高迁移率蛋白1/Toll样受体4信号通路与下肢动脉硬化闭塞症介入治疗后复发的相关性分析

目的研究高迁移率蛋白1/Toll样受体4信号通路(HMGB1/TLR4)与老年下肢动脉硬化闭塞症(ASO)介入治疗后复发风险的相关性。方法2020年1月~2021年1月间收治的行介入治疗的ASO病人84例,共96条病变血管,采用逆转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法于术后1周检测病人外周血单个核细胞(PBMCs)内HMGB1及TLR4 mRNA表达水平,放射免疫法及免疫比浊法检测血清内皮素-1(ET-1)及高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平。术后随访12个月,统计靶血管再狭窄情况,将血管再狭窄者纳为复发组,无狭窄者纳为对照组,比较两组外周血PBMCs内HMGB1、TLR4水平及血清hs-CRP及ET-1水平,分析以上指标与ASO介入术治疗病人血管再狭窄之间的关系。结果介入治疗后,84例病人96条病变血管均开通,随访12个月后经双下肢超声及CTA检查提示有16例病人共18条病变血管再狭窄。复发组病人外周血PBMCs内HMGB1及TLR4表达水平及血清ET-1及hs-CRP高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。复发组病人外周血PBMCs的HMGB1及TLR4表达量与血清ET-1及hs-CRP水平均呈正相关(r=0.393,0.378,0.411,0.407,P<0.05)。结论HMGB1/TLR4信号通路可能通过激活炎症因子释放,促进血管损伤,参与ASO病人介入术后复发。

桑白皮提取物抑制高迁移率族蛋白/Toll样受体4通路对肺炎支原体肺炎大鼠的保护机制

目的:探究桑白皮提取物对肺炎支原体(MP)肺炎大鼠的药效,以及对高迁移率族蛋白(HMGB-1)/Toll样受体4(TLR4)信号通路的影响。方法:将Wistar雄性大鼠随机分为对照组、MP肺炎模型组、阿奇霉素(阳性对照)组及桑白皮提取物低、中、高剂量组[2、4、8 g/(kg·d)],每组各12只。除对照组外,其余大鼠构建MP肺炎大鼠模型,并给予相应剂量的药物处理。显微镜下计数肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞计数;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中炎性细胞因子水平;苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理变化;Western blotting法和免疫组化检测肺组织HMGB-1、TLR4、p-NF-κB p65蛋白表达水平。结果:对照组大鼠肺组织细胞排列正常,无病变;MP肺炎模型组大鼠肺组织异常,大量炎性细胞浸润;经桑白皮提取物给药后,大鼠肺组织损伤明显减轻,炎性细胞浸润明显减少。与对照组相比,MP肺炎模型组大鼠肺系数、BALF中炎性细胞计数、血清中白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平及肺组织中HMGB-1、TLR4、p-NF-κB p65蛋白水平升高,IL-10水平降低(P<0.05)。与模型组相比,桑白皮提取物各剂量组和阿奇霉素组大鼠上述指标趋势相反(P<0.05)。结论:桑白皮提取物可能通过抑制HMGB-1/TLR4信号通路,减轻炎症反应,发挥对MP肺炎大鼠的保护作用。

输尿管镜碎石术后发热性尿路感染危险因素及血清β防御素2高迁移率族蛋白B1 Toll样受体4早期预测价值

目的 探讨泌尿结石疾病采取输尿管镜碎石术治疗术后发生发热性尿路感染的相关危险因素,观察血清β防御素2、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)以及Toll样受体4(TLR4)对早期预测尿路感染的价值。方法 回顾性分析122例行输尿管镜碎石术治疗者的临床资料,根据术后是否发生发热性尿路感染分成感染组与未感染组,记录患者资料,分析危险因素,此外采集2组血液分离血清,测定血清β防御素2、HMGB1、TLR4水平。结果 术后35例(28.7%)发生发热性尿路感染,多因素分析显示年龄≥60岁、手术时间≥60 min、泌尿道手术史、合并糖尿病、导尿管留置时间≥72 h、住院时间≥7 d均是输尿管镜碎石术患者术后发热性尿路感染独立危险因素(P=0.023、0.014、0.016、0.019、0.008、0.011,OR值=2.154、3.021、2.451、2.331、2.025、2.415);感染组血清β防御素2、HMGB1、TLR4检测水平高于未感染组(t=10.48、28.47、22.86,P<0.05)。结论 输尿管镜碎石术,年龄、手术时间、泌尿手术室、合并糖尿管、导尿管留置与住院时间为术后发热性尿路感染的相关危险因素,需加强防范,术后通过检测血清β防御素2、HMGB1、TLR4水平对早期预测感染价值突出,值得推广。

Toll样受体4、降钙素原、高迁移率族蛋白B1对颅内肿瘤患儿术后并发重症肺炎的预测价值

目的探讨Toll样受体4(TLR4)、降钙素原(PCT)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对颅内肿瘤患儿术后并发重症肺炎的预测价值。方法根据颅内肿瘤切除术后是否并发重症肺炎将65例颅内肿瘤患儿分为观察组(n=30,并发重症肺炎)和对照组(n=35,未并发重症肺炎)。收集两组患儿的临床资料,采用Logistic回归模型分析颅内肿瘤患儿术后并发重症肺炎的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),分析TLR4、PCT、HMGB1对颅内肿瘤患儿术后并发重症肺炎的预测价值。结果单因素分析结果显示,观察组中术前格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分﹤8分、引流管留置时间≥3天、重症监护室(ICU)住院时间≥7天的患儿比例及TLR4、PCT、HMGB1水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,术前GCS评分﹤8分、引流管留置时间≥3天、ICU住院时间≥7天及TLR4、PCT、HMGB1升高均是颅内肿瘤患儿术后并发重症肺炎的独立危险因素(P﹤0.05)。ROC曲线显示,TLR4、PCT、HMGB1预测颅内肿瘤患儿术后并发重症肺炎的AUC分别为0.838、0.955、0.827。结论TLR4、PCT、HMGB1可作为预测颅内肿瘤患儿术后并发重症肺炎的重要指标。

经外泌体释放的高迁移率族蛋白B1在菌群紊乱非酒精性脂肪性肝病小鼠中的表达及Toll样受体4信号的调控作用

目的探讨非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠中肠源性及肝源性高迁移率族蛋白B1(HMGB1)经外泌体的释放情况及其调控途径。方法15只雄性8周龄野生型C57BL/6J小鼠及10只合并肠道菌群紊乱的NAFLD小鼠(ASC-/-)模型。10只野生型小鼠喂食正常饲料(ND)为正常对照组、喂养高脂饮食(HFD)为高脂饮食组,每组5只,另外5只用于了解造模情况。10只ASC-/-小鼠分别喂养ND(菌群紊乱组)及HFD(高脂菌群紊乱组),每组5只。共喂养8周。采用共聚焦显微镜检测肝脏及肠黏膜外泌体标志物与HMGB1共定位情况;采用Western blotting及PCR等方法检测外泌体中HMGB1含量。通过棕榈酸(PA)及脂多糖(LPS)处理AML12细胞24 h构建体外模型,采用Western blotting检测HMGB1/CD63水平,并通过siRNA干预探讨经外泌体释放的调控机制。结果高脂饮食组的外泌体分泌较正常对照组增多[(3.5±0.2)ng/ml vs.(1.1±0.3)ng/ml,P<0.05],高脂菌群紊乱组的外泌体亦高于菌群紊乱组[(3.2±0.2)ng/ml vs.(1.9±0.4)ng/ml,P<0.05]。免疫荧光检测结果显示,体内实验高脂饮食组与正常对照组比较,体外实验高脂内毒素组与空白对照组比较,外泌体标记物(ALP或VPS16)与HMGB1的共定位增加。PCR检测发现,高脂饮食组肝细胞外泌体中的HMGB1较正常对照组升高(41.5±10.2 vs.1.3±0.3,P<0.05),高脂菌群紊乱组较菌群紊乱组升高(48.6±7.2 vs.1.5±0.5,P<0.05);高脂饮食组TLR4较正常对照组升高(13.8±6.2 vs.2.8±0.9,P<0.05),高脂菌群紊乱组较菌群紊乱组升高(22.6±4.1 vs.2.5±1.5,P<0.05)。在肠黏膜细胞中,高脂饮食组较正常对照组(0.6±0.2 vs.0.4±0.1,P<0.05)及高脂菌群紊乱组较菌群紊乱组(0.9±0.2 vs.0.5±0.1,P<0.05)中HMGB1与外泌体标记物(CD63)共显影增加。在体外实验中,内毒素组、高脂内毒素组外泌体的HMGB1(5.1±0.8,5.5±0.7)均较空白对照组(3.8±0.6)增加(P<0.05),而siRNA干预组与空白对照组比较无明显差异(3.7±0.6 vs.3.8±0.6,P>0.05)。结论在高脂饮食及肠道菌群紊乱环境下,HMGB1在肝细胞及肠细胞中经外泌体释放,并受TLR4调控,可能是促进脂肪性肝炎发展的因素之一。

螺内酯对肢体缺血再灌注心肌损伤高迁移率族蛋白B1与Toll样受体4信号通路的影响

目的研究醛固酮受体拮抗剂螺内酯减轻肢体缺血再灌注致心肌损伤的信号传导机制。方法选择24只雄性Wistar大鼠,按随机数字法分为对照组、缺血再灌注组(缺血4 h再灌注4 h)和螺内酯组(建模前,螺内酯每日20 mg/kg灌胃,连续6 d),每组8只。观察各组大鼠血浆肌钙蛋白I(cTnI)水平;血浆和心肌白细胞介素6(IL-6)和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平变化,用实时荧光定量PCR技术测大鼠心肌HMGB1、Toll受体4(TLR4)基因相对表达,免疫组织化学染色观察大鼠心肌HMGB1、TLR4蛋白表达。结果与对照组比较,缺血再灌注组大鼠血浆cTnI、血浆IL-6和心肌IL-6、血浆HMGB1和心肌HMGB1水平明显升高(P<0.05),心肌HMGB1 mRNA和TLR4 mRNA相对表达显著上调(P<0.05)。与缺血再灌注组比较,螺内酯组大鼠血浆cTnI、IL-6、HMGB1水平明显下降[(0.179±0.068)U/L vs(0.476±0.106)U/L,(102.05±15.17)ng/L vs(150.70±28.85)ng/L,(1.07±0.39)μg/L vs(2.48±0.68)μg/L,P<0.05],心肌IL-6、HMGB1水平明显降低[(66.26±20.44)pg/mg vs(117.02±21.44)pg/mg,(14.22±3.44)ng/mg vs(27.93±5.58)ng/mg,P<0.05],心肌HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达显著下调(P<0.05)。对照组大鼠心肌细胞可见少量散在HMGB1和TLR4棕黄色阳性颗粒,缺血再灌注组大鼠心肌细胞内可见较多HMGB1、TLR4棕黄色阳性颗粒,螺内酯组心肌细胞HMGB1、TLR4棕黄色阳性颗粒较缺血再灌注组明显减少。结论醛固酮受体拮抗剂螺内酯能减轻肢体缺血再灌注后心肌损伤及炎性反应,机制可能与抑制HMGB1-TLR4信号通路有关。

大承气汤抑制高迁移率族蛋白1-Toll样受体4信号通路减轻炎症反应改善重症胰腺炎大鼠肾损伤

目的研究大承气汤(DCQD)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肾损伤的作用及机制。方法60只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(Sham)、SAP组,DCQD治疗组和r-HMGB1组各15只。经胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠构建大鼠SAP模型。评估各组肾脏病理形态,血清中淀粉酶(AMS)、脂肪酶(LIS)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)和高迁移率族蛋白1(HMGB1)含量,血清和肾脏白介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达及肾脏HMGB1、乙酰化HMGB1(Acetyl-HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)、Myd88、p-p65和p65蛋白表达。结果与Sham组比较,SAP组肾脏病理损伤加重,AMS、LIS、Cr、BUN、HMGB1、IL-6、MCP-1、TNF-α、Acety-HMGB1、TLR4、Myd88和p-p65的表达增高(P<0.05);与SAP组比较,DCQD组肾脏病理损伤减轻,AMS、LIS、Cr、BUN、HMGB1、IL-6、MCP-1、TNF-α、Acety-HMGB1、TLR-4、Myd88和p-p65的表达降低(P<0.05);与DCQD组比较,r-HMGB1组肾脏病理损伤加重,AMS、LIS、Cr、BUN、HMGB1、IL-6、MCP-1、TNF-α、Acety-HMGB1、TLR-4、Myd88和p-p65的表达增高(P<0.05)。四组间p65表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论大承气汤对SAP诱发的肾损伤有保护作用,其作用机制与促进HMGB1去乙酰化修饰,继而抑制HMGB1-TLR-4/NF-κB介导的炎症反应相关。

高迁移率蛋白B1介导Toll样受体信号通路的研究进展

高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1 protein,HMGB1)是核内一类非组蛋白DNA结合蛋白,属于损伤相关分子模式(damage-associated molecular patterns,DAMPs),参与DNA复制、重组、修复和基因转录调控等。HMGB1能通过Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)等激活固有免疫以及诱导T细胞分化成熟启动适应性免疫应答,与多种自身免疫性疾病、炎症性疾病和肿瘤等关系密切。目前关于HMGB1介导TLR信号通路在某些疾病中的作用的研究较多,HMGB1介导Toll样受体信号通路参与多种病理过程具有广阔的临床前景。

基于高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4信号途径研究慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉发病过程中炎性因子的表达

目的探讨基于高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)信号研究慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyp,CRSwNP)发病过程中炎性因子的表达。方法HE检测CRSwNP中的嗜酸细胞;免疫组织化学、qRT-PCR和Western blot检测CRSwNP中HMGB1的表达;qRT-PCR检测CRSwNP中IL-4和IL-13的表达;ELISA检测HMGB1(HMGB1/TLR4通路)对人鼻黏膜上皮细胞中IL-4和IL-13表达的影响。结果CRSwNP中嗜酸细胞浸润增加(P<0.001),HMGB1表达上调(P<0.001),IL-4 mRNA和IL-13 mRNA的表达增加(P均<0.01);HMGB1使人鼻黏膜上皮细胞中IL-4和IL-13的表达增加(P均<0.001);与HMGB1(100 ng/ml)孵育组比较,加入抗TLR4抗体孵育后人鼻黏膜上皮细胞中IL-4和IL-13的表达水平降低(P均<0.001)。结论CRSwNP组织中HMGB1高表达。脂多糖刺激人鼻黏膜上皮细胞中HMGB1的产生,进而通过TLR4上调人鼻黏膜上皮细胞中IL-4和IL-13的产生。

高迁移率族蛋白B1和Toll样受体4与哮喘气道炎症的关系及维生素D的作用

目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和Toll样受体4(TLR4)与气道炎症的关系及维生素D的作用。方法 BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组和1,25-(OH)2D3干预组(每组8只)。采用HE染色观察小鼠肺组织病理学变化并应用计算机图像系统测定支气管壁厚度,采用免疫组化法观察肺组织HMGB1和TLR4表达,同时收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和外周血,将BALF进行细胞学检测,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF和外周血中HMGB1、TLR-4、白介素-4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)含量。结果哮喘组小鼠肺组织HMGB1和TLR4表达较强,干预组表达较弱。哮喘组BALF中白细胞总数及嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞比例明显升高,单核/巨噬细胞比例明显下降(均为P<0.05);干预组BALF中白细胞总数及嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞比例明显下降,单核/巨噬细胞比例明显上升(均为P<0.05)。哮喘组BALF和外周血中HMGB1、TLR4和IL-4含量均明显高于对照组,IFN-γ含量均明显低于对照组(均为P<0.05);干预组BALF和外周血中HMGB1、TLR4和IL-4含量均明显低于哮喘组,IFN-γ含量明显高于哮喘组(均为P<0.05)。BALF中HMGB1和TLR4含量分别与细胞总数和IL-4浓度均呈正相关(r1为0.796、0.730;r2为0.695、0.648;均为P<0.05)。结论 HMGB1和TLR4与气道炎症和免疫紊乱有关;适量1,25-(OH)2D3可减轻气道炎症,可能与调节Th1/Th2细胞平衡有关。

高迁移率族蛋白B1、Toll样受体4在脓毒症大鼠心肌组织中表达及意义

目的探讨高迁移率族蛋白(HMG)B1、Toll样受体(TLR)4在脓毒症大鼠心肌组织中表达及意义。方法选取清洁级SD大鼠50只,随机分为正常对照组、假手术组和模型组,其中模型组再分为模型12、24、48 h组,每组10只,采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症大鼠模型,采用免疫组化染色检测心肌组织HMGB1表达,酶联免疫吸附检测TLR4表达,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测HMGB1和TLR4 mRNA表达。结果正常对照组和假手术组心肌基本正常,模型12、24、48 h组可见心肌细胞水肿,炎症细胞浸润,间质血管充血,心肌细胞坏死明显;模型12、24、48 h组心肌组织HBGB1的OD值、TLR4及HBGB1 mRNA和TLR4 mRNA相对表达量明显高于正常对照组和假手术组(P<0.05),其中模型24 h组心肌组织HBGB1的OD值、TLR4及HBGB1mRNA和TLR4 mRNA相对表达量分别为0.846±0.103、(24.18±4.10)ng/ml、3.511±0.414和3.671±0.501,明显高于模型12、48 h组(P<0.05);HMGB1 mRNA和TLR4 mRNA相对表达量呈正相关(r=0.611,P<0.05)。结论 HMGB1和TLR4在脓毒症大鼠心肌组织中表达上调,可能在脓毒症心肌损伤中有重要作用。

高迁移率族蛋白1、Toll样受体4和血管细胞黏附因子1与狼疮性肾炎血脂异常的关系

目的探讨高迁移率族蛋白1(high mobility group protein,HMGB-1)、Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)和血管细胞黏附因子1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)与狼疮性肾炎(LN)血脂异常和动脉粥样硬化(atheroscleros,AS)的关系。方法收集20例正常健康人、30例系统性红斑狼疮(SLE)无肾脏损害和35例LN患者外周静脉血,检测血脂水平、HMGB1mRNA、TLR-4mRNA、血清HMGB1蛋白水平、外周血单核细胞CD14+/VCAM-1表达。结果 LN组患者血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)明显高于SLE组和正常对照组(P<0.01);LN组患者血清中HMGB1表达量(9.86±1.54)g/L高于正常对照组(7.85±0.75)g/L和SLE组(7.46±1.53)g/L;HMGB1mRNA和TLR4mRNA表达亦升高(P<0.01),SLE组和正常对照组差异无统计学意义;与SLE组和正常对照组比较,LN组单核细胞中CD14+/VCAM-1表达明显增强;在LN组患者外周血中HMGB1表达与TLR4、血脂(TG、LDL-C)呈正相关(r=0.915、0.536、0.448,P<0.05或<0.01)。结论在LN发病过程中晚期炎症介质HMGB1可能通过与TLR4结合,促进单核细胞表面VCAM-1表达,从而引起血脂异常,参与AS的形成。

脓毒症大鼠肝组织高迁移率族蛋白B1和Toll样受体4基因的表达及相关性

目的探讨脓毒症大鼠肝组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和Toll样受体4(TLR4)mRNA的表达变化及其相互关系。方法采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制成脓毒症大鼠模型。将50只Wistar大鼠分成正常对照组(10只)和CLP组(40只),CLP组分别于CLP术后6、12、18、24 h各处死10只大鼠,应用实时聚合酶链反应检测肝脏组织HMGB1和TLR4 mRNA的表达。结果正常对照组大鼠肝脏组织存在微量的HMGB1、TLR4 mRNA表达。脓毒症组大鼠CLP术后各时间点的HMGB1、TLR4 mRNA表达均显著高于正常对照组(P值均<0.01),CPL术后6 h HMGB1、TLR4 mRNA表达开始升高,至12 h达峰值,18 h后开始下降,各时间点间HMGB1、TLR4 mRNA表达的差异均有统计学意义(P值均<0.05)。直线相关分析表明,脓毒症大鼠肝脏组织HMGB1 mRNA与TLR4 mRNA的表达呈正相关(r=0.90,P=0.04)。结论HMGB1可能通过TLR4进一步激活炎性细胞,引起下游炎性因子释放的瀑布效应。

新诊断2型糖尿病患者血清高迁移率族蛋白1和Toll样受体4水平变化及其与胰岛素抵抗的关系研究

目的探讨新诊断2型糖尿病(T2DM)患者血清高迁移率族蛋白1(HMGB1)和Toll样受体4(TLR4)表达水平及其与胰岛素抵抗的关系。方法选取2011年6—11月在我院内分泌科就诊的新诊断T2DM患者60例(T2DM组)及同期在我院体检的健康者30例(NC组)。观察两组受检者的空腹血清HMGB1和TLR4水平,并计算其胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)、胰岛素敏感性指数(ISI),并将HMGB1、TLR4与其他观察指标(如血糖、血脂、肝功能、胰岛素)进行单因素相关分析,然后进行多元逐步回归分析。结果(1)T2DM组患者血清HMGB1水平为(89.8±13.4)μg/L,TLR4水平为(35.8±3.1)μg/L,NC组分别为(58.8±10.4)μg/L和(21.6±3.6)μg/L,两组HMGB1、TLR4水平比较差异均有统计学意义(t=11.059,19.373;P<0.01)。(2)单因素相关分析显示,血清HMGB1及TLR4均与体质指数(BMI)、三酰甘油(TG)、空腹血糖(FPG)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)呈正相关,而与HOMA-β、ISI呈负相关,且HMGB1与TLR4亦呈正相关(P均<0.05)。(3)多元逐步回归分析发现,TLR4为影响HMGB1的最显著因素(β=0.281,P=0.000);HMGB1、HOMA-β、ISI为影响TLR4最显著的因素(β值分别为-4.146、-4.325和-5.061;P<0.05)。结论 T2DM患者血清HMGB1、TLR4均显著升高;且血清HMGB1与TLR4呈正相关;血清HMGB1与TLR4水平升高可能参与了胰岛素抵抗及T2DM的发生、发展。

高迁移率族蛋白B1对小鼠调节性T细胞Toll样受体4表达的影响

目的观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对调节性T细胞(Treg)Toll样受体4(TLR4)表达的影响,初步探讨其与Treg免疫活性的关系。方法用免疫磁珠法分离正常C3H/HeN(TLR4受体野生型)小鼠脾脏CD4+CD25+Treg。采用可溶性抗CD3抗体(1mg/L)和抗CD28抗体(1mg/L)辅助活化,观察不同浓度HMGB1(0、10、100、1000μg/L)刺激不同时间(24、48、72h)后TregTLR4表达的时间-效应关系和剂量-效应关系。结果以100μg/L浓度的HMGB1刺激,TregTLR4在24、48和72h表达水平均明显受抑(P均<0.01),但各时间点组间比较差异无统计学意义(P均>0.05);不同剂量HMGB1刺激48h可诱导TregTLR4表达水平下调,其中以100μg/L、1000μg/LHMGB1作用时TregTLR4表达降低尤为明显(P<0.05和P<0.01)。结论HMGB1能显著诱导Treg表达TLR4下调,进而参与调节Treg的免疫活性。

高迁移率族蛋白B1和Toll样受体4轴与老年高血压脑出血血肿体积及预后的关系

目的研究血清高迁移率族蛋白B 1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)轴及其下游炎性因子与老年高血压脑出血血肿体积及预后的关系。方法选取2017年6月~2019年9月于我院收治的240例老年高血压脑出血患者作为研究组,选取同时段于我院接受治疗的100例单纯性高血压患者作为对照组。行头颅CT检测血肿体积,采用酶联免疫吸附法检测受试者血清HMGB1、TLR4、髓样分化因子(MyD88)、NF-κB、TNF-α表达水平。比较2组受试者基线资料以及HMGB1、TLR4轴及其下游炎性因子水平。采用Pearson相关性分析患者血清HMGB1、TLR4轴及其下游炎性因子水平与血肿体积的相关性。患者均随访1年,共5例失访。根据预后情况分为预后良好165例、预后不良70例,比较2组患者HMGB1、TLR4轴及其下游炎性因子水平,用ROC曲线分析血清HMGB1、TLR4轴及其下游炎性因子对预后的预测价值。结果对照组血清HMGB1、TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α水平均显著低于研究组,差异有统计学意义(P<0.01)。Pearson相关性分析显示,血清HMGB1、TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α水平与血肿体积均呈正相关(r值分别为0.452、0.496、0.485、0.508、0.468,P<0.05)。随访1年,70.21%患者预后良好,29.79%患者预后不良。预后不良患者的血清HMGB1、TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α水平均明显高于预后良好患者(P<0.01)。ROC曲线分析显示,HMGB1、TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α预测预后不良的曲线下面积分别为0.821(95%CI:0.762~0.880)、0.799(95%CI:0.737~0.861)、0.812(95%CI:0.754~0.869)、0.822(95%CI:0.762~0.882)、0.773(95%CI:0.705~0.840)。结论老年高血压脑出血患者的HMGB1、TLR4轴及下游炎性因子均处于高表达状态,表达水平与血肿体积呈正相关,具有较高的预后预测价值。

乌司他丁基于高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4/核因子-κB通路对急性胃肠损伤家兔肠屏障功能保护机制

目的探讨乌司他丁基于高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路对严重多发伤并急性胃肠损伤家兔模型肠屏障功能保护机制。方法40只家兔,平均分为4组,对照组(未建立严重多发伤并急性胃肠损伤),损伤组、药物对照组和干预组均建立严重多发伤并急性胃肠损伤模型。建模成功后药物对照组注射丙氨酰谷氨酰胺1.2 g/kg,干预组腹腔注射100000 U/kg的乌司他丁,8 h一次,连续7 d。其余家兔同部位注射等体积生理盐水。抽取静脉血检测肠黏膜屏障、炎症及应激指标,HE染色检测小肠病理形态,HMGB1、TLR4、NF-κB检测采用免疫印迹及聚合酶链式反应法。结果损伤组肠脂肪酸结合蛋白、二胺氧化酶、D乳酸、降钙素原和C反应蛋白均高于对照组(P<0.05),药物对照组和干预组上述指标均低于损伤组,且干预组低于药物对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,损伤组丙二醛(MDA)升高,超氧化物岐化酶(SOD)降低;与损伤组比较,药物对照组和干预组MDA降低,SOD升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。各组家兔小肠组织中HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白及mRNA比较存在差异,损伤组HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白及mRNA高于对照组,与损伤组比较,药物对照组和干预组上述指标降低,且干预组低于药物对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论乌司他丁能够提高严重多发伤并急性胃肠损伤家兔模型肠屏障功能,改善炎症及应激,并具有浓度依赖性,其作用机制与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路相关。

高迁移率族蛋白1-Toll样受体4对大鼠心肌缺血再灌注损伤后炎症反应的影响

目的观察高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)-Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)对大鼠心肌缺血再灌注损伤后炎症反应的影响。方法将84只SD大鼠随机分为假手术组,缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion,I/R)6h组、I/R 72h组、I/R+anti-HMGB1处理(I/R+anti-HMGB1)组、I/R+IgG control处理(I/R+IgG control)组、P5779预处理后I/R(P5779+I/R)组、林格液预处理后I/R(control+I/R)组,每组12只。采用冠状动脉结扎45min再灌注法建立大鼠I/R模型,再灌注时间为6h、72h时分别处死大鼠,取缺血区组织进行检测。苏木精-伊红染色(hematoxylin and eosin staining,HE染色)观察心肌组织结构形态,反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测心肌组织HMGB1、TLR4、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)、细胞表面趋化因子受体2(cell chemokine receptor 2,CCR2)、白介素-6(interleukin 6,IL-6)的mRNA水平。结果与假手术组比较,缺血再灌注大鼠心肌组织HMGB1、TLR4、MCP-1、CCR2、IL-6显著升高(P<0.05),再灌注6h时IL-6水平较72h时高,但HMGB1、TLR4、MCP-1、CCR2则在损伤后72h更高,I/R+anti-HMGB1组TLR4、MCP-1、CCR2、IL6表达较I/R组显著降低(P<0.05),P5779+I/R组大鼠缺血再灌注损伤后组织HMGB1、TLR4、MCP-1、CCR2、IL-6较I/R组大鼠明显降低(P<0.05)。结论HMGB1-TLR4促进了大鼠缺血再灌注损伤后的心肌炎症反应。

应用高迁移率族蛋白B1与单核细胞上Toll样受体4探索系统性红斑狼疮的病情活动

目的通过检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及其外周血单核细胞上Toll样受体4(TLR4)的表达,评价其在SLE病情进展中的作用。方法随机选取SLE患者40例,活动期与稳定期各20例,健康对照组20名,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中HMGB1蛋白的表达,采用流式细胞术(FCM)分析外周血单核细胞上TLR4的表达。统计学分析其与SLE临床及实验室指标间的相关性。结果 SLE活动组血清HMGB1表达水平较稳定组SLE和健康对照组明显增高(P<0.05),而SLE稳定组和健康对照组之间血清HMGB1表达水平差异无统计学意义(P>0.05);活动组SLE患者外周血单核细胞TLR4的表达较稳定组SLE和健康对照组相比呈上调趋势,而TLR4的表达模式在SLE稳定组和健康对照组之间差异无统计学意义;血清中HMGB1的表达水平与单核细胞表面TLR4的表达呈正相关。结论血清HMGB1和外周血单核细胞表面TLR4均参与了SLE的病情发展过程,且其在SLE发病机制中可能具有协同作用。

异丙酚对心肌缺血再灌注损伤大鼠模型Toll样受体4及高迁移率族蛋白1表达的影响

目的探讨异丙酚对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠模型的保护机制。方法将60只大鼠随机分为假手术组(A组)、假手术联合异丙酚组(B组)、心肌缺血再灌注组(C组)、心肌缺血再灌注联合异丙酚组(D组)。A组于左心耳根部2 mm处穿线后,不夹闭左冠状动脉前降支及心大静脉,60 min后缝合;B组手术开始静脉泵入异丙酚6 mg/kg至术后60 min;C组建立心肌缺血再灌注模型;D组建模前静脉泵入异丙酚6 mg/kg至术后60 min。HE染色观察大鼠心肌组织病理学变化;TUNEL法检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的mRNA表达;Western Blot检测高迁移率族蛋白1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR-4)蛋白量表达。结果A组、B组大鼠心肌纤维结构未见明显异常,C组大鼠心肌细胞损伤明显,D组心肌细胞损伤程度轻于C组。C组心肌凋亡指数为(0.39±0.05)%,高于A组的(0.01±0.02)%、B组的(0.01±0.03)%、D组的(0.17±0.03)%,差异有统计学意义(t=15.36、15.44、9.73,P<0.01)。C组、D组大鼠心肌TNF-α、IL-6的mRNA表达水平高于A组,差异有统计学意义(t=16.26、8.04、17.66、11.83,P=0.01、0.02、0.01、0.01);D组大鼠心肌TNF-α、IL-6的mRNA表达水平低于C组,差异有统计学意义(t=9.04、8.55,P=0.03、0.04)。C组、D组大鼠心肌TLR4、HMGB1蛋白表达水平高于A组,差异有统计学意义(t=15.87、9.11、11.95、8.73,P<0.01);D组大鼠心肌TLR4、HMGB1蛋白表达水平低于C组,差异有统计学意义(t=10.02、9.83,P=0.03、0.03)。结论异丙酚可减轻大鼠MIRI介导的心肌组织损伤及炎症反应,其机制可能与下调心肌组织中TLR4、HMGB1有关。