用于水生病原菌的3种高通量活菌计数方法的比较

以一株副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)作为研究对象,比较了MTT[3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐]比色法、ATP生物发光法和高通量生长曲线法在活细菌高通量计数上的应用效果。用96孔培养板进行不同浓度细菌活菌计数,确定了上述3种方法在副溶血弧菌活菌计数的标准曲线和线性范围。结果显示,副溶血弧菌的MTT比色法以DMSO溶解的MTT产物甲瓒在555 nm的吸光度(OD555 nm)为计数依据,活菌数的对数(Lg C)与Lg OD555 nm线性关系的标准曲线为Lg C=(1.0439±0.0200)LgOD555 nm+(8.0565±0.0125),相关系数R2=0.9965,线性检测范围为7.8×106~2.5×108CFU/ml;ATP生物发光法以ATP产生的相对发光度值(RLU)为计数依据,Lg C与LgRUL线性关系的标准曲线为Lg C=(0.9590±0.0065)LgRLU+(0.9949±0.0366),相关系数R2=0.9994,线性检测范围为1.0×104~3.0×108 CFU/ml;高通量生长曲线法以生长曲线达到拐点的时间(Ts)为计数依据,Lg C与Ts线性关系的标准曲线为Lg C=-(0.8727±0.0230)Ts+(9.0128±0.1572),相关系数R2=0.9924,线性检测范围为1.0×100~1.0×107 CFU/ml。用3种方法对实际菌液测量并与平板计数法比较表明,ATP生物发光法与高通量生长曲线法有很好的准确性,MTT比色法准确度稍差,而高通量生长曲线法有最宽的线性范围,也最适合高通量测定。