胡子鲇qRT-PCR内参基因的筛选

实时荧光定量PCR(qRT-PCR)是研究基因表达有效的工具之一,选取合适的内参基因,是获得可靠的基因表达结果的关键。本研究以胡子鲇(Clarias fuscus)为研究对象,采用qRT-PCR技术检测了13个候选基因(actb1、actb2、ef1a、eef1b2、rpl13a、rpl13、ccdc124、cfl1、nm23、eif3g、rap1a、ikbkg和ywhab)在胡子鲇性腺不同发育阶段和成鱼不同组织中的基因表达情况,并利用BestKeeper、GeNorm、NormFinder和RefFinder软件分析其表达稳定性,以筛选在胡子鲇性腺发育和不同组织中稳定表达的内参基因。结果显示,13个候选内参基因的定量PCR引物均可获得特异性扩增产物。在性腺不同发育阶段,候选基因表达稳定性顺序为actb2>rpl13>actb1>cfl1>rap1a>ef1a>rpl13a>ikbkg>eif3g>nm23>eef1b2>ywhab>ccdc124,成鱼不同组织中稳定性顺序为actb2>rpl13>cfl1>rap1a>ef1a>rpl13a>ikbkg>eif3g>nm23>actb1>eef1b2>ywhab>ccdc124。随后,选择稳定性前二的actb2和rpl13作为候选内参基因,分析zp3、atp2b3、slc13a5和parp8基因在胡子鲇雌、雄性腺中的相对表达量,结果进一步证实,以actb2为内参时,其雌雄性状差异基因表达水平更接近于转录组结果。综合分析表明,actb2基因可作为内参基因用于今后胡子鲇性腺不同发育时期和不同组织间功能基因表达特征的研究。

丛毛羊胡子草对砷等5种重金属的耐性及开发利用探讨

为了探讨丛毛羊胡子草对重金属的耐性,采集广西南丹有色金属矿区自然分布的丛毛羊胡子草及其根部土壤样品,用ICP-MS测定样品中的Cu、Zn、As、Cd、Pb含量,并对丛毛羊胡子草地上和地下部分的重金属富集系数及地上部分的重金属转运系数进行比较分析,对丛毛羊胡子草根部土壤的污染情况进行评价。结果表明,丛毛羊胡子草根部土壤5种被测的重金属元素含量较高,其平均含量分别为:Cu 333.18 mg/kg、Zn 17 139.20 mg/kg、As 10 338.37 mg/kg、Cd 115.97 mg/kg、Pb 3 497.25 mg/kg,单因子污染指数和内梅罗综合污染指数均已达到重度以上污染等级,其中As、Cd、Zn的污染尤为严重,Pb和Cu的污染程度相对较轻,不同重金属元素污染程度高低排序为As>Cd>Zn>Pb>Cu;丛毛羊胡子草地上部分和地下部分5种被测重金属元素的平均含量分别为:Cu 16.69 mg/kg、Zn 465.45 mg/kg、As 98.92 mg/kg、Cd 5.03 mg/kg、Pb 129.49 mg/kg和Cu 38.05 mg/kg、Zn894.23 mg/kg、As 461.72 mg/kg、Cd 8.27 mg/kg、Pb 221.72 mg/kg,其地上部分的重金属富集系数和转运系数较小,地下部分的重金属富集系数相对较大,吸收的重金属元素主要集中在根部,对被测重金属元素的耐受性可能属于根部囤积型和防御型;虽然丛毛羊胡子草不是超累积植物,但其对被测重金属元素具有一定的吸收和转运能力,能够耐受高浓度的砷、镉等重金属复合胁迫,生命力强,生物量大,对生境要求不高,因此,可以作为重金属重度污染土壤修复的优势植物栽植。

胡子鲶和革胡子鲶的生物学特性、养殖病害及饲料研究进展

概述了胡子鲶和革胡子鲶的生物学特性、营养价值、养殖病害和饲料研究进展,以期为胡子鲶和革胡子鲶养殖业的可持续发展提供科学参考。

打破常规的叙事艺术:身体、角色与时间的重构——以皮娜·鲍什作品《蓝胡子》为例

皮娜·鲍什的作品《蓝胡子》是一部极具冲击力和深度的作品。首先,它以一种独特的舞蹈语言和排演方式,让人沉浸在一个充满张力和情感冲突的空间之中,通过舞蹈演员的肢体表达,传达出了童话《蓝胡子》神秘、恐惧、压抑的氛围。其次,作品中人物关系的复杂性也紧紧抓住了观者的注意力。蓝胡子与妻子之间的互动不仅仅是一种简单的权力关系,更是一种心理层面的较量。皮娜·鲍什巧妙地运用了舞蹈和戏剧这两种元素,将这种微妙的关系生动地展现了出来。

革胡子鲶皮肤黏液的抗菌活性

为鱼类天然抗菌药物的开发提供参考,通过硫酸铵沉淀、透析等方法,对高密度养殖的革胡子鲶体表黏液中的抗菌肽进行诱导和分离,通过抑菌试验分析抗菌肽粗提物的抑菌活性。结果表明:不同大肠杆菌浓度诱导的抗菌肽粗提物的抑菌效果不同,尾部注射浓度为0.6×10^(9) cfu/mL大肠杆菌的抑菌效果强于0.3×10^(9)cfu/mL大肠杆菌和无菌蒸馏水的诱导效果。在0.6×10^(9) cfu/mL大肠杆菌诱导的抗菌肽粗提物含量为25 mg条件下,对枯草芽孢杆菌的抑制作用最强,其抑菌圈直径为(7.58±0.05)mm;对金黄色葡萄球菌、嗜水气单胞菌的抑制作用次之,其抑菌圈直径分别为(6.95±0.05)mm、(6.94±0.05)mm;而对大肠杆菌的抑制作用较弱,其抑菌圈直径为(5.68±0.05)mm。在抗菌肽粗提物含量为50 mg条件下,对枯草芽孢杆菌的抑制作用最强,其抑菌圈直径为(9.47±0.05)mm,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑制作用次之,其抑菌圈直径分别为(7.89±0.05)mm、(6.95±0.05)mm,对嗜水气单胞菌的抑制作用最弱,其抑菌圈直径为(4.11±0.05)mm。

革胡子鲇生长激素基因表达定量PCR分析的引物设计与评估

以革胡子鲇(Clarias gariepinus)为试验对象,对其生长激素(GH)基因进行荧光定量PCR(qPCR)的引物设计与评估。将合成的5对引物通过常规PCR电泳结果选择出符合条件的GHF-GHR引物,并进行qPCR引物的评估。结果显示:扩增GH基因片段的引物GHF-GHR扩增时熔解曲线为单一峰,说明引物具有良好的特异性;通过标准曲线得出GHF-GHR引物的扩增效率为93.3%,标准曲线的R2值为0.982,说明引物的扩增效率良好。上述结果说明GHF-GHR引物能用于待检样本的GH基因表达的qPCR分析。

饲料中添加叶黄素对胡子鲶体色的影响

进行了3个试验以考察饲料添加叶黄素对本地胡子鲶体色的影响。试验A比较了野生、半人工养殖、全人工养殖胡子鲶体色的差异,其皮肤叶黄素含量分别为8.01、4.64和1.61mg·kg-1鲜组织,肌肉叶黄素分别为2.06、1.83、0.96mg·kg-1鲜组织;试验B采用平均体重为52g的本地胡子鲶成鱼,在基础饲料中分别添加0、100、150、200mg·kg-1叶黄素,饲养6周后,成鱼皮肤叶黄素含量分别为1.07、5.88、7.02、7.81mg·kg-1鲜组织,肌肉叶黄素含量分别为0.64、1.35、1.81、1.86mg·kg-1鲜组织;试验C采用平均体重为3.2g的本地胡子鲶鱼种,在基础饲料中分别添加0、50、100、150mg·kg-1叶黄素,饲养6周后,鱼种皮肤叶黄素含量分别为3.2、8.73、11.49、12.51mg·kg-1鲜组织,肌肉叶黄素含量分别为0.87、1.71、1.97、2.03mg·kg-1鲜组织。上述结果表明,养殖与野生胡子鲶体色的差异主要来源于食物中叶黄素含量的不同,在饲料中添加叶黄素类产品可有效改善养殖胡子鲶体色,叶黄素适宜添加量建议为100mg·kg-1饲料(成鱼)或50mg·kg-1饲料(鱼种)。

饲料中去皮豆粕替代鱼粉对埃及胡子鲇消化酶活力和肠道组织的影响

以初始体质量(22.40±0.30)g的健康埃及胡子鲇Clarias lazera为试验对象,在室内单循环控温养殖系统中进行8周饲养试验,以鱼粉为动物蛋白源,去皮豆粕为植物蛋白源,去皮豆粕分别替代0%(CK),15%,30%,45%和60%的鱼粉蛋白,配制成5种等蛋白(40%)等能(15.8 MJ/kg)的半精制饲料,研究去皮豆粕替代鱼粉对埃及胡子鲇消化酶活力及肠道组织的影响。结果表明,埃及胡子鲇胃蛋白酶活力去皮豆粕组显著低于对照组(P<0.05),30%,45%和60%去皮豆粕替代组中肠和肝胰脏蛋白酶活力显著低于对照组(P<0.05),45%和60%去皮豆粕替代组的前肠和后肠蛋白酶活力显著下降(P<0.05)。当去皮豆粕替代鱼粉45%和60%时,后肠淀粉酶活力显著低于对照组(P<0.05)。但埃及胡子鲇的胃、肝胰脏、前肠和中肠淀粉酶活力各组之间差异不显著(P>0.05)。去皮豆粕对埃及胡子鲇的脂肪酶活力影响不显著(P>0.05)。去皮豆粕替代鱼粉对埃及胡子鲇肠道组织结构具有一定的影响。当去皮豆粕替代鱼粉蛋白45%和60%时,埃及胡子鲇的中肠和后肠肠道组织结构完整性被破坏,部分肠绒毛脱落,部分上皮细胞与固有层分离,固有层结缔组织疏松,固有层变宽,肠长、肠体指数、肠长指数、肠道皱襞高度显著下降(P<0.05)。

盐度对胡子鲇、革胡子鲇及其杂交子一代胚胎发育的影响

胡子鲇、革胡子鲇及其杂交子一代珠胡子鲶胚胎发育各期的存活率和孵化率均随着盐度的升高而降低，该类鱼胚胎发育的环境盐度以不超过５为宜；发育至孵化期胚胎所能耐受的最高盐度革胡子鲇是１０，胡子鲇和珠胡子鲇是１１。盐度对３种胡子鲇胚胎发育速度影响不大，总的趋势是随着盐度的升高而变慢。

鲶鱼和胡子鲶的两性异形与雌性个体生育力

检测了鲶鱼(Silurus asotus)和胡子鲶(Clarias fuscus)繁殖期18个形态特征的两性异形以及雌性个体生育力。结果表明,鲶鱼和胡子鲶雌雄性别比例均符合1∶1。One-way ANOVA显示,鲶鱼雌雄个体体长差异不显著,胡子鲶雌性个体体长显著小于雄性个体(P<0.05)。以体长为协变量的One-way ANCOVA显示,特定体长的鲶鱼雌性个体的眼间距和体高显著大于雄性个体(P<0.05),两性间其它局部特征不存在显著的两性差异;特定体长的胡子鲶雌性个体的体高、腹鳍基前距和腹鳍臀鳍间距显著大于雄性个体,雌性个体的臀鳍基长、尾柄高和尾鳍长显著小于雄性个体(P<0.05),两性间其它局部特征不存在显著的两性差异。Two-way ANOVA显示,胡子鲶体长显著大于鲶鱼(P<0.05),性别及物种与性别两因素的相互作用对体长影响不显著。以体长为协变量的Two-way ANCOVA显示,胡子鲶的头长、头宽、吻长、眼间距、尾柄高、尾鳍长、背鳍基前距、背鳍基长、腹鳍基前距、腹鳍臀鳍间距、体重和去内脏体重显著大于鲶鱼,头高、体高、臀鳍基长显著小于鲶鱼(P<0.05),物种间的其他形态特征变量差异不显著;雌性个体的体高、背鳍基前距、腹鳍基前距、腹鳍臀鳍间距显著大于雄性个体,臀鳍基长、尾柄高、尾鳍长、背鳍基长显著小于雄性个体(P<0.05),两性间的其他形态特征变量差异不显著;物种与性别两因素的相互作用对体高、臀鳍基长、尾柄高、尾鳍长、背鳍基长和腹鳍臀鳍间距影响显著,对其余的形态特征变量影响不显著。15个形态特征变量的主成分分析(Eigenvalue≥1)发现,前2个主成分共解释68.4%的变异。头宽、眼间距、尾柄高、尾鳍长、背鳍基前距、背鳍基长、腹鳍基前距和腹鳍臀鳍间距在第一主成分有较高的正负载系数,臀鳍基长在第一主成分有较高的负负载系数(解释51.2%变异);眼后头长在第二主成分有较高的负负载系数(解释17.2%变异)。胡子鲶在第一主成分和第二主成分的分值均显著大于鲶鱼,雌雄两性的差异以及两因素的相互作用对分值的影响均不显著。实验检测的鲶鱼、胡子鲶的怀卵数量与体长和体重回归关系显著。One-way ANCOVA及矫正平均值Tukey's检验显示,特定体长的胡子鲶的产卵数量显著大于鲶鱼。性选择是胡子鲶大个体雄性形成的主要原因,同时影响与运动相关的尾部特征。生育力选择更多的影响与雌性胡子鲶较大腹腔容积相关的形态特征变异。环境因子、食物可得性和营养状况同时影响了个体大小两性异形的形成。

维生素C对胡子鲶血清免疫相关酶活性的影响

在胡子鲶Clarisbatrachus的基础饲料中分别添加0、500、1000、1500、2000mg/kg的维生素C(VC),于第12、24、36、52d分别测定胡子鲶血清中免疫相关酶的活性,以研究VC对胡子鲶的免疫增强作用。结果表明,VC可显著提高胡子鲶血清中碱性磷酸酶(ALP)、酸性磷酸酶(ACP)和髓过氧化物酶(MPO)的活性,但对超氧化物岐化酶(SOD)、溶菌酶和过氧化氢酶(CAT)活性的提高不显著。

胡子鲶鳃扫描电镜的观察

本文应用扫描电镜对胡子鲶鳃表面形态结构进行了详细的观察 ,对其丝状鳃、片状鳃与枝状鳃的表面形态特征进行了比较研究 。

胡子鲶鱼皮酸溶性胶原蛋白的理化性质研究

为提高水产加工副产品的高值化利用,本文以资源丰富且相对集中的一种淡水产品加工下脚料-胡子鲶鱼皮为原料,在4℃条件下,利用酸提法从鲶鱼皮中提取酸溶性胶原蛋白(ASC),并对其进行相应的理化性质研究。通过测定羟脯氨酸含量得出了该鱼皮胶原蛋白的提取率(20.32%),氨基酸组成分析得到含量最丰富的氨基酸是甘氨酸(32.59%)表明样品符合Ⅰ型胶原蛋白的氨基酸特点。SDS-PAGE电泳和紫外分析图谱表明样品为Ⅰ型胶原蛋白,且样品提取纯度较好。傅里叶变换红外光谱(FT-IR)表明该酸溶性胶原蛋白保留了天然的三螺旋结构。热变性温度(Td,26℃)和热收缩温度(Ts,53.01℃)的测定结果均显示,这种鲶鱼皮酸溶性胶原蛋白的热稳定性低于哺乳动物。X-射线衍射图谱显示了胶原蛋白分子的内部结构特点。

胡子鲇Dmrt1基因全长cDNA克隆及其表达分析

以胡子鲇(Clarias fuscus)为研究对象,利用RT-PCR技术和SMART RACE技术克隆获得Dmrt1基因cDNA全长,并利用生物信息学分析其结构及功能;利用半定量RT-PCR技术检测胡子鲇性腺(精巢/卵巢)、肌肉、肠、肝脏、心脏、头肾、鳃丝、脑和眼等10种组织以及Ⅱ—Ⅴ期精巢中Dmrt1基因表达。结果表明:胡子鲇Dmrt1基因cDNA全长为1417 bp,其中5′非编码区(5′-UTR)为35 bp,3′非编码区(3′-UTR)为516 bp,开放阅读框(ORF)包含864 bp,编码287个氨基酸(aa),预测所编码DMRT1为主要位于细胞核内的不稳定性亲水蛋白。氨基酸序列比对显示,胡子鲇DMRT1与已公布的非洲胡子鲇、蟾胡子鲇、黄颡鱼等鲇形目鱼类的相似性为83.3%—96.1%。胡子鲇DMRT1中具有DMRT基因家族共有的、保守性很高的DM结构域,此结构域具有典型的"C2H2C4"锌指结构,与上述鲇形目鱼类的相似性达100%,与斑马鱼、青鳉、虹鳟等鱼类的相似性为91.9%—97.3%,而与鸡、鼠、猪人等的相似性达80%以上。组织表达显示,胡子鲇Dmrt1基因仅在精巢中表达,且Ⅱ期精巢(即精子发生期)中Dmrt1基因表达量显著高于Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ期精巢(P<0.05),而卵巢及其他8种组织中均无表达,表明Dmrt1是胡子鲇精巢特异性表达基因,可能与胡子鲇的雄性性别决定、精子发生及精巢发育密切相关。

维生素C对胡子鲶Claris fuscus细胞活性和血清因子的影响

在饲料中分别添加w/10-3为0,0.5,1.0,1.5,2.0维生素C(VC)。在饲喂胡子鲶Claris fuscus的第12、24、36和52天后,分别测定血液中自细胞吞噬活性、血清蛋白质质量浓度;在第24天,测定血液中淋巴细胞活性;在第12天和第52天,测定血清抗蛋白酶物质比活性;在第24天和第52天,测定血清VC质量浓度。结果表明,在饲料添加VC不能提高胡子鲶白细胞的吞噬指数(PI);对吞噬能力(PC)有影响;对淋巴细胞活性有明显的增强功能;血清抗蛋白酶物质比活性基本不受VC的影响;对血清蛋白质质量浓度有明显的提高作用;而对血清中VC质量浓度却有明显的降低作用。

胡子鲶致病性气单胞菌的分离鉴定及其致病力与毒力基因型相关性

为探讨广西南宁市、浦北县和玉林市暴发性死亡胡子鲶的病原菌及其所携带6种毒力基因对其致病力的影响,用常规方法从病鱼的心脏、肝脏等部位分离细菌,人工感染实验确定病原菌的致病性,以API 20NE生化鉴定和16S r RNA分子鉴定相结合的方法对病原菌进行鉴定,采用PCR扩增法检测病原菌的6种毒力基因携带情况。结果显示,从患病鱼中共分离到5株病原菌,其中嗜水气单胞菌3株,温和气单胞菌2株。3株嗜水气单胞菌与标准菌株Aeromonas hydrophila ATCC 7966(CP000462)的亲缘关系最近,相似性均为99.8%,2株温和气单胞菌与标准菌株Aeromonas sobria NO.106(AB472903.1)的亲缘关系最近,相似性均达99.9%。6种毒力基因在5株病原菌中的阳性检出率分别为Act和Aer基因100%,ahal、hly和Alt基因均为80%,ahp基因仅20%;毒力基因型共3种,在5株气单胞菌中分布情况为Act+ahal+hly+Alt+ahp-Aer+3株,占实验菌株的60%,为主要的毒力基因,Act+ahal+hly+Alt+ahp+Aer+和Act+ahal-hly-Alt-ahp-Aer+各1株,各占20%。携带全部所检6种毒力基因的菌株致病力最强,只携带Act和Aer 2种毒力基因的菌株致病力最弱。ahp基因在菌株的致病力中起重要作用,病原菌的致病力是多种毒力基因协同作用的结果。

胡子鲶粘液细胞类型及其在消化道中的分布

利用阿新兰过碘酸雪夫试剂染色方法 ,对胡子鲶粘液细胞类型以及在消化道中的分布进行了研究。根据AB PAS染色结果 ,将粘液细胞分为四型 :Ⅰ型 ,AB PAS染色呈红色 ,含有PAS阳性的中性粘多糖 ;Ⅱ型 ,AB PAS染色呈蓝色 ,含有AB阳性的酸性粘多糖 ;Ⅲ型 ,AB PAS染色呈紫红色 ,主要含有PAS阳性的中性粘多糖 ,同时含有少量AB阳性的酸性粘多糖 ;Ⅳ型 ,AB PAS染色呈蓝紫色 ,主要含有AB阳性的酸性粘多糖 ,同时含有少量PAS阳性的中性粘多糖。同时发现粘液细胞在消化道的各段均有分布 ,但是不同部位的粘液细胞数和类型均有差异。

野生胡子鲶“腹水病”病原分离和鉴定

从发生“腹水病”的野生胡子鲶体内分离出 14株致病菌 ,经生化鉴定 ,有 12株细菌 ( 87% )定为豚鼠气单胞菌(Aeromonascaviae) ,1株定为大肠埃希氏菌 (Escherichiacoli)。动物回归试验也证实了细菌的致病性。因此 ,本次野生胡子鲶发生“腹水病”主要病原是豚鼠气单胞菌。药敏试验结果对细菌有效的药物有头孢类抗生素、丁胺卡那霉素、卡那霉素、新霉素、氯霉素、庆大霉素。

胡子鲶(Claris fuscus Lacepede)肝脏、胆囊以及胰脏组织学的初步研究

胡子鲶 (Claris fuscus Lacepede)是我国长江流域以南的淡水水域所产鱼类 ,杂食性 ,但以肉食性为主 ,容易进行人工饲养 .本篇研究旨意 :主要是探讨该鱼消化系统中的主要消化腺 ,即肝脏、胆囊及胰脏的组织学结构特点 ,与鲤科 (Cyprinidae)鱼类比较 ,有相同之处 ,但也有独特之处 .主要报道这方面的研究成果 ,为今后鲶亚目 (Siluroidei)

SRY盒基因在斑马鱼和胡子鲇中的保守性分析

本文采用人类ＳＲＹ基因探针，与ＥｃｏＲＩ消化的中国的胡子鲇（Ｃｌａｒｉａｓｆｕｓｃｕｓ）和美国的斑马鱼（Ｂｒａｃｈｙｄａｎｉｏｒｅｒｉｏ）基因组ＤＮＡ进行了Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交分析。首次在这两种鱼中发现了ＳＲＹ盒基因及其存在的特征；在斑马鱼中发现了明显的限制性片段长度多态性；并深入分析了ＳＲＹ盒基因的进化保守性。