基于JAK/STAT信号通路的高通量药物筛选细胞模型的建立

目的 建立基于JAK STAT信号通路的高通量药物筛选细胞模型 ,筛选调节免疫系统、造血系统和抗肿瘤药物。方法 构建以串连的多个STAT的DNA结合序列为调控序列 ,以荧光酶基因作为报告基因的表达载体。通过将该载体分别转入体外培养的不同细胞系中使之稳定表达 ,建立具有激活STAT活性的药物筛选模型 ,并利用多个抗过敏和抗肿瘤药物样品进行检测。结果 建立多株药物筛选细胞模型 ,筛选方法简便 ,操作容易 ,灵敏度高 ,结果稳定。

维甲酸受体为靶点的高通量药物筛选细胞模型的建立

目的建立绿色荧光蛋白(GFP)标记的以维甲酸受体为靶点的高通量药物筛选细胞模型,用于筛选治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)、银屑病、痤疮以及肿瘤的新型药物。方法用分子生物学的方法,构建含有8个串连维甲酸受体应答元件(RARE)并连接报告基因E-GFP的重组载体。将体外培养的细胞株用该重组载体进行稳定转染,然后进行单克隆培养,最终挑选出敏感、高效、稳定表达的单克隆细胞,用于筛选针对维甲酸受体的小分子有机药物。结果建立了高效的药物筛选细胞模型。此模型筛选方法简便,适用范围广,灵敏度高,结果稳定。结论挑选出的细胞株作为药物筛选模型可用于大规模高通量药物筛选。

基于Oct4基因启动子活性的高通量药物筛选细胞模型的构建及应用

目的 以人源Oct4基因启动子为靶点构建双荧光素酶报告基因载体,建立高通量药物筛选细胞模型,筛选能显著上调Oct4基因启动子活性的海洋来源微生物次级代谢产物。方法 将人源Oct4基因启动子序列克隆至萤火虫荧光素酶报告基因载体pGL6-TA,构建重组质粒pGL6-TA-Oct4-luc并与内参质粒p RL-SV40-C瞬时共转染293T细胞,以OAC1作为激活剂,建立双荧光素酶报告基因筛选系统,通过检测相对荧光素酶表达水平的变化反映Oct4基因启动子活性,对309份海洋来源微生物发酵粗提物样品进行活性筛选;CCK-8法检测粗提物对间充质干细胞活力的影响。结果 双酶切和基因测序法证实重组质粒构建正确;将质粒转染293T细胞后,与空载pGL6-TA相比较,重组质粒pGL6-TA-Oct4-luc具有显著启动子活性(P<0.05);与0μmol/L相比较,粗提物Z-179-1处理细胞24 h后Oct4基因启动子活性明显升高(P<0.05),作用质量浓度为10μg/mL时效果最为显著;CCK-8法检测结果显示Z-179-1显著促进间充质干细胞的增殖,且呈剂量依赖性。结论 成功建立了靶向人源Oct4基因启动子的药物高通量筛选细胞模型,并筛选出海洋来源微生物发酵粗提物Z-179-1,能显著活化Oct4基因启动子,其活性成分值得开展进一步化学研究。

基于细胞模型的高通量药物筛选

随着高通量药物筛选发展的需要,细胞模型在药物筛选中发挥了越来越大的作用。本文综述了细胞模型在药物高通量筛选中的应用,主要介绍了该模型基础上的筛选流程、模型分类及其在实际药物筛选中的应用,并对其相关的检测技术进行了阐述,以及对其发展前景进行了分析。

基于柠檬酸转运蛋白的高通量药物筛选细胞模型

柠檬酸转运蛋白(Na CT)为新发现的钠离子偶联的羧酸转运蛋白家族的一员,主要功能是负责转运三羧酸循环的中间体,近年来研究发现Na CT可能是治疗糖尿病和肥胖症的重要药物靶点。该研究构建了Na CT基因的真核表达质粒,通过稳定转染HEK293细胞,筛选得到了稳定表达Na CT的细胞系。利用Rapid Fire平台建立了基于Na CT的高通量药物筛选细胞模型,结果显示该模型能高效地转运柠檬酸,具有良好底物特异性和选择性,其转运能力可被Li+激活,被4,4-二异硫氰基芪-2,2'-二磺酸抑制。Z因子计算结果为0.69,提示其适用于高通量筛选。对两种不同类型化合物库的筛选获得了一系列Na CT抑制剂,包括14个小分子化合物和15个中药组分。基于Na CT细胞模型的成功构建为高通量筛选具有抗糖尿病及肥胖症作用的先导化合物提供了一个新平台。

细胞水平的高通量药物筛选技术研究进展

目的介绍细胞水平的高通量筛选技术研究进展。方法根据近年来文献,综述细胞水平的高通量技术发展趋势和使用技术进展。结果细胞水平筛选是在活细胞自然条件下,接近体内的生化过程,且可以做到多靶点、多指标检测,满足在药物发现早期对药物的综合评价,缩短药物发现周期。结论细胞水平的高通量筛选技术具有广阔前景。

星形胶质细胞形态学观察在高通量药物筛选水通道蛋白4抑制剂中的应用

目的：探讨星形胶质细胞形态学观察在高通量药物筛选水通道蛋白4（AQP4）抑制剂中的应用，为脑水肿和其他水转运障碍疾病的治疗提供理论依据。方法：应用药物库和原代培养的人星形胶质细胞，以AQP4 siRNA转染细胞后的形态学改变和阻抑蛋白表达作参照，观察药物对星形胶质细胞形态学改变的影响，Western blot方法检测能明显改变细胞形态的靶药物对AQP4蛋白表达的影响，并测定靶药物作用剂量下细胞ATP活性。结果：洛伐他汀、胍那苄和米安色林在12～24h内能明显改变人星形胶质细胞形态，减低AQP4蛋白表达，与AQP4的siRNA转染细胞4d后的形态改变和蛋白阻滞效果类似，靶药物作用剂量下对细胞ATP活性无影响。结论：星形胶质细胞的形态学观察可作为大规模药物筛选的初步指标，本研究筛选出的靶药物可能是潜在的AQP4抑制剂。

高通量药物筛选模型

介绍了可用于药物筛选的 3种新的快速高通量筛选方法 ,包括基于反酵母双杂交的筛选系统 ;细胞平台伤的高通量筛选系统以及动物水平的筛选系统。并对其应用原理 。

高通量药物筛选中靶分子固定化数学物理模型的建立

通过对高能量药物筛选基本过程的分析 ,探索了靶分子固定化可能对筛选质量构成的影响 .从分子相互作用看 ,实际的过程远较理想的情况复杂 .分子间存在的静电力、疏水作用力及氢键力能对固定化的机理构成较大影响 ,甚至可能诱发多层吸附的固定化模式 .基于固定化过程中可能存在的靶分子与靶分子、靶分子与微球、体相与表面相之间的相互作用 ,构筑了相应的数学物理模型 ,为实际的筛选工作提供了可参考的理论依据 .

流式细胞仪高通量药物筛选技术的建立和应用

目的建立流式细胞仪高通量药物筛选技术,并用于筛选逆转肿瘤细胞多药耐药性的药物。方法使用流式细胞仪高通量附件,建立高通量药物筛选技术;以罗丹明123作为荧光指示剂,利用耐药HR-20活细胞筛选逆转耐药性的药物。结果通过阳性药物,确定了逆转耐药性药物筛选模型的Z′因子为0.88。应用此模型筛选8 000多种化合物。结论流式细胞仪高通量药物筛选技术是一种精确度较高、稳定性较好、有效的高通量药物筛选方法。

药物高通量亲合色谱筛选中定性定量模型的建立

通过对AC高通量筛选过程的分析,建立了AC技术筛选药物的定性及定量模型,为高通量药物筛选提供了必要的理论指导.

高通量药物筛选模型的研究进展

作为高通量筛选系统的核心,筛选模型在研究深入与技术进步的推动下已得到较大发展与广泛应用。文章从分子、细胞和动物水平三个层面介绍高通量药物筛选模型的研究状况及应用,并对其优缺点与相关机制进行阐述。

高通量筛选瞬时受体势V3通道调节剂细胞模型的建立

为发现TRPV3调节剂,通过荧光成像分析系统检测钙浓度,建立高通量筛选瞬时受体势V3通道(Transient receptor potential V3,TRPV3)调节剂的细胞模型。将TRPV3表达载体转染人胚肾(HEK-293)细胞,抗生素筛选稳定表达TRPV3的细胞系,选取TRPV3特异性调节剂作用于细胞模型,应用荧光成像分析系统测钙实验检测TRPV3高表达细胞系药理学特征,同时优化实验条件,考察模型的稳定性,并评估应用于96孔板及384孔板进行高通量筛选的可靠性及准确性。获得了高表达TRPV3的HEK-293稳定细胞系,通过TRPV3离子通道调节的钙流信号与TRPV3特异性调节剂成剂量依赖关系,优化得到了最适筛选条件,该模型稳定,灵敏,通过Z因子及Spiking检测,完全符合高通量筛选需求。利用此细胞模型通过检测钙信号可筛选TRPV3调节剂。

猪组成型雄烷受体激动剂高通量药物筛选模型的建立

构建猪组成型雄烷受体（pgCAR）激动剂体外高通量筛选模型。利用RT—PCR技术从猪肝脏总RNA中扩增出pgCAR基因序列，

抗肿瘤药物高通量体内筛选模型——中空纤维测定法

抗肿瘤药物药效学筛选通常经过体外细胞实验、动物体内实验和人体临床研究3个步骤.其中,动物实验的目的在于验证供试药物在动物体内的有效性,是药物筛选的关键步骤.目前一般通过建立一种或多种肿瘤动物模型来完成.但此实验对实验动物和待测药品的需求及时间和人力的投入都较大,难以作为大规模的筛选方法而常规开展.一种新型的抗肿瘤药物体内药效筛选模型--中空纤维法的出现,使得较大规模的动物体内药效学筛选成为现实.

基于CaCC的TRPV4调节剂高通量筛选细胞模型的建立

目的构建基于钙激活氯离子通道(CaCC)的瞬时受体电位香草酸亚型4(TRPV4)调节剂的高通量筛选细胞模型。方法采用RT-PCR检测Fischer大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞中内源性表达的TRPV4,所得PCR产物切胶回收后测序;采用Western blotting检测FRT细胞中TRPV4蛋白的表达情况。应用脂质体转染法构建共表达钙激活氯离子通道蛋白1(ANO1)和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞模型,倒置荧光显微镜下观察ANO1和YFP-H148Q/I152L在细胞中的表达情况,应用荧光淬灭动力学实验测定细胞模型的有效性。加入TRPV4激活剂和抑制剂,应用荧光淬灭动力学实验检测模型能否筛选TRPV4调节剂;加入TRPV4激活剂,应用Fura-2荧光探针法检测细胞内的Ca2+浓度;通过Z'因子评估细胞模型是否适用于高通量筛选。结果RT-PCR和Western blotting检测结果显示,FRT细胞内源性表达TRPV4。倒置荧光显微镜下清晰可见ANO1表达在FRT细胞膜上,YFP-H148Q/I152L表达在FRT细胞质中,即成功构建了共表达ANO1和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞模型。荧光淬灭动力学实验结果显示,该模型可以筛选TRPV4调节剂,斜率(Slope)值与TRPV4调节剂的浓度呈剂量依赖关系;该模型可敏感检测细胞内Ca2+的浓度变化,通过Slope值可反映细胞内Ca2+浓度的高低;Z'因子为0.728,表明该模型可高通量筛选TRPV4调节剂。结论成功构建了一种可以敏感高效筛选TRPV4调节剂的高通量筛选细胞模型。

抗猪附红细胞体药物体内筛选模型的建立与应用

为实现抗猪附红细胞体药物的高通量筛选,拟建立小鼠最优感染模型及应用其进行药物敏感性研究。采用三因素三水平的正交试验法,通过对感染率、菌血症峰期及临床症状考察,确定最佳感染方法、感染途径和接种剂量。而后应用感染模型对土霉素、四环素、贝尼尔、青蒿素、咪唑苯脲等10种抗生素和抗原虫药进行药物敏感性测试。方差分析结果显示,以0.1mL剂量尾静脉接种猪EH提纯液,能够使处于免疫抑制状态的昆明小鼠在3d时达到菌血症峰期。药物敏感性测试反映贝尼尔、咪唑苯脲和青蒿素对猪附红细胞体作用最强。因此,用此模型可进行体内抗猪附红细胞体药物的高通量筛选。

钾通道调节剂的高通量筛选模型

目的 建立钾通道调节剂高通量筛选的细胞模型。方法 96孔板上细胞负载荧光染料DiBAC4(3 ) ,测定不同化合物对荧光强度的影响 ,反映细胞膜电位的变化 ,间接反映化合物对钾通道的作用。结果 高钾去极化和钾通道阻断剂 4 AP ,TEA ,E 40 3 1,glibenclamide ,quinidine和nifedipine均能增强细胞的荧光强度 ,钾通道开放剂cromakalim能减弱细胞的荧光强度 ,上述化合物在一定剂量范围内均有剂量效应关系。利用该模型筛选 76个化合物 ,发现 9个化合物的荧光强度变化值有较好的剂量效应关系 ,有待膜片钳技术的进一步验证和筛选。结论 此方法简单 ,易于操作 ,重现性好 。