养心生脉颗粒对气虚血瘀型缺血性心力衰竭患者心功能及血清S100钙结合蛋白A8/A9复合物、核因子-κB、晚期糖基化终末产物受体、高迁移率族蛋白1的影响

目的探讨养心生脉颗粒治疗气虚血瘀型缺血性心力衰竭(ischemic heart failure,IHF)的临床效果,及对心功能、血清S100钙结合蛋白A8/A9复合物(serum S100 calcium-binding protein A8/A9 complex,S100A8/A9)、核因子(nuclear factor,NF)-κB、晚期糖基化终末产物受体(receptor of advanced glycation endproducts,RAGE)及高迁移率族蛋白(highmobility group protein,HMG)B1水平的影响。方法选择我院心内科自2017年3月至2019年3月收治的102例IHF患者作为研究对象,分为对照组(常规西医治疗)及观察组(常规西医治疗+养心生脉颗粒),每组51例,疗程均为3个月。观察两组临床疗效及用药安全性,比较中医证候评分、6 min步行试验(6 minute walking test,6MWT)、明尼苏达州心功能不全生命质量量表(Minnesota living with heart failure questionnaire,MLHF-Q)评分、心排血量(cardiac output,CO)、左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室收缩末期内径(left ventricular end-systolic diameter,LVESD)、左室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic diameter,LVEDD)、心率变异性(heart rate variability,HRV)参数、血浆脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)、血清S100A8/A9、NF-κB、RAGE及HMGB1水平。结果观察组总有效率高于对照组(94.12%vs 80.39%,P<0.05)。观察组中医证候积分、MLHF-Q评分低于对照组,6MWT高于对照组(P<0.05)。观察组LVEF、CO及HRV参数高于对照组,LVESD、LVEDD及血浆BNP水平低于对照组(P<0.05)。观察组血清S100A8/A9、NF-κB、RAGE、HMGB1水平低于对照组(P<0.05)。两组不良反应发生率差异无统计学意义(7.84%vs 9.80%,P>0.05)。结论养心生脉颗粒对气虚血瘀型IHF疗效显著,能有效改善临床症状、心功能及生活质量,可在一定程度上延缓心室重构进程,改善血清S100A8/A9、NF-κB、RAGE及HMGB1水平。

槲皮素通过HMGB1/RAGE/NF-κB通路减轻癫痫大鼠神经炎症的实验研究

目的:探讨槲皮素是否通过调控高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、糖基化终末产物受体(RAGE)、核转录因子κB(NF-κB)参与减轻癫痫大鼠神经炎症,探究HMGB1/RAGE/NF-κB通路作为槲皮素作用新靶点的可能性。方法:将60只SD大鼠随机选取12只作为健康组,剩余大鼠构建癫痫大鼠实验模型,将造模成功的大鼠分为模型组、槲皮素高剂量组、槲皮素低剂量组、槲皮素+通路激活剂组,每组12只。观察大鼠海马组织病理变化;评估大鼠的神经行为学功能;检测大鼠海马组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-1β水平及HMGB1、RAGE、NF-κB mRNA及蛋白表达。结果:健康组大鼠海马组织结构完整;与健康组相比,模型组大鼠海马组织结构分散,存活神经元数显著降低,凋亡指数显著上升,Racine等级显著升高,海马组织TNF-α、IL-1β、IL-6含量及HMGB1、RAGE、NF-κB mRNA和蛋白表达量显著升高;与模型组相比,槲皮素低、高剂量组大鼠海马组织结构较为完整,存活神经元数显著上升,凋亡指数显著降低,Racine等级显著降低,TNF-α、IL-1β、IL-6含量及HMGB1、RAGE、NF-κB mRNA和蛋白表达量显著降低,且槲皮素高剂量组的改善效果更佳;与槲皮素高剂量组相比,槲皮素+通路激活剂组存活神经元数显著降低,凋亡指数显著上升,Racine等级显著升高,海马组织TNF-α、IL-1β、IL-6含量及HMGB1、RAGE、NF-κB mRNA和蛋白表达量显著升高。结论:槲皮素可通过抑制HMGB1/RAGE/NF-κB通路,降低相关基因mRNA和蛋白表达,从而有效减轻癫痫大鼠的神经炎症。

吴茱萸碱调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对脑梗死大鼠神经炎症的影响

目的:探讨吴茱萸碱调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对脑梗死大鼠神经炎症的影响。方法:采用大脑中动脉栓塞法构建脑梗死大鼠模型,随机分为模型组、吴茱萸碱低剂量组、吴茱萸碱高剂量组、吴茱萸碱高剂量+空载质粒组、吴茱萸碱高剂量+HMGB1过表达组,每组15只,另选取15只健康大鼠设为假手术组,以吴茱萸碱和质粒分组处理后,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)评估大鼠神经损伤;三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测大鼠脑梗死面积;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色检测大鼠海马神经元凋亡率;透射电镜观察大鼠海马神经元超微结构;酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清及脑组织促炎因子环氧化酶-2(COX-2)、白细胞介素-18(IL-18)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平;蛋白免疫印迹法检测大鼠脑组织HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠海马神经元超微结构发生损伤,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65明显升高(P<0.05);与模型组比较,吴茱萸碱低剂量组、吴茱萸碱高剂量组、吴茱萸碱高剂量+空载质粒组大鼠海马神经元超微结构损伤均减轻,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65均降低(P<0.05);吴茱萸碱高剂量组大鼠海马神经元超微结构损伤较吴茱萸碱低剂量组进一步减轻,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65进一步降低(P<0.05)。与吴茱萸碱高剂量组比较,吴茱萸碱高剂量+HMGB1过表达组大鼠海马神经元超微结构损伤加重,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65升高(P<0.05)。结论:吴茱萸碱可通过阻止HMGB1/TLR4/NF-κB信号激活而降低促炎因子表达,从而抑制神经炎症,减轻脑梗死大鼠神经功能损伤。

高迁移率族蛋白B1-糖基化终末产物/Toll样受体-核因子κB信号通路与糖尿病脑病关系的研究进展

随着经济的发展，我国居民的生活方式发生了巨大变化，糖尿病患病率正在迅速地上升。越来越多证据表明糖尿病可引起中枢神经系统损害，造成脑组织完整性和功能的损害，引起认知功能障碍，故又称糖尿病脑病（DE）。近年来有研究认为，糖尿病可能是由细胞因子介导的慢性炎症反应，炎症在糖尿病的发病机制中起重要的媒介作用[1]。高迁移率族蛋白B1（HMGB1）是促炎症因子，其作用于晚期糖基化终末产物（AGEs）和Toll样受体（TLR），激活核因子-κB（NF-κB），导致一系列级联代谢反应，高迁移率族蛋白B1-AGEs/TLR-NF-κB（HMGB1-RAGE/TLR-NF-κB）信号通路在糖尿病炎症的发生发展中可能发挥着重要作用[2]，本文就近年来关于此通路与DE的研究进展作一简要概述。

瑞马唑仑调节HMGB1-RAGE信号通路对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞焦亡的影响

目的 探讨瑞马唑仑调节高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein,HMGB1)-晚期糖基化终产物受体(receptor of advanced glycation endproducts,RAGE)信号通路对心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia-reperfusion injury,MI/RI)大鼠心肌细胞焦亡的影响。方法 按随机数字表法将50只SD雄性大鼠分为假手术组、模型组、瑞马唑仑低剂量组(5 mg/kg瑞马唑仑)、瑞马唑仑高剂量组(10 mg/kg瑞马唑仑)、瑞马唑仑高剂量+rHMGB1组(10 mg/kg瑞马唑仑及8μg/kg人重组HMGB1),每组10只。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察大鼠心肌组织病理学改变;透射电镜下观察心肌组织超微结构;免疫组织化学法检测心肌组织焦亡底物消皮素D-N端片段(N-terminal fragment of gasdermin D,GSDMD-N)表达;四氮唑红染色法检测心肌梗死面积;酶联免疫吸附法检测血清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、白细胞介素1β(interleukin 1 beta,IL-1β)、白细胞介素18(interleukin 18,IL-18)、白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)水平;硫代巴比妥酸法检测心肌组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;羟胺法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD);比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性;蛋白免疫印迹法检测心肌组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(cysteinyl aspartate specific proteinase 1,caspase-1)、GSDMD-N、HMGB1、RAGE、核转录因子(nuclear factorκB,NF-κB)、磷酸化核转录因子κB(phosphorylated-nuclear factorκB,p-NF-κB)蛋白水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织有明显损伤,心肌梗死面积百分比,血清LDH、IL-1β、IL-18水平,心肌组织中MDA含量,NLRP3、caspase-1、GSDMD-N、HMGB1、RAGE、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达显著升高(P均<0.05),血清IL-10水平、心肌组织中SOD和GSH-Px活性显著降低(P均<0.05);与模型组比较,瑞马唑仑低剂量组和瑞马唑仑高剂量组大鼠心肌组织损伤显著减轻,心肌梗死面积百分比,血清LDH、IL-1β、IL-18水平,心肌组织中MDA含量,NLRP3、caspase-1、GSDMD-N、HMGB1、RAGE、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达显著降低(P均<0.05),血清IL-10水平,心肌组织中SOD和GSH-Px活性显著升高(P均<0.05);与瑞马唑仑高剂量组比较,瑞马唑仑高剂量+rHMGB1组大鼠心肌组织损伤明显加重,心肌梗死面积百分比,血清LDH、IL-1β、IL-18水平,心肌组织中MDA含量,NLRP3、caspase-1、GSDMD-N、HMGB1、RAGE、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达显著升高(P均<0.05),血清IL-10水平、心肌组织中SOD和GSH-Px活性显著降低(P均<0.05)。结论 瑞马唑仑可能通过抑制HMGB1-RAGE信号通路,降低炎症反应和氧化应激,减轻MI/RI大鼠心肌细胞焦亡,进而改善心肌损伤。

HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB信号通路与脓毒症关系的研究进展

高迁移率族蛋白B1(HMGB1)作为晚期炎症因子可促进早期炎症因子释放,不断触发并维持下游炎症反应,其受体主要有晚期糖基化终产物受体和Toll样受体,受体活化后可激活各种信号通路,并激活NF-κB信号转导通路枢纽,进而上调各种炎症因子,促进炎症级联反应,进一步促进脓毒血症发展。本文对HMGB1介导的信号通路HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB与脓毒症关系的研究进展作一综述。

欧前胡素调节HMGB1-RAGE-NF-κB信号通路对高糖诱导的视网膜内皮细胞损伤的影响

该研究探讨欧前胡素(IMP)调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)-晚期糖基化终产物受体(RAGE)-核转录因子κB(NF-κB)信号通路对高糖诱导的视网膜血管内皮细胞损伤的影响。使用10~320μmol/L的IMP处理高糖诱导的视网膜血管内皮细胞hRECs,筛选最佳药物浓度;将视网膜血管内皮细胞hRECs细胞分为正常糖组(NG组,5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG组,25 mmol/L葡萄糖)、低浓度欧前胡素组(IMP-L组,25 mmol/L葡萄糖+20μmol/L IMP)、中浓度欧前胡素组(IMP-M组,25 mmol/L葡萄糖+40μmol/L IMP)、高浓度欧前胡素组(IMP-H组,25 mmol/L葡萄糖+80μmol/L IMP)、高浓度欧前胡素+重组HMGB1蛋白组(IMP-H+rHMGB1组,25 mmol/L葡萄糖+80μmol/L IMP+200μg/L rHMGB1)。CCK-8试剂盒检测hRECs细胞活性;流式细胞仪检测hRECs细胞凋亡的情况;管腔形成实验检测细胞血管生成;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、MDA水平和SOD水平;Western blot检测HMGB1-RAGE-NF-κB信号通路相关蛋白表达情况。结果显示,IMP可以促进高糖诱导的hRECs增殖,且呈浓度依赖性,选择浓度为20、40、80μmol/L的IMP进行后续实验;与NG组比较,HG组细胞存活率、SOD活性降低,细胞凋亡率,管腔形成数,IL-6、TNF-α、IL-1β、MDA水平及HMGB1、RAGE、NF-κB p65蛋白表达水平升高(P<0.05);与HG组比较,IMP-L组、IMP-M组、IMP-H组细胞存活率、SOD活性升高,细胞凋亡率,管腔形成数,IL-6、TNF-α、IL-1β、MDA水平及HMGB1、RAGE、NF-κB p65蛋白表达水平降低,且呈浓度依赖性(P<0.05);与IMP-H组比较,IMP-H+rHMGB1组细胞存活率、SOD活性显著降低,细胞凋亡率,管腔形成数,IL-6、TNF-α、IL-1β、MDA水平及HMGB1、RAGE、NF-κB p65蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结果表明,IMP可能通过抑制HMGB1-RAGENF-κB信号通路,降低炎症反应和细胞凋亡水平,进而减轻高糖诱导的视网膜血管内皮细胞损伤。

HMGB1及其在肺动脉高压中的研究进展

高迁移率族蛋白B1（ HMGB1）是一种在真核细胞中普遍存在的DNA结合蛋白,当释放到细胞外隙时可以触发炎症反应。 HMGB1在免疫活性细胞中主动分泌,在损伤细胞中被动释放。细胞外的HMGB1通过模式识别受体转导细胞信号,比如 Toll样受体（ TLRs ）和晚期糖基化终产物受体（ RAGE）,激活胞内 p38丝裂原活化蛋白激酶（ MAPK）、细胞外信号调节激酶1/2（ ERK1/2）、核因子（ NF）-κB 等下游信号通路,或增加转化生长因子（ TGF ）-β1和血小板源性生长因子（ PDGF ）的分泌,导致促炎因子的释放、树突细胞的成熟及平滑肌细胞的趋化和增殖。已有研究表明细胞外HMGB1在急性和慢性炎症性疾病中起作用,如脓毒症、肿瘤、关节炎等。研究表明炎症与肺动脉高压的发生、发展以及肺血管重构都相关,而阻断HMGB1信号可抑制其病理进程。因此,本文就HMGB1及其在PH中的作用进行综述。

依托咪酯对缺氧复氧诱导心肌细胞炎性损伤及HMGB1/RAGE/NF-κB通路的影响

目的:探讨麻醉诱导剂依托咪酯(Eto)在缺氧/复氧(H/R)后心肌细胞炎性损伤中的作用及其对高迁移率族蛋白B1/晚期糖基化终末产物受体/核因子κB(HMGB1/RAGE/NF-κB)通路的影响和机制。方法:随机将大鼠H9C2心肌细胞分成对照组、H/R组、Eto-L组(2 mg/L Eto预处理)、Eto-H组(4 mg/L Eto预处理)、正丁酸钠组(10 mmol/L HMGB1抑制剂正丁酸钠100μL)、Eto-H+正丁酸钠组;通过缺氧7 h后复氧2 h建立H/R心肌细胞模型,于造模前在Eto-L组、Eto-H组、正丁酸钠组及Eto-H+正丁酸钠组中分别添加相应药物处理48 h,而对照组、H/R组细胞常规培养;检测细胞上清液白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素6(IL-6)水平及乳酸脱氢酶(LDH)漏出率;分别通过苏木精-伊红(HE)染色、MTT法、流式细胞仪、比色法观察H9C2细胞形态、活力、凋亡、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性;Western blotting检测caspase-3及HMGB1/RAGE/NF-κB通路蛋白表达。结果:与对照组比较,H/R组细胞上清液中IL-1β、TNF-α及IL-6水平、LDH漏出率、细胞病理程度、凋亡率、caspase-3活性及其蛋白表达、p-NF-κB p65/NF-κB p65、RAGE、HMGB1表达水平增加,而细胞存活率降低(P<0.05);与H/R组比较,Eto-L组、Eto-H组、正丁酸钠组细胞上清液IL-1β、TNF-α及IL-6水平、LDH漏出率、细胞病理程度、凋亡率、caspase-3活性及其蛋白表达、p-NF-κB p65/NF-κB p65、RAGE、HMGB1表达水平减少,而细胞存活率增加(P<0.05),且Eto-L组、Eto-H组间上述指标比较,差异有统计学意义(P<0.05);与Eto-H组比较,Eto-H+正丁酸钠组细胞上清液IL-1β、TNF-α及IL-6水平、LDH漏出率、细胞病理程度、凋亡率、caspase-3活性及其蛋白表达、p-NF-κB p65/NF-κB p65、RAGE、HMGB1表达水平减少,而细胞存活率增加(P<0.05)。结论:Eto可以抑制H/R心肌细胞损伤,其机制可能是通过抑制HMGB1/RAGE/NF-κB通路和下调促炎性细胞因子的表达来实现。

高迁移率族蛋白B1在肝癌中的研究进展

高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是一种高度保守的非组蛋白染色质相关蛋白,与肝细胞肝癌的形成和进展有关。HMGB1参与调控细胞分化、生长、迁移和凋亡的关键信号传导途径的活化,与受体结合,并激活晚期糖基化终产物(RAGE)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、toll样受体(TLRs)、核因子-κB(NF-κB)、Src家族激酶信号通路,促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移等。HMGB1在体内和体外肝癌模型中均能诱导细胞增殖、分化、细胞死亡、血管生成、转移、炎症反应和调节免疫功能,并与肝细胞癌治疗耐药有关。HMGB1及其下游受体RAGE、TLRs、T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(TIM-3)及趋化因子受体4(CXCR4)可能是潜在的抗癌靶点,调控HMGB1的氧化还原状态及靶向特定位置HMGB1可能为肝癌治疗提供新的视角。

长期应用糖皮质激素对大鼠骨组织中HMGB1、RAGE、OPG和RANKL表达的影响

目的:观察长期应用糖皮质激素(GC)对大鼠骨组织中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、晚期糖化终产物受体(RAGE)、骨保护素(OPG)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响,探讨其导致激素性骨质疏松症的相关机制。方法:将48只健康成年SD大鼠随机分为低、中、高剂量GC组和对照组,每组12只。低、中、高剂量GC组大鼠分别给予肌肉注射醋酸泼尼松龙7.0、12.5、25.0mg·kg-1,对照组大鼠同时给予相同部位注射等量生理盐水。所有大鼠每周注射2次,干预4周后取材。ELISA法检测大鼠血清中HMGB1、OPG和RANKL水平,HE染色检测大鼠骨组织病理形态学,免疫组织化学和Western blotting法检测大鼠骨组织中HMGB1、RAGE、OPG和RANKL蛋白的表达水平。结果 :ELISA检测,各剂量GC组大鼠血清中HMGB1水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);OPG水平均较对照组降低,且随GC剂量增加OPG水平呈下降趋势,其中高剂量GC组与对照组和低、中剂量GC组OPG水平比较差异有统计学意义(P<0.05);各剂量GC组大鼠血清中RANKL水平均较对照组升高,且随GC剂量增加呈上升趋势,其中高剂量GC组与对照组和低、中剂量GC组RANKL水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色,低剂量GC组大鼠股骨组织接近正常骨组织,中剂量GC组大鼠股骨组织镜下见软骨下区出现骨小梁变细,骨小梁间隙内出现肉芽纤维组织,可见坏死骨细胞及空骨陷窝;高剂量GC组大鼠股骨组织骨小梁紊乱并存在骨折,脂肪细胞空泡变性,骨髓腔水肿,造血细胞稀少,骨小梁周边成骨细胞数量减少,多核破骨细胞增多。免疫组织化学和Western blotting法检测,各剂量GC组大鼠骨组织中HMGB1蛋白表达水平均较对照组明显升高(P<0.05),各剂量GC组大鼠HMGB1蛋白表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05);各组大鼠骨组织中RAGE蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);各剂量GC组大鼠骨组织中OPG蛋白表达水平均较对照组明显降低(P<0.05),各剂量GC组大鼠OPG蛋白表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05);中和高剂量GC组大鼠骨组织中RANKL蛋白表达水平均较对照组明显升高(P<0.05),中剂量GC组大鼠骨组织中RANKL表达低于高剂量组(P<0.05)。结论:大鼠使用过量GC后,骨组织中HMGB1水平升高,OPG/RANKL比例降低,这可能是激素性骨质疏松症的发病机制之一。

血清HMGB1、LTBP2、AGE/RAGEs水平与特发性肺纤维化患者肺功能及预后的关系

目的分析血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、潜在转化生长因子结合蛋白2(LTBP2)、晚期糖基化终产物(AGE)/晚期糖基化终产物可溶性受体(RAGEs)与特发性肺纤维化(IPF)患者肺功能和预后的关系。方法选取2017年5月—2018年3月海南省人民医院呼吸与危重症医学科收治IPF患者102例(IPF组),门诊体检健康者93例(健康对照组),检测2组血清HMGB1、LTBP2、AGE、RAGEs水平及肺功能[第1秒用力呼气容积(FEV1),FEV1与用力肺活量(FVC)比值(FEV1/FVC)、FEV1占预计值百分数(FEV1%pred),最大自主通气量(MVV)、最大自主通气量占预计值百分比(MVV%pred),肺一氧化碳弥散量(DLco)],计算AGE/RAGEs。分析血清HMGB1、LTBP2、AGE/RAGEs与肺功能指标相关性。以随访期间IPF急性加重、肺并发症、死亡为终点事件,将患者分为预后良好亚组和预后不良亚组,分析血清HMGB1、LTBP2、AGE/RAGEs对IPF预后的预测价值。结果IPF组血清HMGB1、LTBP2、AGE、AGE/RAGEs比值高于健康对照组(t=37.967、29.093、24.705、80.852,P均=0.000),RAGEs、FEV1、FEV1/FVC、FEV1%pred,MVV、MVV%pred、DLco低于健康对照组(t=33.549、7.817、10.826、10.405、10.716、12.649、17.810,P均=0.000)。IPF患者血清HMGB1、LTBP2、AGE/RAGEs水平与FEV1、FEV1/FVC、FEV1%pred、MVV、MVV%pred、DLco呈负相关(P均<0.05)。预后不良亚组血清HMGB1、LTBP2、AGE、AGE/RAGEs比值高于预后良好亚组,RAGEs低于预后良好亚组(t=4.222、11.068、6.312、61.610、3.561,P均=0.000)。受试者工作特征曲线(ROC)分析结果显示,血清HMGB1、LTBP2、AGE/RAGEs预测IPF预后的曲线下面积(AUC)分别为0.744、0.706、0.691,敏感度分别为72.30%、69.40%、68.50%,特异度分别为75.10%、71.20%、70.30%,三者联合预测IPF预后的AUC为0.802,敏感度为81.60%,特异度为78.30%,AUC大于单独检测。结论IPF患者血清HMGB1、LTBP2、AGE/RAGEs水平较正常人升高,高HMGB1、LTBP2、AGE/RAGEs与IPF患者肺功能低下和预后不良有关,可为IPF患者预后评估提供参考。

姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆及海马炎症信号通路的影响

目的:探讨喂饲姜黄素对淀粉样前体蛋白/早老素1(APP/PS1)双转基因小鼠学习记忆和海马β-淀粉样蛋白(Aβ)含量及高迁移率族蛋白1(HMGB1)、晚期糖基化终产物受体(RAGE)、Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB(NF-κB)p65表达的影响。方法:20只雄性转基因小鼠随机分为模型组(M组,n=10)和治疗组(T组,n=10),另选10只雄性同窝野生型小鼠作为对照组(C组,n=10)。T组4月龄起喂饲含姜黄素(100mg·kg-1·d-1)的饲料,M组和C组喂饲普通饲料,9月龄时进行Morris水迷宫实验,免疫组织化学和Westernblot分别检测Aβ和HMGB1、RAGE、TLR4、NF-κBp65蛋白的表达。结果:与C组比,M组水迷宫实验中逃避潜伏期延长(P<0.05),且平均跨平台次数减少(P<0.05),海马CA1区和DG区Aβ数量及IOD值增加(P<0.05),海马中HMGB1、RAGE、TLR4和NF-κBp65表达均增多(P<0.05)。与M组比,T组逃避潜伏期缩短(P<0.05),且平均跨平台次数增多,海马CA1区和DG区Aβ数量及IOD值降低(P<0.05),海马中HMGB1、RAGE、TLR4和NF-κBp65表达均减少(P<0.05)。结论:持续喂饲姜黄素5个月可显著改善APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力并减少海马Aβ含量,其机制可能与抑制海马HMGB1-RAGE/TLR4-NF-κB信号通路有关。

HMGB1/RAGE轴在结直肠癌肥大细胞浸润中的作用机制研究

目的:探究高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)轴在结直肠癌肥大细胞浸润中的作用机制。方法:将雄性BALB/c裸鼠分为正常对照组、结直肠癌模型组、NC shRNA组、HMGB1 shRNA组、PDTC组(NF-κB抑制剂),除正常对照组外,均建立结直肠癌模型。甲苯胺蓝(TB)染色观察结直肠癌组织肥大细胞浸润情况,免疫组化检测结直肠癌组织肥大细胞活性标志物类胰蛋白酶(Tryptase)表达,Western blot检测结直肠癌组织HMGB1、RAGE及其下游NF-κB p65蛋白表达,ELISA检测结直肠癌组织炎症因子TNF-α和IL-1β表达。结果:正常对照组无肿瘤生长,模型组和NC shRNA组裸鼠肿瘤体积增长基本同步,HMGB1 shRNA组与PDTC组裸鼠肿瘤体积较模型组增长缓慢。模型组和NC shRNA组肥大细胞数、Tryptase水平及HMGB1、RAGE、NF-κB p65蛋白表达、TNF-α和IL-1β水平差异均无统计学意义(P>0.05),显微镜下可观察到大量紫色脱颗粒肥大细胞和Tryptase阳性染色颗粒;HMGB1 shRNA组与PDTC组相较于模型组肥大细胞数、Tryptase水平及HMGB1、RAGE、NF-κB p65蛋白表达、TNF-α和IL-1β水平均显著下降(P<0.05),显微镜下可见少量紫色脱颗粒肥大细胞和Tryptase阳性染色颗粒。结论:HMGB1与RAGE结合可激活NF-κB信号通路,促进结直肠癌肥大细胞浸润。

茯苓酸改善多囊卵巢综合征大鼠胰岛素抵抗的作用及机制研究

目的研究茯苓酸对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠胰岛素抵抗的改善作用及机制。方法将126只雌性大鼠按随机数字表法分为空白组、PCOS组、茯苓酸低剂量组(8.33 mg/kg)、茯苓酸高剂量组(33.32 mg/kg)、炔雌醇环丙孕酮组(阳性对照组,0.34 mg/kg)、重组大鼠高迁移率族蛋白B1蛋白(rHMGB1)组(8μg/kg)和茯苓酸高剂量+rHMGB1组(33.32 mg/kg茯苓酸+8μg/kg rHMGB1),每组18只。除空白组外,其余各组大鼠均通过灌胃来曲唑混悬液的方式构建PCOS模型。建模成功后,每天给药1次,持续4周。给药结束后,检测大鼠空腹血糖、空腹胰岛素水平及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),检测大鼠血清中促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)、睾酮(T)水平及卵巢组织中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,计算大鼠卵巢系数,观察大鼠卵巢组织病理变化,检测大鼠卵巢组织中HMGB1、晚期糖基化终产物受体(RAGE)、磷酸化核因子κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达情况。结果与空白组比较,PCOS组大鼠卵巢组织病理损伤严重,空腹血糖、空腹胰岛素水平、HOMA-IR、卵巢系数升高,血清中LH和T水平升高、FSH水平降低,卵巢组织中IL-1β、TNF-α水平及HMGB1、RAGE、p-NF-κB p65蛋白表达量升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与PCOS组比较,茯苓酸低、高剂量组和炔雌醇环丙孕酮组大鼠卵巢组织病理损伤减轻,空腹血糖、空腹胰岛素水平、HOMA-IR、卵巢系数降低,血清中LH和T水平降低、FSH水平升高,卵巢组织中IL-1β、TNF-α水平及HMGB1、RAGE、p-NF-κB p65蛋白表达量降低,差异均具有统计学意义(P<0.05);rHMGB1组大鼠对应指标的变化趋势与上述给药组相反(P<0.05)。与茯苓酸高剂量组比较,茯苓酸高剂量+rHMGB1组大鼠的上述指标变化均被显著逆转(P<0.05)。结论茯苓酸可能通过抑制HMGB1/RAGE信号通路改善PCOS大鼠胰岛素抵抗并抑制其炎症反应。

基于HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路探讨大黄牡丹汤对急性胰腺炎肠损伤大鼠的干预作用及机制

目的:基于高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/晚期糖基化终产物(RAGE)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探讨大黄牡丹汤对急性胰腺炎肠损伤大鼠的干预作用及机制研究。方法:120只SPF级Wistar大鼠采用5%牛?胆酸钠逆行胰胆管注射制备急性胰腺炎(AP)肠损伤模型。随机分为正常组、模型组、大黄牡丹汤低、中、高剂量组(3.5、7、14 g·kg^(-1)),灌胃给药,奥曲肽组(1×10^(-5)g·kg^(-1)),皮下注射,每组20只,正常组和模型组大鼠给予等体积蒸馏水灌胃,于造模前1 h及造模后每隔12 h给药1次,造模后24 h收集样本。观察大鼠一般情况;生化法检测血清中淀粉酶(AMS)、C反应蛋白(CRP);酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测结肠组织中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-6(IL-6)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察胰腺和结肠组织病理形态变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中HMGB1、RAGE、NF-κB抑制因子激酶(IKK)、核转录因子-κB抑制蛋白α(IκBα)、NF-κB mRNA及蛋白表达水平。结果:观察大鼠一般情况显示,与正常组比较,模型组大鼠出现一般生存状态不佳、扭体反应、大便次数减少及便质干等情况的改变;与模型组比较,各治疗组大鼠上述症状改善;与大黄牡丹汤低剂量组比较,大黄牡丹汤高剂量组症状改善最为明显。生化法检测血清AMS、CRP含量显示,与正常组比较,模型组大鼠AMS、CRP含量明显升高(P<0.05);与模型组比较,大黄牡丹汤组大鼠AMS、CRP含量降低(P<0.05);与大黄牡丹汤低剂量组比较,大黄牡丹汤高剂量组大鼠AMS、CRP含量明显降低(P<0.05)。ELISA检测结肠组织中TNF-α、IL-1β和IL-6含量显示,与正常组比较,模型组大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显升高(P<0.05);与模型组比较,大黄牡丹汤组大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显降低(P<0.05);与大黄牡丹汤低剂量组比较,大黄牡丹汤高剂量组和奥曲肽组大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显降低(P<0.05)。HE染色结果显示,与正常组比较,模型组大鼠出现胰腺、结肠组织坏死、充血、结构不完整;与模型组比较,各治疗组大鼠的胰腺、结肠组织水肿、坏死程度明显改善;与大黄牡丹汤低剂量组比较,大黄牡丹汤高剂量组改善最为明显。Real-time PCR结果显示,与正常组比较,模型组大鼠HMGB1、RAGE、IKK、IκBα、NF-κBmRNA表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,大黄牡丹汤各剂量组大鼠HMGB1、RAGE、IKK、IκBαmRNA表达水平明显降低(P<0.05);与大黄牡丹汤低剂量组比较,大黄牡丹汤中、高剂量组合奥曲肽组大鼠HMGB1、RAGE、IKK、IκBα、NF-κB mRNA表达水平降低,其中以大黄牡丹汤高剂量组表现最为明显(P<0.05)。Western blot结果与Real-time PCR分析结果趋势一致。结论:大黄牡丹汤对急性胰腺炎模型大鼠的一般情况、炎症指标及胰腺和结肠组织病理状态有较好的改善作用,其作用机制可能与抑制HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路,减轻急性胰腺炎大鼠结肠组织细胞炎症反应有关。

二陈汤加味通过HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路对COPD大鼠细支气管炎症的影响

目的:观测二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠细支气管中高迁移率族蛋白1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)/核转录因子-κB(NF-κB)通路中关键分子表达的影响,探讨二陈汤加味通过HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路对COPD细支气管炎症的作用及分子机制。方法:60只SD大鼠随机分为6组:正常组、模型组、二陈汤加味低、中、高剂量组(5、10、20 g·kg^(-1))和丙酮酸乙酯(EP)组(HMGB1抑制剂),每组10只。以烟熏联合气管滴注脂多糖的方法制备COPD大鼠模型。二陈汤加味各干预组灌胃(ig)给药,并腹腔注射林格溶液4 mL;EP组ig等体积生理盐水,并腹腔注射EP(0.04 g·kg^(-1));正常组和模型组等体积生理盐水ig、并等体积林格溶液腹腔注射,连续干预21 d。酶联免疫吸附测定法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中HMGB1、趋化因子CXCL1和CXCL2、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测肺组织中HMGB1、RAGE和NF-κB p65 mRNA表达,免疫组化(IHC)检测细支气管组织中HMGB1、RAGE、磷酸化(p)-κB p65和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组用力肺活量(FVC)、第1秒末时间肺活量(FEV1)和FEV1/FVC均显著降低(P<0.01);BALF中HMGB1、CXCL1、CXCL2和MCP-1的含量均显著升高(P<0.01);肺组织HMGB1、RAGE、NF-κB p65 mRNA表达显著增加(P<0.01);HMGB1、RAGE、p-NF-κB p65和α-SMA蛋白表达明显增强(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,二陈汤加味中、高剂量组FEV1/FVC均明显提高(P<0.05,P<0.01);BALF中HMGB1、CXCL1、CXCL2和MCP-1含量均明显降低(P<0.05,P<0.01);HMGB1、RAGE、NF-κB p65 mRNA表达明显减少(P<0.05,P<0.01);HMGB1、RAGE、p-NF-κB p65和α-SMA蛋白表达均明显减弱(P<0.05,P<0.01)。结论:二陈汤加味能有效对抗COPD细支气管炎症反应。其机制可能与通过下调HMGB1、RAGE mRNA表达,抑制NF-κB活化,减少HMGB1、CXCL1、CXCL2和MCP-1的释放,从而抑制细支气管炎症损伤及异常修复有关。

芒柄花素对脓毒症大鼠急性肺损伤和免疫功能的影响及其机制

目的探讨芒柄花素(Formo)调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对脓毒症大鼠急性肺损伤和免疫功能的影响。方法通过盲肠结扎和穿刺方法建立脓毒症大鼠,将造模后的大鼠随机分为脓毒症组、低剂量Formo(Formo-L)组(15 mg/kg Formo)、Formo中剂量(Formo-M)组(30 mg/kg Formo)、Formo高剂量(Formo-H)组(60 mg/kg Formo)、Formo-H^(+)重组HMGB1蛋白(rHMGB1)组(60 mg/kg Formo^(+)8μg/kg rHMGB1),并以仅做切口,不进行盲肠结扎或穿刺的大鼠为假手术组。干预结束后,检测大鼠肺组织湿干比(W/D);腹部取血,流式细胞术及ELISA分别检测大鼠免疫功能及白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;苏木精-伊红(HE)染色检测右肺上叶病理学变化;Western blot检测肺组织中HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路相关的蛋白表达。结果与对照组相比,脓毒症组肺组织病理损伤严重,CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)显著降低,TNF-α,IL-1β,IL-6水平、病理损伤评分、W/D、CD8^(+)、HMGB1、RAGE、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达比较显著增加(P<0.05);与脓毒症组相比,Formo-L组、Formo-M组、Formo-H组病理损伤得到改善,CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)显著增加,TNF-α,IL-1β,IL-6水平、病理损伤评分、W/D、CD8^(+)、HMGB1、RAGE、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达显著降低,组间有差异(P<0.05);与Formo-H组相比,Formo-H^(+)rHMGB1组病理损伤加重,CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)显著降低,TNF-α,IL-1β,IL-6水平、病理损伤评分、W/D、CD8^(+)、HMGB1、RAGE、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达显著增加(P<0.05)。结论Formo可能通过抑制HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路减轻脓毒症大鼠急性肺损伤,提高免疫功能。

针刺对穴“后溪-环跳”对腰椎间盘突出症模型大鼠脊神经干组织HMGB1/RAGE通路的影响

目的 探讨针刺对穴“后溪-环跳”治疗腰椎间盘突出症的可能作用机制。方法 32只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、普通针刺组、对穴组,每组8只。除假手术组外,其余各组采用大鼠自体髓核移植法建立腰椎间盘突出症模型。于造模3天后对普通针刺组大鼠进行针刺干预,选穴“肾俞”“大肠俞”“委中”;对穴组针刺“后溪”“环跳”,毫针刺入1~2 mm,每10 min行针1次,平补平泻,留针30 min。假手术组与模型组于相同时间内每日绑缚30 min,各组均干预14天。分别于造模前1天、造模术后3天、干预14天使用热痛刺激仪检测大鼠缩爪反应所需时间作为痛阈值;治疗结束取双侧第五腰椎节段脊神经干行HE染色观察病理形态改变;采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清白细胞介素1β (IL-1β)、白细胞介素6 (IL-6)、核因子κB (NF-κB)水平;采用免疫荧光法检测脊神经干组织中高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)、晚期糖基化终产物受体(RAGE)表达,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测脊神经干组织中HMGB1、RAGE蛋白表达,采用实时荧光定量PCR法检测脊神经干组织中HMGB1、RAGE mRNA表达。结果 与造模前1天比较,造模术后3天模型组、普通针刺组、对穴组痛阈值均明显降低(P<0.05)。干预14天,与假手术组比较,模型组痛阈值明显降低(P<0.05),而普通针刺组、对穴组痛阈值较模型组明显升高(P<0.05)。HE染色结果显示,与假手术组比较,模型组第五腰椎脊神经髓鞘部分消失形成空洞,出现瓦勒氏变性;普通针刺组神经纤维部分修复;对穴组神经纤维排列较整齐,空泡样改变明显减轻,提示水肿明显减轻。与假手术组比较,模型组血清IL-1β、IL-6、NF-κB水平升高,脊神经干组织HMGB1、RAGE荧光表达增多,HMGB1、RAGE蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05)。与模型组比较,对穴组HMGB1、RAGE荧光表达均减少,血清IL-1β、IL-6、NF-κB水平和RAGE、HMGB1蛋白及mRNA表达均降低(P<0.05),且与普通针刺组比较,对穴组降低血清IL-6及HMGB1、RAGE mRNA表达方面更明显(P<0.05)。结论 针刺对穴“后溪-环跳”能够明显改善腰椎间盘突出症模型大鼠脊神经干组织空泡样变性及全身炎症反应,其机制可能与抑制脊神经干组织HMGB1/RAGE通路有关。

葛根知母药对调控HMGB1/RAGE/NF-κB通路改善糖尿病大鼠认知障碍

目的:观察葛根知母水提物对糖尿病认知障碍大鼠认知功能的影响,评价其神经保护作用并探讨其机制。方法:取雄性SD大鼠,除空白对照组外均给予高脂高糖饲料喂养,50 d后腹腔注射链脲佐菌素(STZ) 35 mg/kg建立II型糖尿病认知障碍大鼠模型。造模成功后,随机分为模型对照组、多奈哌齐0. 03g/kg组、二甲双胍0. 15g/kg组、玉液汤7. 84g/kg组、葛根知母药对4. 62 g/kg、9. 24 g/kg组。给药30 d后,Morris水迷宫法进行行为学测试,结束后大鼠取血,检测血糖;部分动物处死取血检测糖化血红蛋白,取脑用Western Blot法检测脑组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)/核转录因子(NF-κB)信号通路的蛋白表达,其余动物灌注取脑,进行RAGE和NF-κB免疫组化染色。结果:与空白对照组相比,模型组大鼠的逃避潜伏期、探索距离显著延长,且目标象限游泳时间显著缩短、站台穿越次数显著减少、NF-κB、RAGE平均灰度值显著降低、HMGB1、RAGE、pNF-кBp65、p-IкBα的表达显著上调(P <0. 05或P <0. 01);与模型对照组相比,葛根知母药对9. 24 g/kg组和玉液汤7. 84 g/kg组都可显著缩短模型大鼠的逃避潜伏期、探索距离,明显延长目标象限游泳时间、增多站台穿越次数,显著降低空腹血糖,明显增加大鼠体重、降低糖化血红蛋白水平,NF-κB、RAGE平均灰度值也明显升高,且HMGB1、RAGE、p-NF-кBp65、p-IкBα蛋白表达显著下调(P<0. 05或P <0. 01);葛根知母药对4. 62 g/kg组大鼠血糖明显降低,能够显著降低HMGB1、RAGE、p-NF-кBp65、p-IкBα的表达(P <0. 05或P <0. 01)。结论:葛根知母药对可明显改善糖尿病大鼠模型的认知功能障碍,其机制可能是通过降低血糖及糖化血红蛋白水平、调控脑内HMGB1/RAGE/NF-κB通路实现的。