCl3细胞系,检测转染后PGCl3细胞的生长曲线、体外软琼脂克隆形成率、体外侵袭、运动和粘附能力的变化,同时检测了胶原酶活性,p53,bcl-2基因表达的变化。结果:转染DAPK1基因的细胞生长比空白组及pcDNA3.1转染组减缓;体外软琼脂克隆形成率下降P<0.05;pcDNA3.1-DAPK1转染组体外侵袭能力是空白组的68.5%,而pcDNA3.1转染组是空白组的88.0%;pcDNA3.1-DAPK1转染组运动能力是空白组的87.3%,pcDNA3.1转染组是空白组的95.7%;pcDNA3.1-DAPK1转染组粘附能力是空白组的62.7%,pcDNA3.1转染组是空白组的91.2%;各组的胶原酶变化不明显;pcDNA3.1-DAPK1转染组p53基因表达升高,bcl-2基因下调。结论:DAPK1基因的过表达可以在一定程度上逆转PGCl3细胞的恶性表型,使PGCl3细胞生长受抑制,体外侵袭、运动和粘附能力下降,p53基因表达的上调及bcl-2基因表达下调。

茶多酚对高转移性人肺癌细胞间隙连接通讯功能的上调研究

应用MTT法体外观察不同浓度茶多酚对PG细胞的杀伤作用 ,激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测用药后PG细胞内Ca2 +浓度、细胞间隙连接通讯(GJIC)、Cx4 3表达和细胞增殖周期分布的变化。结果显示 ,4个浓度的茶多酚对PG细胞均有杀伤作用 ,呈剂量依赖关系。细胞增殖受到明显抑制 ,使细胞阻滞于G0 /G1期 ,不能进入S期及G2 /M期 ,细胞增殖指数明显下降。与对照组相比 ,随着茶多酚浓度的增加 ,细胞内Ca2 + 浓度、GJIC和Cx4 3表达水平逐渐上升。提示茶多酚对PG细胞具有生长抑制作用 。

甲基硒酸对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981增殖和凋亡作用及其分子机制的初步研究

背景与目的已有的研究表明硒具有防癌作用和抑制乳腺癌、前列腺癌细胞株增殖的作用,但有关甲基硒酸(MSA)是否具有抗肺癌的作用目前尚不清楚。本研究的目的是探讨MSA对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981是否具有生长抑制及诱导凋亡的作用,并对其分子机制作初步探讨。方法应用体外细胞培养技术,以MSA处理L9981细胞株,应用台盼蓝计数法、克隆形成实验和流式细胞术检测MSA处理L9981细胞株前后细胞株体外增殖、克隆形成和凋亡水平的变化。应用流式细胞术检测MSA处理L9981细胞株前后细胞周期、细胞周期相关蛋白和凋亡相关蛋白表达水平的变化。结果①MSA在大于0.5μmol/L的浓度时可显著抑制L9981细胞株的增殖(P<0.05),细胞被阻滞于G0/G1期。②MSA浓度在2.5μmol/L时可诱导L9981细胞株进入凋亡(P<0.05)。③MSA在5μmol/L时可明显抑制L9981细胞株的克隆形成能力(P<0.05)。④MSA能显著上调P53、P21、Fas、FasL和Bax蛋白表达水平。结论①MSA可显著抑制人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的体外增殖和克隆形成能力,并诱导细胞凋亡;②MSA的抗肺癌作用可能与其调控肺癌细胞株L9981细胞周期和细胞凋亡相关基因表达有关。

土贝母苷甲对人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞粘附、侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨土贝母苷甲(下称苷甲)对人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞粘附、侵袭和迁移能力的影响。方法:PGCL3细胞经不同剂量苷甲处理24、48、72h,MTT法检测其对PGCL3细胞生长的影响;分别用重组基底膜侵袭模型、粘附基质分析、Transwell小室趋化运动模型研究苷甲对PGCL3细胞的粘附、侵袭和运动能力的影响;用酶谱法检测苷甲对PGCL3细胞分泌Ⅳ型胶原酶(MMP-2)能力及活性的影响。结果:苷甲明显抑制PGCL3细胞的生长,且呈剂量依赖关系,作用24、48、72h的IC50分别为15.70、14.20和13.32μmo.lL-1。苷甲1.25、2.50、5.00μmol·L-1处理PGCL3细胞24h,对PGCL3细胞侵袭能力的抑制率分别为28.7%、41.0%、57.5%;对PGCL3细胞迁移能力的抑制率分别为21.6%、35.2%、53.7%。苷甲降低PGCL3细胞MMP-2的分泌量及其活性,降低PGCL3细胞对层粘连蛋白、纤维粘连蛋白的粘附率,且呈一定的剂量依赖关系。结论:苷甲抑制人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞的粘附、侵袭和迁移能力,其对PGCL3细胞的侵袭和粘附的影响可能与其降低PGCL3细胞MMP-2的分泌量及其活性,降低PGCL3细胞对层粘连蛋白、纤维粘连蛋白的粘附率有关。

靶向抑制ERK1/2信号传导通路对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981恶性表型的影响

背景与目的肺癌的发生和发展是一个多基因调控、多阶段多步骤发生的复杂过程,目前已知信号传导异常在肺癌发生和发展各个阶段都具有重要作用。本研究旨在探讨外源性MEK1/2抑制剂U0126对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中细胞外信号调节激酶ERK1/2表达和活化的影响及细胞恶性生物学行为的影响。方法将具有nm23H1基因杂合性缺失的人高转移大细胞肺癌原代细胞株L9981培养传代,应用蛋白印迹法(Westernblot)和免疫沉淀法,检测U0126对L9981中总ERK1/2和双磷酸化ERK1/2的表达水平,以及ERK1/2相对活性的影响;应用MTT法及改良Boyden小室法分别检测U0126对L9981体外增殖活性及侵袭能力的作用规律。结果不同浓度的U0126作用于L998120min后,随着U0126浓度的增加ERK1/2的相对活性均逐渐下降,不同U0126浓度组间磷酸化ERK1/2表达水平比较均有非常显著性差异(P<0.01);而不同浓度U0126组间总ERK1/2表达水平比较无显著性差异(P=0.387)。相同浓度的U0126作用于L9981不同时间后,随着作用时间的延长,细胞中ERK1/2的相对活性均逐渐下降,各时间组间磷酸化ERK1/2表达水平比较有显著性差异(P<0.01);而各时间组间总ERK1/2表达水平比较无显著性差异(P=0.689)。U0126对L9981细胞株ERK1/2相对活性的作用具有时间和剂量依赖性。不同浓度的U0126作用于L9981后,随着U0126浓度的增加,细胞体外增殖活性随之降低,不同浓度组间比较均有显著性差异(P<0.01)。不同浓度的U0126作用于L9981后,随着U0126浓度的增加,细胞体外侵袭能力随之降低。在U0126浓度为0、10和20μmol/l时三个剂量组间细胞体外侵袭能力比较无显著性差异(P>0.05),而在U0126浓度增加为40和60μmol/l时与U0126浓度为0、10和20μmol/l时细胞体外侵袭能力比较均有显著性差异(P<0.01)。结论ERK1/2信号传导通路特异性抑制剂U0126对人高转移大细胞肺癌细胞株ERK1/2信号传导通路的抑制作用具有剂量和时间依赖性;U0126对人高转移大细胞肺癌细胞株体外增殖活性和侵袭能力的抑制作用具有剂量依赖性;提示人高转移大细胞肺癌细胞株中ERK1/2信号传导通路关键激酶MEK1/2可能是治疗肺癌的一个潜在分子靶点。

nm23-H_1基因点突变对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的GSK-3β激酶活性的影响

背景与目的我们的前期研究结果表明nm23-H1基因的肺癌转移抑制作用可能与上调Wnt信号通路中关键激酶GSK-3β的活性、进而抑制Wnt信号通路相关。本研究的目的是探讨nm23-H1点突变对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中胞质和胞核的GSK-3β激酶活性的影响,为阐明nm23-H1基因调控肺癌转移相关信号传导通路的分子机制提供实验依据。方法将原代人低转移大细胞肺癌细胞株NL9980、原代人高转移大细胞肺癌细胞株L9981、空载体转染细胞株L9981-pEGFP、稳定转染nm23-H1基因的细胞株L9981-nm23-H1-pEGFP以及稳定转染在44、96、118、120号位点发生突变后的nm23-H1基因的转基因肺癌细胞株L9981-nm23-H1S44A-pEGFP、L9981-nm23-H1P96S-pEGFP、L9981-nm23-H1H118F-pEGFP和L9981-nm23-H1S120G-pEGFP作为研究对象,应用免疫共沉淀同位素闪烁计数法测定上述肺癌细胞株胞质和胞核中的GSK-3β激酶活性。结果nm23-H1基因发生点突变后,所有转基因肺癌细胞株细胞胞质和胞核中的GSK-3β活性均较突变前有所下降。L9981-nm23-H1S44A-pEGFP、L9981-nm23-H1P96S-pEGFP、L9981-nm23-H1H118F-pEGFP、L9981-nm23-H1S120G-pEGFP分别与L9981-nm23-H1-pEGFP比较,胞质与胞核中GSK-3β激酶活性均存在显著性差异(P<0.05),其中L9981-nm23-H1P96S-pEGFP与L9981-nm23-H1-pEGFP胞质中GSK-3β活性存在极显著差异(P<0.01),L9981-nm23-H1S44A-pEGFP、L9981-nm23-H1P96S-pEGFP和L9981-nm23-H1H118F-pEGFP与L9981-nm23-H1-pEGFP的胞核中GSK-3β活性存在极显著差异(P<0.01)。结论①nm23-H1基因突变能显著影响其对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981胞质和胞核中GSK-3β激酶活性的调控作用;②nm23-H1基因可能通过调控L9981中GSK-3β激酶活性来抑制L9981细胞株中Wnt信号传导。

土贝母皂苷对人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞侵袭行为的影响

目的:土贝母[Bolbostemma paniculatum(Max-im.)Franquet]是一种传统中药。我们以前的研究结果已证实从土贝母块茎中分离得到的土贝母皂苷(下称皂苷)有强抗肿瘤效果和诱导肿瘤细胞调亡作用。本研究旨在探讨皂苷对人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞粘附、侵袭和迁移能力的影响。方法:MTT法检测其对PGCL3细胞生长的影响;分别用粘附相关基底膜成分分析试验、重组基底膜侵袭试验、Transwell室趋化运动模型研究皂苷对PGCL3细胞的粘附、侵袭和运动能力的影响;用酶谱法检测皂苷对Ⅳ型胶原酶分泌及活性的影响。结果:皂苷明显抑制PGCL3细胞的生长,且其效果呈剂量依赖关系。皂苷作用PGCL3细胞24、48、72 h的IC50值分别为16.77、14.62、14.46μmol.L-1。皂苷1.25、2.50、5.00μmol.L-1处理PGCL3细胞24 h,对PGCL3细胞侵袭能力的抑制率分别为20.6%、30.6%、46.8%,对PGCL3细胞运动能力的抑制率分别为14.2%、24.7%、42.5%。皂苷降低PGCL3细胞Ⅳ型胶原酶的分泌量及Ⅳ型胶原酶活性,降低PGCL3细胞对层粘连蛋白、纤维粘连蛋白的粘附率,且其效果呈一定的剂量依赖关系。结论:皂苷抑制人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞的粘附、侵袭和迁移能力;皂苷对PGCL3细胞粘附和侵袭的影响与其降低PGCL3细胞对层粘连蛋白、纤维粘连蛋白的粘附率,降低PGCL3细胞Ⅳ型胶原酶的分泌量及其活性有关。

大黄素抑制人高转移巨细胞肺癌PG细胞的肿瘤转移相关性质

目的:研究大黄素对人高转移巨细胞肺癌PG细胞转移相关性质的影响。方法:MTT法检测大黄素对多种恶性肿瘤细胞的增殖抑制作用;BoydenChamber法检测大黄素对PG细胞侵袭能力的影响;明胶酶谱法(Zymography)检测大黄素对PG细胞Ⅳ型胶原酶分泌的影响;流式细胞术检测大黄素对PG细胞周期的影响Westernblot法检测大黄素作用后PG细胞周期相关蛋白的表达。结果:大黄素可抑制来源于不同组织多种肿瘤细胞的增殖,其IC50值在15～70μmol/L。40μmol/L和80μmol/L大黄素处理PG细胞24h,可使细胞侵袭能力分别降低到对照组的76.9%和57.4%,同时可使细胞MMP2和MMP9的分泌量显著下降,大黄素对PG细胞同基底膜的粘附能力没有明显影响。20μmol/L和40μmol/L大黄素作用于PG细胞24h后,可使细胞周期明显阻滞于G2/M期,伴随着S期的相应减少,进一步分析周期相关蛋白的表达,大黄素作用后可使PG细胞cyclinB1蛋白表达明显下降,而对p34cdc2的表达没有明显影响。结论:大黄素能抑制肿瘤细胞转移相关性质,提示其具有抗转移潜能。

nm23-H1基因转染前后人高转移大细胞肺癌细胞株双向凝胶电泳图谱分析

为了更全面地了解nm23-H1在肺癌中发挥转移抑制的机理,用双向凝胶电泳技术比较人高转移大细胞肺癌细胞株(L9981)和转染nm23-H1基因的人大细胞肺癌细胞株(L9981-nm23-H1)间蛋白表达的差异.利用固相pH梯度双向凝胶电泳分离人高转移大细胞肺癌细胞株(L9981)和转染nm23-H1基因的人大细胞肺癌细胞株(L9981-nm23-H1)的总蛋白,用图像分析软件比较分析以识别细胞间的差异表达蛋白质.结果成功地获得了两株细胞蛋白组分辨率高、重复性好的双向凝胶电泳图谱.软件分析两种细胞的凝胶电泳图谱后发现,在相同分析条件下识别的蛋白质斑点数L9981为902±169个、L9981-nm23-H1为1160±212个.比较L9981和L9981-nm23-H1人大细胞肺癌细胞株的双向凝胶电泳蛋白质图谱后发现6个蛋白质点仅在L9981中有表达,17个蛋白质点仅在L9981-nm23-H1中有表达.此外,发现13个在两种细胞株中均存在,但表达量差异在2倍以上的蛋白质点(P<0.05).结果提示,nm23-H1基因转染引起人高转移大细胞肺癌细胞株蛋白质表达谱的变化,可能是其逆转肺癌侵袭转移的生物学基础.

nm23-H_1基因转染逆转人高转移大细胞肺癌恶性表型分子机制的实验研究

背景与目的nm23-H1是公认的肿瘤转移抑制基因。我们的前期研究结果发现nm23-H1基因可明显抑制人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中细胞外信号调节激酶ERK1/2的活性。本研究旨在探讨肿瘤转移抑制基因nm23-H1及外源性ERK1/2通路抑制剂U0126对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中ERK1/2及其细胞恶性生物学行为的影响,为阐明nm23-H1基因调控肺癌转移相关信号传导通路的分子机制提供实验依据。方法将稳定转染nm23-H1基因的人高转移大细胞肺癌细胞株L9981-nm23-H1、原代细胞株L9981(nm23-H1基因杂合性缺失)和转染空载体细胞株L9981-PLXSN培养传代,应用蛋白印迹法(Western blot)和免疫沉淀法,检测应用U0126(40μmol/L,处理细胞20min)处理后三个肺癌细胞株中总ERK1/2和双磷酸化ERK1/2表达水平的变化;应用MTT法及改良Boyden小室法分别检测三个肺癌细胞株应用U0126处理后细胞体外增殖活性及侵袭能力的变化。结果L9981-nm23-H1细胞株磷酸化ERK1/2表达水平、ERK1/2相对活性经U0126处理后均显著低于L9981和L9981-PLXSN细胞株(P<0.01),而L9981和L9981-PLXSN细胞株间磷酸化ERK1/2表达水平、ERK1/2相对活性比较均无显著性差异(P>0.05);三个肺癌细胞株总ERK1/2水平处理后比较均无明显变化,差异均无显著性(P>0.05);L9981-nm23-H1细胞株体外增殖能力及侵袭力均显著低于L9981细胞株和L9981-PLXSN细胞株(P<0.01);U0126能显著下调L9981细胞株体外增殖活性及侵袭能力(P<0.01)。结论阻断L9981细胞株中ERK1/2的激活后可发生与转染nm23-H1基因相似的细胞生物学行为的变化,即细胞的体外增殖能力及侵袭力均显著降低,提示nm23-H1基因转染逆转人高转移大细胞肺癌恶性表型的分子机制可能与其下调ERK1/2信号转导通路中关键激酶ERK1/2的活性有关。

丹参酮ⅡA对乏氧环境下人高转移性巨细胞肺癌细胞表面β1-整合素及E-cadherin表达的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对低氧培养的人高转移性巨细胞肺癌(PG)细胞表面黏附分子E-cadherin、β1-整合素表达的影响。方法 PG细胞复苏,按干预药物不同分为丹参酮ⅡA高、中、低剂量组及顺铂组、阴性对照组,分别置于常氧和低氧环境下培养,48 h后应用流式细胞术测定黏附分子E-cadherin、β1-整合素在各组PG细胞表面表达情况。结果低氧环境下,PG细胞所表达β1-整合素荧光强度随丹参酮ⅡA浓度的增高而逐渐减弱,但表达β1-整合素的阳性细胞率接近100%,无统计学意义;PG细胞表达E-cadherin,随着丹参酮ⅡA浓度的增加,其阳性细胞数增加,但表达E-cadherin的荧光强度很弱,无统计学意义。常氧环境下,PG细胞所表达β1-整合素的荧光强度随着丹参酮ⅡA浓度的增高逐渐减弱,表达β1-整合素的阳性细胞率接近100%,无统计学意义;PG细胞表达E-cadherin,随着丹参酮ⅡA浓度的增加,其阳性细胞数减少,但表达E-cadherin荧光强度很弱,没有统计学意义。结论在常氧环境下,丹参酮ⅡA通过下调E-cadherin和β1-整合素表达来抑制PG细胞的浸润转移;在低氧环境下,通过下调β1-整合素来抑制PG细胞的转移而上调E-cadherin表达来增加PG细胞的浸润转移能力。

nm23-H_1基因转染对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中β-catenin表达的影响

目的 探讨nm2 3 H1基因转染对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中 β catenin和磷酸化β catenin表达水平的影响 ,为阐明nm2 3 H1基因逆转肺癌转移的分子机制提供实验依据。方法 以原代L9981、转染nm 2 3 H1基因的L9981 nm2 3 H1和转染空载体的L9981 pLXSN三株肺癌细胞株为研究对象 ,应用WesternBlot检测比较各细胞株胞浆、胞核中 β catenin和磷酸化 β catenin表达水平的变化 ,以确定nm 2 3 H1基因转染是否能调控人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中 β catenin和磷酸化 β catenin表达。 结果 ①β catenin在L9981 nm2 3 H1细胞株胞浆中表达量 (IOD) (3 64 9± 118)显著高于L9981(14 0 1± 3 1)和L9981 pLXSN(13 5 0± 5 5 )细胞株 (P <0 .0 0 1) ;②β catenin在L9981 nm 2 3 H1细胞株胞核中表达量 (2 945± 68)与L9981(2 60 4± 2 3 )和L9981 pLXSN(2 65 2± 5 3 )细胞株比较均无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;③磷酸化β catenin在L9981 nm 2 3 H1细胞株胞浆中表达量 (3 12 3± 10 2 )显著低于L9981(4 3 62± 13 1)和L9981 pLXSN (4 5 0 0±117)细胞株 (P <0 .0 0 1) ;④磷酸化 β catenin在L9981 nm2 3 H1细胞株胞核中表达量 (5 13 6± 112 )显著高于L9981(2 666± 116)和L9981 pLXSN(2

姜黄素对高转移人肺癌细胞亚系生物学行为的影响

目的 :观察姜黄素对克隆化人肺癌高转移细胞亚系 (PGCL3)生物学行为的影响。方法 :用 6 0 μ mol/ L的姜黄素处理 PGCL 3细胞 ,通过制备生长曲线及软琼脂集落形成能力试验来评价药物对细胞生长的影响 ,以对层粘连蛋白的粘附试验、通过 Boyden小室聚碳酸酯膜的运动试验和降解穿过基底膜胶的侵袭降解试验来评价细胞侵袭能力的改变。结果 :在 6 0μ mol/ L姜黄素作用下 ,PGCL 3细胞的生长速度及软琼脂集落形成能力、以层粘连蛋白为粘附基质的粘附能力、穿过重建基底膜的侵袭降解能力及趋化运动能力均显著降低 (P<0 .0 1或 P<0 .0 5 )。结论 :姜黄素可抑制 PG-CL 3细胞的恶性表型 ,为治疗转移性恶性肿瘤提供了实验依据。

桂皮酸诱导高转移人肺癌细胞去恶性的研究

本文作者选用桂皮酸处理克隆化高转移人肺巨细胞癌（PGCL3）细胞，发现肿瘤细胞在形态、增殖速度、分裂指数、软琼脂集落形成能力和凝集反应等方面均出现向正常细胞表型逆转，证明栓皮酸具有抑制PGCL3细胞增殖及诱导分化的作用。我们还进行了反映肿瘤细胞浸润和转移能力的粘附、运动和降解侵袭实验，结果显示桂皮酸对PGCL3细胞的上述三种能力都有明显的抑制作用，表明桂皮酸在诱导PGCL3细胞向成熟方向分化的同时，还使肿瘤细胞的浸润和转移能力减弱。

金宁方代谢产物抑制肺癌细胞增殖的研究

目的:研究金宁方代谢产物对人高转移肺癌细胞95-D增殖的抑制作用。方法:收集金宁方饲喂SD大鼠的血清,采用噻唑蓝(MTT)法,观察不同浓度的金宁方代谢产物对人肺癌细胞95-D生长增殖的抑制效果。结果:不同浓度的金宁方代谢产物对人高转移肺癌细胞95-D的增殖均有抑制作用,抑制率产生在24-48 h。15%浓度(实验的最高浓度)在48 h达到最佳抑制细胞生长的生物学作用,其抑制率约为47%。金宁方的各主要药效单体都具有抑制95-D细胞增殖的作用,其中草酸铵(ammonium oxalate,Am O)作用最明显,能够调控caspase3和8表达而促进95-D细胞凋亡。结论:金宁方代谢产物能抑制人高转移肺癌细胞95-D的体外增殖,其可能在肺癌的治疗中具有一定的价值。

甘草酸抗人肺癌细胞增殖和侵袭作用的研究

目的 :探讨甘草酸对高转移人肺癌细胞 (PGCL3)增殖抑制和抗侵袭的作用。方法 :甘草酸处理PGCL3细胞 ,用细胞增殖抑制试验、软琼脂集落形成试验、侵袭、运动和粘附试验以及组织蛋白酶B活性测定 ,观察细胞增殖和侵袭能力的变化。结果 :甘草酸可降低PGCL3细胞增殖能力 ,并呈剂量依赖性 ,IC50 为 1.83mmol/L ;0 .5mmol/L和 1mmol/L甘草酸能抑制PGCL3细胞的侵袭能力 (P <0 .0 1) ,且有剂量依赖性。抗侵袭作用机理的分析结果显示上述浓度的药物对细胞的运动、粘附及组织蛋白酶B分泌均有明显的抑制作用(P <0 .0 1) ,软琼脂集落形成率也显著降低 (P <0 .0 1)。结论 :甘草酸有抗PGCL3人肺癌细胞增殖和侵袭作用 ,其抗侵袭机理不是对侵袭的某一环节的阻断 ,而是对侵袭各个基本环节都有抑制作用。

肺癌细胞侵袭过程中蛋白分解酶的作用

目的 :探讨 IV型胶原酶、尿激酶型纤溶酶原激活物 (u- PA)、组织蛋白酶 B(CB)在克隆化人肺癌高转移细胞亚系 (PGCL3)侵袭过程中的作用。方法 :选用三种基质降解酶的特异性抑制剂—— 型胶原酶抑制剂—EDTA、u- PA的抑制剂—反 -对氨甲基环己酸 (TA)、CB的抑制剂— N-乙酰马来酰亚胺 (NEM) ,观察其对 PGCL 3细胞侵袭降解能力的影响 ,以判断蛋白分解酶在 PGCL 3细胞侵袭降解基底膜过程中的作用 ,用细胞降解穿过 Boyden小室重建基底膜胶的侵袭降解试验来评价细胞侵袭能力的改变。结果 :TA及 NEM能显著抑制 PGCL 3细胞的侵袭能力 (P<0 .0 1) ,EDTA似无抑制作用。结论 :在 PGCL 3细胞降解基底膜的过程中 ,CB、u- PA两种酶起主要作用 ,提示 u- PA、CB是肺癌高侵袭能力的重要机制之一 ,抗 u- PA、CB的药物可能同时具有抗癌侵袭转移的作用。