尿毒症血液透析病人并发动脉粥样硬化与血清高迁移率族蛋白B1、中性粒细胞胞外诱捕网的关系

目的 探讨尿毒症血液透析病人并发动脉粥样硬化与血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)表达水平的关系。方法 选取2019年1月至2020年1月上海杨思医院收治的225例尿毒症血液透析病人为研究对象,根据是否并发动脉粥样硬化将其分为非动脉粥样硬化组119例、动脉粥样硬化组106例。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清HMGB1水平,采用荧光染色法检测血清NETs水平,采用彩色多普勒超声诊断仪检测内膜中层厚度(IMT),采用全自动生化分析仪检测生化指标钙、磷、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,并计算钙磷乘积;分析尿毒症血液透析合并动脉粥样硬化病人血清HMGB1、NETs与IMT及生化指标的相关性;分析影响尿毒症血液透析病人动脉粥样硬化发生的因素。结果 动脉粥样硬化组HMGB1[(8.94±2.33)μg/L比(6.21±1.16)μg/L]、NETs[(416.82±45.61)μg/L比(194.58±20.23)μg/L]、IMT、三酰甘油、总胆固醇、LDL-C水平及年龄高于非动脉粥样硬化组,HDL-C水平低于非动脉粥样硬化组(P<0.05)。尿毒症血液透析合并动脉粥样硬化病人血清HMGB1与NETs呈正相关(r=0.54,P<0.001);尿毒症血液透析合并动脉粥样硬化病人血清HMGB1、NETs与IMT、三酰甘油、总胆固醇、LDL-C呈正相关,与HDL-C呈负相关(P<0.05)。HMGB1、NETs是影响尿毒症血液透析病人并发动脉粥样硬化的独立危险因素(P<0.05)。结论 并发动脉粥样硬化的尿毒症血液透析病人血清HMGB1、NETs表达水平升高,二者对预测尿毒症血液透析病人动脉粥样硬化有重要意义。

胞内高迁移率族蛋白B1对高糖诱导的小鼠心脏成纤维细胞转化生长因子-β1表达的影响

目的:探讨胞内高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在高糖诱导的小鼠心脏成纤维细胞表达转化生长因子-β1(TGF-β1)中的作用。方法:酶消化法分离3周C57/BL6小鼠心脏成纤维细胞,培养并传代,实验使用2～4代细胞,波形蛋白(vimentin)免疫细胞化学染色鉴定细胞。高糖培养不同时间(0,6,12,24,48h)后分别检测成纤维细胞HMGB1、TGF-β1 mRNA的表达量。在转染siRNA后再高糖培养心脏成纤维细胞6 h,RT-PCR检测HMGB1、TGF-β1 mRNA的水平。结果:与0h相比,高糖培养6,12,24,48 h后成纤维细胞HMGB1、TGF-β1 mRNA的表达都上调。转染HMGB1 siRNA后高糖培养6 h的成纤维细胞TGF-β1表达下调。结论:HMGB1可能参与调节高糖诱导的心脏成纤维细胞的TGF-β1的表达。

胞外高迁移率族蛋白B1与缺血/再灌注损伤的关系

诸多研究发现胞内高迁移率族蛋白B1（HMGB1）可以通过活化细胞的主动分泌和受损坏死细胞的被动释放进入胞外并介导炎性反应，为一种重要的炎性介质和促炎细胞因子。近年，HMGB。在缺血／再灌注损伤中的作用受到关注，许多研究结果显示，HMGB1在肝脏、肾脏、心脏等缺血再灌注损伤中发挥重要作用，本文就有关研究进展予以综述。

高迁移率族蛋白1在鱼藤酮诱导的多巴胺能神经细胞损伤中的作用

目的:观察高迁移率族蛋白1(HMGB1)在鱼藤酮诱导的帕金森病(PD)细胞模型中的作用,探讨HMGB1在PD发病机制中的作用。方法:使用鱼藤酮作用于SH-SY5Y细胞建立PD细胞模型;免疫荧光染色观察细胞内HMGB1、α-synuclein及微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达及定位;免疫印迹法检测不同浓度鱼藤酮作用下及siRNA-HMGB1干扰HMGB1后HMGB1、LC3Ⅱ/Ⅰ、自噬底物P62及Toll样受体4(TLR4)的表达水平;通过雷帕霉素(Rap)和3-甲基腺嘌呤(3-MA)分别激活或抑制自噬,实时荧光定量PCR检测HMGB1的mRNA转录水平。结果:在PD细胞模型中,HMGB1出现胞浆转位,并与胞浆中α-synuclein及LC3颗粒样聚集物共定位;随着鱼藤酮浓度增加,HMGB1蛋白表达上调,伴有LC3II/I比例增高、P62及TLR4蛋白水平降低;Rap和3-MA分别激活或抑制自噬可引起HMGB1 mRNA的转录水平相应增加或降低;干扰HMGB1表达可抑制自噬的激活。结论:胞浆转位的HMGB1通过作用于自噬溶酶体途径参与PD的发病,可能是PD治疗的新靶点。

骨髓间充质干细胞分泌因子抑制急性肝衰竭肝细胞HMGB1的胞浆移位

目的:骨髓间充质干细胞分泌的因子(mesenchymal stem cell-derived molecules,MSC-CM)对急性肝衰竭小鼠高迁移率族蛋白B1(high mobility group box1,HMGB1)肝细胞胞浆移位和释放的影响.方法:D-氨基半乳糖(D-galactosamine,D-GaIN)和脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导建立Balb/c小鼠急性肝衰竭模型;贴壁筛选法培养纯化小鼠BMSCs,传至第2-3代更换0.05%胎牛血清培养液24h获得MSC-CM.36只健康Balb/c小鼠随机均分为肝衰竭对照组和MSC-CM治疗组.Kaplan-meier法进行生存分析,生化检测1wk内不同时间点各实验组丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)/谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST),24h取肝脏进行肝脏病理检测.ELISA检测血清HMGB1、白介素-1(interleukin-1,IL-1、肿瘤坏死因子-(tumor necrosis factor-,TNF-、IL-6和IL-10水平,免疫组织化学分析HMGB1的肝细胞表达和胞浆移位.结果:MSC-CM治疗组1wk生存率为88.9%,显著高于对照组的16.7%(P<0.05),MSC-CM治疗组24h的ALT/AST峰值显著低于对照组(P<0.01).MSC-CM治疗组在6、12和24hHMGB1水平以及24h的TNF-、IL-1、IL-6水平显著低于肝衰竭对照组(P<0.01),而抗炎因子IL-10显著高于对照组(P<0.01).MSC-CM治疗组肝脏炎症坏死和肝细胞HMGB1胞浆移位较对照组明显减轻.结论:MSC-CM治疗抑制急性肝衰竭肝细胞HMGB1胞浆移位和释放,减轻肝脏炎症反应,降低死亡率.

胞红蛋白、HMGB1在血塞通干预大鼠心脏停搏后的表达机制

目的通过建立大鼠心脏停搏复苏模型和原代培养海马神经元模型,探讨在血塞通治疗大鼠心脏骤停后,胞红蛋白、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)发挥的作用机制。方法将实验大鼠分为假手术(SO)组、心肺复苏(CPR)组和干预治疗(IVT)组。在大鼠心脏停搏/CPR后3、12、24、48和72 h分别采用免疫组织化学法、蛋白免疫印迹法及实时荧光定量(qRT)-PCR法检测海马CA1区胞红蛋白、HMGB1的平均光密度值及其蛋白和基因的表达,ELISA法检测外周血清中胞红蛋白、HMGB1的浓度。在细胞上,通过原代培养海马神经元并建立缺氧缺糖(OGD/R)模型。结果在5个时间点,SO组中胞红蛋白、HMGB1的血清浓度,海马CA1区胞红蛋白和HMGB1的mRNA表达,体外培养海马神经元中胞红蛋白、HMGB1蛋白表达及其基因表达比较差异均无统计学意义(P均>0.05);CPR组与SO组比较,差异均有统计学意义(P均<0.01);干预治疗组的表达水平与CPR组比较,各时间点差异亦均有统计学意义(P均<0.01)。在48h观察点,与SO组或对照组(未经OGD/R治疗)比较,CPR组中胞红蛋白的阳性表达降低而HMGB1蛋白的阳性表达增强,OGD/R组(经OGD/R治疗)海马神经元的凋亡率升高;与CPR组或OGD/R组比较,干预治疗组中胞红蛋白的阳性表达增强,而HMGB1蛋白的阳性表达减弱,OGD/R组海马神经元的凋亡率明显降低。结论血塞通在干预治疗大鼠心脏停搏后,细胞中胞红蛋白的表达上调,HMGB1的表达下调,抑制多条信号途径,从而抑制其他炎症因子释放而抗炎、抗凋亡,发挥脑保护作用。

胞内高迁移率族蛋白B1研究进展

高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1,HMGBl）是一种高度保守的DNA结合蛋白,HMGB1的功能取决于其分子定位,生理情况下HMGB1存在于细胞核内,具有稳定核小体的结构和促进基因重组、修复、转录等作用,有＂DNA伴侣＂之称,胞内HMGB1对心脏肥厚、心力衰竭、胰腺炎、肝缺血/再灌注损伤、脊髓小脑共济失调等具有保护作用.

高迁移率族蛋白B1在抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎中的研究进展

高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1，HMGB1）是高迁移率族核蛋白家族中的一员，由215个氨基酸组成的细胞核内非组蛋白DNA结合蛋白。HMGB1基因位于第13号染色体长臂12号位，相对分子质量约为30 000，其中有6个多态性位点已被确定。HMGB1 N端由185个氨基酸组成，包括A盒和B盒两个可以与DNA结合的功能结构域，B盒具有致炎因子特性，而A盒能竞争性抑制B盒的致炎因子活性。

普通肝素改善高迁移率族蛋白1介导的血管内皮细胞屏障通透性增加的实验研究

目的观察普通肝素(UFH)对高迁移率族蛋白1(HMGB 1)介导的人脐静脉内皮细胞屏障通透性损伤的保护作用,探讨UFH对HMGB 1介导的胞质紧密粘连蛋白-1(ZO-1)表达缺失的保护机制。方法将人脐静脉内皮细胞进行体外培养,人脐静脉内皮细胞株传代培养后分为4组(n=5):空白对照组(加入等量PBS)、HMGB 1处理组(100 ng/ml)、UFH对照组(UFH 10 U/ml)、HMGB 1及UFH处理组(100 ng/ml HMGB 1+UFH 10 U/ml)。MTT法测定内皮细胞存活率,用Transwell小室法测定单层内皮屏障通透性,用免疫荧光染色法测定ZO-1的表达分布,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测ZO-1蛋白及核因子-κB(NF-κB)的表达。结果 HMGB 1(100 ng/ml)对内皮细胞活性无抑制作用(P>0.05)。UFH预处理后可减少HMGB1所致的内皮细胞通透性增加(P<0.05)。UFH预处理后可降低HMGB 1所致内皮细胞ZO-1密闭环的减少和破坏,使ZO-1荧光强度增强,ZO-1蛋白表达增加,并使NF-κB的核易位减少。结论 UFH可保护HMGB 1介导的内皮细胞ZO-1的表达缺失,进而改善内皮细胞屏障通透性,其机制与减少NF-κB核易位相关。

CyGB和HMGB1对大鼠心搏骤停/复苏后的评价与意义

目的检测大鼠心搏骤停(CA)/心肺复苏(CPR)后胞红蛋白(CyGB)和高迁移率族蛋白Bl(HMGB1)分别在大脑海马回CA1区的表达及外周血清中的含量,以研究其对复苏后的评价及意义c方法90只健康SD大鼠,随机分为假手术(SO)组,CPR组及干预治疗(IVT)组,每组分3、12、24、48及72 h 5个观察时间点。窒息法制作大鼠CA/CPR模型。ELISA法测定血清CyGB和HMGB1的含量,采用TUNEL染色法检测海马回CA1区神经元的凋亡率,SABC法检测CyGB和HMGB1在海马回CA1区中的表达即平均光密度值(AOD)。结果海马回CA1区CPR组中的AOD:CyGB的表达在CPR后3 h明显降低,且随时间延长而增强,24 h达高峰,但48 h又降低;HMGB1的表达在3 h开始升高,CPR组分别与SO组和IVT组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。外周血清CPR组中:CyGB的含量变化与在海马回CA1区中的表达变化一致,呈正相关(r=0.883,P<0.01);HMGB1的含量与在海马回CA1区中的表达亦呈正相关(r=0.926,P<0.01),CPR组分别与SO组和IVT组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。海马回CA1区中神经元的凋亡率与HMGB1表达的AOD呈正相关(r=0.621,P<0.05)。结论CyGB与HMGB1在大脑的表达与在外周血清中的含量是一致的,其中HMGB1变化与神经元的凋亡是一致的;在大鼠CA/CPR后,CyGB有一定脑保护作用,HMGB1参与CA/CPR后损伤。因此,通过检测外周血清中CyGB和HMGB1含量对心肺脑复苏效果与预后可能有量化价值。

辛芷通窍颗粒对慢性鼻窦炎小鼠鼻窦黏膜的保护机制研究

目的:探讨辛芷通窍颗粒对慢性鼻窦炎(CRS)小鼠鼻窦黏膜的保护作用及相关机制。方法:将50只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、辛芷通窍低剂量组、辛芷通窍中剂量组、辛芷通窍高剂量组。采用开放上颌窦后接种3型荚膜型肺炎链球菌的方法建立CRS小鼠模型。辛芷通窍低剂量组予以1.4 g/kg辛芷通窍颗粒灌胃、辛芷通窍中剂量组予以2.8 g/kg辛芷通窍颗粒灌胃、辛芷通窍高剂量组予以5.6 g/kg辛芷通窍颗粒灌胃治疗。利用ELISA法检测小鼠外周血炎症因子水平;采用RT-qPCR、Western blot法检测鼻窦黏膜中相关因子表达。结果:与假手术组相比,辛芷通窍低剂量组、辛芷通窍中剂量组、辛芷通窍高剂量组小鼠外周血炎症因子水平明显低于给药前,且窦黏膜组织中TNF-α、IL-6、IL-10、IL-16、IFN-γ的mRNA及蛋白相对表达低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05)。与模型组相比,辛芷通窍低剂量组、辛芷通窍中剂量组、辛芷通窍高剂量组小鼠鼻窦黏膜组织中HMGB1、NLRP3、ASC、Cleaved caspase-1蛋白表达降低,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:辛芷通窍颗粒呈剂量依赖性地抑制HMGB1/NLRP3信号通路激活,抑制CRS小鼠鼻窦黏膜炎症水平。

扶正透邪方对耐药铜绿假单胞菌肺炎大鼠晚期炎症反应的影响

目的探索扶正透邪方对耐药铜绿假单胞菌肺炎大鼠晚期炎症反应的影响。方法12只大鼠随机分为空白组、模型组和扶正透邪组,造模成功后,空白组和模型组蒸馏水灌胃,扶正透邪组扶正透邪方灌胃。7天后采集各组外周血和肺组织,苏木精—伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)检测大鼠肺组织病理情况,酶联免疫吸附剂测定(enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA)检测外周血中高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)和白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)含量,逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerasechain reaction,RT-PCR)检测肺组织中HMGB1和核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)基因表达,蛋白免疫印迹法(western blot,WB)和免疫组化检测肺组织中HMGB1和NF-κB蛋白表达。结果HE病理表现上,模型组气管壁充血水肿,大量炎症细胞浸润,上皮细胞排列紊乱、脱落;扶正透邪组管壁较模型组光滑,气管壁肿胀、管腔狭窄和炎症细胞浸润数量较模型组明显减轻。ELISA结果显示,模型组外周血中HMGB1和IL-6的含量均明显高于空白组(P<0.05),扶正透邪组外周血中HMGB1和IL-6的含量均明显低于模型组(P<0.05)。模型组肺组织中HMGB1、NF-κB mRNA和蛋白表达量均明显高于空白组(P<0.05),扶正透邪组HMGB1、NF-κB mRNA和蛋白表达量均明显低于模型组(P<0.05)。结论扶正透邪方可减少HMGB1的释放来抑制NF-κB的核转位,进而抑制IL-6的释放,可能通过HMGB1/NF-κB/IL-6通路起到控制晚期炎症反应水平,保护肺组织的作用。

芪归银对铜绿假单胞菌致肺炎大鼠免疫调节作用初探

目的:初步探索芪归银对耐药铜绿假单胞菌(PA)致肺炎大鼠的免疫影响,为全面揭示其疗效机制奠定基础。方法:在空白和模型对照基础上,设置芪归银实验组与阿莫西林西药干预对照组。采集各组肺组织,并腹主动脉采血分离血清。检测肺组织中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的蛋白表达,血清中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度,进一步深入检测肺组织中HMGB1及其受体晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、Toll-样受体4(TLR4)的基因表达。结果:模型组大鼠肺组织HMGB1蛋白及基因表达较对照组均明显升高,芪归银可一定程度降低其蛋白和基因表达;但阿莫西林对HMGB1和受体RAGE、TLR4的基因表达影响更为显著。模型组大鼠血清中IL-1β和TNF-α浓度较对照组均明显升高,芪归银可降低二者浓度,其中,对TNF-α浓度影响较阿莫西林更为显著。结论:肺炎发生时,芪归银对肌体核心免疫网络因子HMGB1及其受体RAGE、TLR4表达均有影响,对重要信号通路效应分子IL-1β和TNF-α也有影响,更深入的疗效机制有待进一步研究揭示。

卡马西平保护小鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的:了解卡马西平对肝脏缺血再灌注的保护作用.方法:动脉夹阻断肝脏血流1 h释放形成再灌建立小鼠肝脏缺血再灌注模型.6-8周龄♂B a l b/c随机分为缺血再灌组(对照组)、卡马西平组、卡马西平+氯喹组,每组6只.生化检测各组缺血再灌不同时间点血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)水平.HE染色观察肝脏形态学变化,免疫组织化学分析肝脏高迁移率族蛋白B1(high mobility group box1,HMGB1)表达,免疫印迹检测Caspase3、Atg7、Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(light chain 3Ⅱ,LC3Ⅱ)表达.结果:卡马西平阻止缺血再灌注小鼠肝脏LC3Ⅱ和自噬相关基因Atg7与Beclin-1的表达下降.卡马西平组缺血再灌后2、6和12 h血清ALT/AST水平显著低于缺血再灌组(P<0.01).卡马西平降低缺血再灌6 h肝细胞Caspase3表达和HMGB1胞浆移位.抑制自噬的药物氯喹具有对抗卡马西平降低Caspase3表达、HMGB1胞浆移位和血清ALT/AST水平的效应.结论:卡马西平通过促进肝细胞自噬保护肝脏缺血后再灌注损伤.

实验方法与改进

ELISA检测抗荚膜组织胞浆菌抗体方法的建立；高迁移率族蛋白B1单克隆抗体制备与竞争ELISA测定法的建立;液相免疫技术的建立及其有关反应特征的探讨;贝克曼CX4生化仪上使用开放试剂测试肝功能项目的探讨;