高迁移率族蛋白框1反义核酸抑制人胰腺癌细胞系PCNA-1侵袭的研究

背景与目的:研究证明高迁移率族蛋白框1(highmobilitygroupbox1,HMGB1)在大多数未成熟及恶性肿瘤细胞中高表达,它与细胞增殖、侵袭、转移有密切关系。我们前期的研究证明HMGB1在胰腺癌组织中高表达并与肿瘤的侵袭及转移显著性相关。本研究的目的是观察HMGB1反义核酸对胰腺癌PCNA-1细胞体外侵袭能力的影响,并探讨其作用机制。方法:以脂质体介导方法将HMGB1反义表达载体转染胰腺癌细胞株PCNA-1,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测HMGB1、基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase-2,-9,MMP-2,MMP-9)mRNA的表达,Westernblot法检测HMGB1蛋白表达,明胶酶谱法(gelatinzymography)检测MMP-2和MMP-9活性的变化,Boyden小室法检测PCNA-1的体外侵袭能力。结果:HMGB1反义核酸明显抑制PCNA-1细胞HMGB1mRNA和蛋白的表达。转染后,MMP-2及MMP-9mRNA表达和酶活性亦受到显著抑制(P<0.01)。另外,HMGB1反义核酸的导入显著减弱了胰腺癌细胞的跨膜侵袭能力(P<0.01)。结论:HMGB1在胰腺癌侵袭转移中,阻断HMGB1基因的表达,可能是阻抑胰腺癌转移的一种新策略。

姜黄素对阿尔茨海默病大鼠学习记忆及HMGB1和JNK表达的影响

目的:探讨姜黄素对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力、海马高迁移率族框蛋白1(HMGB1)及c-Jun氨基末端激酶(JNK)表达的影响。方法:36只雄性SD大鼠随机分为4组:空白对照组(A组)、AD模型组(B组,鹅膏覃氨酸Meynert基底核注射)、AD模型+姜黄素治疗组(C组,腹腔注射100 mg·kg-1·d-1持续6 d)和AD模型+溶剂对照组(D组,腹腔注射4 mL/kg玉米油持续6 d)。Morris水迷宫测试大鼠平均逃避潜伏期(AEL),免疫组化和Western blotting法检测海马HMGB1和JNK的表达。结果:与A组相比,B和D组大鼠造模后各时点AEL明显延长(P<0.05),C组大鼠第5天和第6天AEL较B组相应时点明显缩短(P<0.05);B组和D组海马存在HMGB1大量胞浆、胞外释放情况(P<0.05),而C组海马区HMGB1胞浆、胞外释放无明显差异(P>0.05)。4组大鼠海马总HMGB1表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05),但B组和D组海马JNK表达水平增高(P<0.05)。结论:姜黄素能够改善AD大鼠的学习记忆能力,其机制可能与抑制HMGB1的胞浆、胞外释放及JNK的表达下调有关。

紫珠提取物通过抑制HMGB1水平改善小鼠宫颈上皮细胞炎症反应的机制

目的探讨紫珠提取物通过抑制高迁移率族蛋白框1(HMGB1)水平改善小鼠宫颈上皮细胞炎症反应的机制。方法30只CD-1远交的孕鼠用于实验研究,通过脂多糖诱导早产小鼠模型。将成功怀孕的小鼠按照随机数字表法分成3组:对照组(正常孕鼠,等量0.9%氯化钠溶液灌胃,n=10),炎症模型组(早产模型,等量0.9%氯化钠溶液灌胃,n=10)和紫珠提取物组(早产模型,100 mg·kg^(-1)·d^(-1)紫珠提取物灌胃,n=10),共干预7 d。通过蛋白印迹分析小鼠宫颈组织HMGB1/TLR4/NF-κB的蛋白表达。通过酶联免疫吸附试验检测小鼠宫颈阴道粘液中细胞因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8]的水平。通过RT-PCR分析小鼠宫颈组织焦亡相关蛋白iNOS、NLRP3和caspase-4的mRNA表达。通过水溶性荧光探针和可溶性E-钙粘蛋白(SECAD)水平评估上皮细胞通透性。结果炎症模型组HMGB1、TLR4和NF-κB的蛋白表达较对照组升高,紫珠提取物组HMGB1、TLR4和NF-κB的蛋白表达较炎症模型组降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。炎症模型组TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的水平较对照组升高,紫珠提取物组TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的水平较炎症模型组降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。炎症模型组iNOS、NLRP3和caspase-4的mRNA表达较对照组升高,紫珠提取物组iNOS、NLRP3和caspase-4的mRNA表达较炎症模型组降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。炎症模型组SECAD水平和荧光强度较对照组升高,紫珠提取物组SECAD水平和荧光强度较炎症模型组降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论脂多糖可以激活小鼠宫颈上皮细胞的炎症反应,这种炎症反应会导致宫颈上皮屏障受损,紫珠提取物通过抑制HMGB1表达降低小鼠宫颈上皮炎症反应,改善宫颈上皮屏障受损。

γδT细胞受体拮抗剂治疗过敏性鼻炎动物的实验研究

目的探讨高迁移率族蛋白框1(high mobility group box 1,HMGB1)阻滞剂和γδT细胞受体拮抗剂治疗过敏性鼻炎(AR)动物的实验研究。方法取SPF级大鼠24只,随机分成4组,A组:为正常组,未行干预治疗;B组:OVA组;C组:HMGB-1阻滞剂(三氯化钆,GdCl3干预组);D组:γδT细胞受体拮抗药(UC7-13D5)干预组。观察各组大鼠的鼻部症状,鼻黏膜的炎症情况及鼻黏膜内HMGB1、白细胞介素17(IL-17)、Toll样受体4(toll-like receptors 4,TLR4)以及外周血中HMGB、IL-17、TLR4。结果正常组大鼠未见明显喷嚏和挠鼻,而OVA组大鼠则出现明显喷嚏和挠鼻现象。应用HMGB-1阻滞剂和γδT细胞受体拮抗剂均能控制AR大鼠鼻部症状,喷嚏和挠鼻可明显减少(P<0.05),各组大鼠鼻黏膜组织标本HE染色结果显示,在OVA AR模型中,炎症细胞(包括嗜酸性粒细胞)浸润明显。HMGB-1阻滞剂和γδT细胞受体拮抗剂对减轻鼻黏膜气道炎症作用明显炎症细胞浸润明显减少(P<0.05);各组鼻黏膜HMGB1、IL-17、TLR4表达情况,B组大鼠鼻黏膜HMGB1、IL-17、TLR4水平显著升高,明显高于HMGB-1阻滞剂和γδT细胞受体拮抗剂干预后组(P<0.05),HMGB-1阻滞剂组和γδT细胞受体拮抗剂组却未见明显差异(P>0.05)。各组血清炎症介质HMGB1、IL-17、TLR4表达,B组中血清HMGB1、IL-17、TLR4水平显著升高,明显高于HMGB-1阻滞剂组和γδT细胞受体拮抗组大鼠血清中HMGB1、IL-17、TLR4水平(P<0.05)。结论HMGB-1阻滞剂和γδT细胞受体拮抗剂干预能有效缓解大鼠AR症状,可能为AR治疗提供新的治疗方法。