食源性高F值寡肽的制备及护肝功效研究进展

高F值寡肽广泛存在于自然界动植物中,是一种来源丰富、天然环保、无副作用的优质肽源,具有抗疲劳、抗氧化、醒酒、辅助治疗肝病及苯丙酮尿症等多种生物活性。高F值寡肽因其支链氨基酸含量较高,能够逆转肝病患者体内支链氨基酸与芳香族氨基酸比例失衡现象,在辅助治疗慢性肝病及其多种并发症方面起到了重要作用。主要对食源性高F值寡肽的蛋白原料、制备与分离纯化方法、护肝功效及相关作用机制进行了综述,重点介绍植物蛋白、动物蛋白中的水产品蛋白和乳源性蛋白几种原料蛋白,酶解法和微生物发酵法两种高F值寡肽的制备方法,膜分离法、活性炭吸附法和色谱分离法几种分离纯化方法,以及高F值寡肽的护肝功效和发挥护肝功效的三种途径,旨在为提高食源性高F值寡肽开发及其在食品医药领域中的应用提供参考。

高F值寡肽抗疲劳作用的研究及其饮料的开发

本研究通过复合酶可控水解玉米蛋白粉制得高F值寡肽(F值为21．7),对其抗疲劳功能进行评价,并开发了功能性饮料。结果表明,实验组与对照组相比,高、中剂量组游泳时间分别提高了54%(p＜0．01)和38%(p＜0．05),尿素氮含量分别降低了18%(p＜0．01)和12%(p＜0．05),肝糖原含量分别为对照组的3．2倍(p＜0．001)和2．3倍(p＜0．01),肌糖原含量分别为对照组的1．7倍(p＜0．01)和1．4倍(p＜0．01);游泳后0min和15min实验组与对照组相比,小鼠血乳酸含量分别降低了31%(p＜0．01)和27%(p＜0．05),证明了玉米高F值寡肽的抗疲劳功能。其饮料最佳工艺配方为A_2B_2C_2,即添加果汁5%,砂糖8%,柠檬酸0．15%,最终产品符合质量标准。

酶解牡蛎肉制备高F值寡肽的研究

对采用胰酶水解近江牡蛎（Ostrea rivularis Gould）制备高F值寡肽进行了研究。其方法是将所得酶解液用活性碳吸附,然后用凝胶层析纯化。通过对比6种粉状活性碳去除酶解液中芳香族氨基酸和保留支链氨基酸的能力,找出了较适宜的活性碳类型及其吸附条件：活性碳型号为TX-325型,固液比为1：30（m/V）,pH=2.5,吸附时间为3h,吸附温度为25℃。将经活性碳吸附后的酶解液用凝胶（型号为Biogel P2）层析法在流速为0.4mL/min的条件下进行分离纯化,可得到F值大于20的寡肽混合物,其相对分子质量约1450~800。

蛋清高F值寡肽可控酶解条件的筛选

以水解度(DH)作为试验的衡量指标,通过对pH值、水解温度、水解时间、E/S等试验条件的考察,并采用L9(34)正交试验确定了pH-stat法制备蛋清高F值寡肽的可控酶解条件。结果表明:碱性蛋白酶最适水解条件为:pH值11,温度45℃,[E]/[S]1.04%,水解压时间5h;风味蛋白酶的最适水解条件为:pH值7.5,温度60℃,[E]/[S]3.3%,水解时间5h。

活性炭吸附芳香族氨基酸制备高F值寡肽混合物的研究

比较了 7种颗粒及粉末状活性炭对芳香族氨基酸的吸附能力,选出了最适宜的活性炭品种,并通过均匀试验优化了该活性炭吸附芳香族氨基酸的条件。用氨基酸自动分析仪测定了寡肽混合物中氨基酸的组成,结果显示F值>20。

酶法制备玉米高F值寡肽及其抗疲劳功能评价

本试验用木瓜蛋白酶水解制备玉米高F值寡肽,木瓜蛋白酶的最佳水解条件:E/S=4.5%、pH=6.5、温度为45℃、时间为4h。本试验还对其抗疲劳功能进行了研究。

玉米高F值寡肽生理功能及研究状况

高F值寡肽是一类生理功能活性肽。本文叙述了高F值寡肽的生理功能,介绍了国内外寡肽产品的研究状况。从食品中制备高F值寡肽以提高食品的应用价值,进行功能性食品的开发研究提供了更加广阔的开发前景。

高F值寡肽酸乳饮料的开发与功能评价研究

利用复合酶水解玉米蛋白粉制得的高F值寡肽(F值为21.7)进行酸乳饮料配方与功能特性研究。结果表明,饮料最佳工艺配方为:添加高F值寡肽3%,白砂糖8%,柠檬酸0.15%;试验组与对照组相比,高、中剂量组缺氧存活时间分别提高了48%(P<0.01)和33%(P<0.05);游泳时间分别提高了64%(P<0.01)和38%(P<0.05),肝糖原含量分别为对照组的2.75倍(P<0.001)和1.88倍(P<0.01);游泳前后小鼠血乳酸含量分别与对照组相比降低了63.5%(P<0.01)和35.6%(P<0.05),证明了玉米高F值寡肽酸乳饮料的抗缺氧和抗疲劳功能。

马氏珠母贝高F值寡肽体外抗氧化研究

研究马氏珠母贝高F值寡肽(PHFP)的体外抗氧化及其对H2O2诱导L02肝细胞损伤的保护作用。结果表明:马氏珠母贝高F值寡肽对·OH、DPPH·及O2-·均具有一定的清除能力。在浓度为10mg/mL时,对3种自由基的清除率分别达到了60.8%、50.8%和44.2%。剂量为1mg/mL的高F值寡肽使H2O2诱导损伤L02肝细胞的半数致死剂量LD50由损伤模型组的0.618mmol/L提高到0.737mmol/L,提高了19.3%。

马氏珠母贝高F值寡肽初步分离纯化及氨基酸组成分析

采用胰酶酶解马氏珠母贝肉蛋白,并利用活性炭吸附结合凝胶过滤层析得到高F值寡肽制品(PHFP)。进一步采用RP-HPLC对马氏珠母贝高F值寡肽制品进行初步分离分析,并且测定了各分离组分的氨基酸组成。研究结果显示,PHFP分子量分布主要集中在15～1 000 u。分离得到3个组成部分中PHFPb和PHFPc的支链氨基酸含量分别提高到30.2%和29.5%。PHFPa、PHFPb和PHFPc分别占PHFP的41.3%、38.8%和19.7%。

高F值寡肽的研究进展

在氨基酸混合物中,支链氨基酸(Branched chain amino acids,简称BCAA)与芳香族氨基酸(Aromaticamino acids,简称AAA)的摩尔比称为Fischer值,简称F值。

马氏珠母贝高F值寡肽在Caco-2细胞中吸收的初步研究

采用Caco-2单层细胞模型体外模拟马氏珠母贝高F值寡肽(PHFP)小肠吸收,研究结果显示:无论是AP面→BL面还是BL面→AP面,PHFP的吸收量均呈增加趋势。添加P-糖蛋白的专属抑制剂维拉帕米后,AP→BL的渗透系数由原来的6.83×10-7cm/min提高到8.16×10-7cm/min,而BL→AP渗透系数由8.84×10-7cm/min降低到2.20 10-7cm/min,说明PHFP溶液在Caco-2细胞中的转运存在外排泵的作用。并且,PHFP在Caco-2细胞转运过程中被细胞中所存在的代谢酶所代谢,而添加维拉帕米后,PHFP的代谢量有所降低。

pH-区带精制逆流色谱分离高F值寡肽新技术研究

高F值寡肽是一种由2～8个氨基酸组成的生理活性肽。本研究采用胃蛋白酶和O／一胰凝乳蛋白酶对草鱼蛋白进行了两步酶解，高效液相色谱对酶解液进行了肽谱分析，以制备改善肝性脑病的高F值寡肽。结果表明，草鱼蛋白酶解液中含有高支低芳氨基酸的寡肽组分，开发一种pH一区带精制逆流色谱分离新技术，所用体系为甲基叔丁基醚：正丁醇：乙腈：水（2：2：1：5，V／V／V／V），上相中加入20mM三乙胺和20％磷酸二（2-乙基己基）酯（DEHPA）作为固定相，下相分两部分，分别加入10mM HCl和20m MHCl作为流动相，进行梯度洗脱。成功地对酶解液中的混合组分进行了分离，得到了5个高F值（F〉20）的分离组分，估测其F值（F=OD214nm／OD280nm）高达24．7—36．4。该结果为利用低值鱼蛋白酶解制备功能性活性肽提供了新的制备方法。

酶解魔芋飞粉制备高F值寡肽最佳工艺条件的研究

目的:为了得到高F值寡肽,需要对蛋白质进行水解。方法:采用酶法水解魔芋飞粉制备高F值寡肽。通过对蛋白质水解度的测定,确定了碱性蛋白酶和链霉蛋白酶的最佳酶解条件:碱性蛋白酶加酶量0.1%,底物浓度3.75%,pH9.0,水解温度45℃,时间5h;链霉蛋白酶加酶量0.03%,pH8.0,水解温度50℃,时间7h。酶解液再经过凝胶层析分离纯化后可用于制备高F值寡肽。

啤酒糟蛋白中高F值寡肽的制备

以啤酒糟为原料,采用双酶水解法制备高F值寡肽。通过对蛋白质水解度的测定,采用响应面法进行优化,得出双酶水解最佳条件为:碱性蛋白酶加酶量为6%、酶解时间4h、pH8.6、酶解温度56℃;木瓜蛋白酶的加酶量为3%、酶解时间3h、pH6.3、酶解温度48℃。用活性炭吸附酶解液,去除其中的芳香族氨基酸,采用G-25葡聚糖凝胶分离纯化,测其分子质量为794.24u,此时的F值为21.02。

米糟蛋白酶解制备高F值寡肽的研究

以米糟蛋白为原料,利用双酶水解法制备高F值寡肽,研究了水解酶以及高F值获得的关键条件。结果显示,用碱性蛋白酶作为第一步水解酶,木瓜蛋白酶作为第二步水解酶,水解芳香族氨基酸的效果较好。其水解度分别为28.5%和18.2%。利用SephadexG-25柱层析分离寡肽,纯净水洗脱时去除芳香族氨基酸的效果好,寡肽F值为24.80,其中芳香族氨基酸含量为1.89%,相对分子质量为200Da～1000Da,符合高F值寡肽的要求,其得率为25.19%。

超声振荡改性玉米醇溶蛋白及高F值寡肽制备

玉米醇溶蛋白经225 W的超声振荡处理90 min,改善其结构特性,解决50℃加热会形成“粘弹性面筋团”的现象。通过扫描电镜、红外光谱、差示扫描量热技术,清晰看到其微观表面形貌由片型韧状转变为块型松散状,变性峰显著减小,酰胺Ι带(1700~1600 cm-1)的吸收强度明显减弱。松散蛋白经Alcalase 2.4L碱性蛋白酶水解及超滤、纳滤膜过滤,得到F值为4.07的粗肽,其中相对分子质量小于1000的占比97.62%。ɑ-胰凝乳蛋白酶和羧肽酶A依次定向水解粗肽,联合活性炭脱芳,制备F值高达41.87的玉米寡肽,其中苯丙氨酸和酪氨酸仅占总氨基酸的0.73%,相对分子质量180~1000的占比71.37%。

高F值寡肽混合物对四氯化碳损伤大鼠血液生化指标的影响

利用CCl4对肝脏损伤的大鼠来检测高F值寡肽混合物对肝脏功能的保护作用和修复作用 .试验表明 ,高F值寡肽混和物能有效地保护大鼠肝细胞 ,减轻由CCl4导致的肝损伤 .

玉米高F值寡肽的制备研究

以玉米蛋白粉为原料采用酶法水解制备玉米高F值寡肽。研究表明,木瓜蛋白酶的最佳水解条件:温度为55℃,时间3.5h,酶添加量为4.0g/100g,pH7.0,此条件下消耗的NaOH溶液的体积为2.72mL。通过高效液相色谱和氨基酸成份分析,所得寡肽的分子质量主要分布区域为200Da^1000Da,所制取的玉米肽F值>20。

酶解法制备花生粕高F值寡肽混合物及其缓解疲劳作用的研究

利用Alcalase碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解花生粕制得高F值寡肽混合物(F值为24.6)。对此混合物进行缓解疲劳功能实验,结果表明:实验组与对照组相比,灌胃不同剂量花生粕高F值寡肽混合物30 d后,小鼠的转棒时间明显提高,血清尿素氮含量显著降低,肝糖原和肌糖原有一定程度的提高,花生粕高F值寡肽混合物具有明显的缓解疲劳作用。