高G-C含量突变型Foxo1转基因动物基因型鉴定PCR方法的建立

为解决因目的基因G-C(鸟嘌呤-胞嘧啶碱基对)含量过高导致的目的基因扩增困难,以及操作过程中多环节引起的DNA污染导致的假阳性问题.本研究以突变型Foxo1(Forkhead转录因子1)转基因小鼠作为对象,就高G-C含量转基因的PCR方法和多个环节避免DNA污染进行了探索,结果显示,实验中消除了PCR的假阴性和假阳性现象,得到了准确的突变型Foxo1转基因小鼠的基因型鉴定结果.

应用甜菜碱增加富含三核苷酸重复的高G--C含量DNA片段测序辨识度的最佳浓度探讨

目的通过在Sanger法测序体系中加入浓度梯度的甜菜碱，建立高辨识度的富含三核苷酸重复的高G-C含量DNA片段的测序体系。方法以G-C含量为72％无三核苷酸重复的Nogo-B基因cDNA的5’端序列（the 5’ terminal of Nago—BcDNA，Am-Nogo-B）及G-C含量为74％的富含CAG重复与CCG重复的Huntingtin基因cDNA的5’端序列（the 5’ terminal of huntingtin cDNA，Am-HTT）为例，在Sanger法测序体系中加入浓度梯度的甜菜碱，比较测序结果。结果Am—Nogo—B与Am-HTT基因测序体系中最适宜的甜菜碱浓度相差较大。甜菜碱浓度在0．8～1．2mol／L之间时，Am-Nogo-B测序结果质量最佳。甜菜碱浓度在1．6～2．4mol／L之间时，Am-HTT基因的测序质量最好。结果具有良好的可重复性。结论不同碱基组成类型的高G-C含量DNA片段，即使G-C含量接近，最适宜测序体系中甜菜碱浓度不同。探索出了适宜于增加富含三核苷酸串联重复的高Gc含量DNA片段测序辨识度的体系，可作为类似DNA片段测序的参考方法。