毛头鬼伞发酵产物抑菌特性的初步研究

为探究毛头鬼伞发酵产物的抑菌特性,采用管碟法测定毛头鬼伞胞内和胞外发酵产物对4种食源性致病菌的抑菌活性。结果表明:毛头鬼伞发酵产物中主要抑菌成分为胞外产物,且相同浓度的胞外产物对革兰阳性菌单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌的抑菌效果显著好于革兰阴性菌大肠埃希菌和沙门菌;对单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和肠炎沙门菌的最低抑菌浓度分别为15.60、31.25、32.15、62.50 mg·mL-1;在酸性环境中胞外产物具有抑菌活性,且以pH 3.5时活性最高;不同温度处理胞外产物后对4种致病菌的抑菌活性无显著变化;胞外产物中极性部分对4种致病菌的抑菌活性强于弱极性部分。经Cleanert IC-RP25 (简称RP)柱处理后,结果显示抑菌活性物质主要为小分子物质。综上,该研究为今后毛头鬼伞发酵产物中抑菌活性物质的分离纯化提供了依据,也为毛头鬼伞发酵产物的开发利用奠定了理论基础。

毛头鬼伞的本草考证及不良反应研究进展

目的探究药用真菌毛头鬼伞的用药历史与现代研究进展,为毛头鬼伞进一步研究应用提供参考。方法查阅古代本草专著,对毛头鬼伞的名称、产地、形态、药性、功效进行考证,并结合现代文献研究进行深入探索。结果毛头鬼伞用药历史悠久,其古代名称为鬼盖、地盖、鬼屋等,现代称毛头鬼伞、鸡腿菇。性平、味甘,归胃、心经,主治小儿寒热惊痫证、疔疮肿毒、恶疮、蜈蚣蛇蝎伤。现代药理学研究表明毛头鬼伞具有抗氧化、抗癌、保护肝脏、抗炎、抗糖尿病、抗菌、抗病毒和抗线虫活性等药理作用。通过系统查阅古今文献发现,毛头鬼伞可能引起双硫仑样反应、胃肠炎型中毒、特应性皮炎患者的皮肤反应、富集重金属等不良反应。结论通过对毛头鬼伞的本草考证及不良反应进行总结,可为毛头鬼伞的安全利用提供依据。

毛头鬼伞漆酶基因Cc_lac21的克隆及生物信息学和组织表达分析

为了确定毛头鬼伞基因组中漆酶基因Cc_lac21的“缺口”序列及可能的生理功能,本研究对其进行克隆和生物信息学分析,并以18S rDNA为内参基因,检测菌丝阶段以及商品成熟阶段子实体的菌盖、菌柄顶端和菌柄基部Cc_lac21的表达水平。结果表明,Cc_lac21基因全长2243 bp,含有12个内含子、13个外显子,编码序列为1452 bp,编码483个氨基酸。Cc_Lac21为稳定的亲水性蛋白,N端前17个氨基酸为信号肽序列,分泌到胞外;二级结构以无规则卷曲和延伸链为主;在28个丝氨酸(S)、21个苏氨酸(T)和5个酪氨酸(Y)上可能发生磷酸化修饰;在第286位的苏氨酸和第381位的丝氨酸处可能发生O-糖基化修饰;含有3个铜氧化蛋白结构域,分别是2个铜氧化还原蛋白超家族(cupredoxin super family)和1个云芝Tv-LCC样真菌漆酶的第三个铜氧化还原域(CuRO_(3)_Tv-LCC9);与鳞白环蘑漆酶的亲缘关系最近,包含3个基序。通过RT-qPCR分析发现,Cc_lac21在菌丝体阶段和成熟菌柄基部表达量高,在菌盖和伸长生长的菌柄顶端表达量低,推测Cc_lac21可能参与基质木质素的降解以及菌柄中菌丝细胞壁的成熟过程。本研究结果可为探究漆酶基因参与菌柄细胞壁成熟机制奠定基础。

1株祁连山野生毛头鬼伞菌株鉴定及生物特性研究

采用形态学和分子生物学方法鉴定采自祁连山的1株野生毛头鬼伞菌株,研究该菌株基本生物学特性,开展以棉籽壳为主料的出菇试验。结果表明:该菌株为毛头鬼伞(Coprinus comatus);菌丝生长最适碳源为葡萄糖,最适氮源为酵母粉,最适碳氮比为80∶1,最适pH为8,最适生长温度为25℃;棉籽壳栽培生物学效率达88%。

鬼伞属中国新记录种——椰枣色孢鬼伞

对采自山西省五台山自然保护区的一份鬼伞属标本进行详细的形态学观察,包括其菌盖、菌柄、菌褶等宏观结构以及孢子、担子、囊状体等微观结构。结果表明:其主要特征为子实体较小;菌盖白色至黄褐色,直径3~4 cm;菌褶直生,微微发黄,从白色逐渐变成黑褐色,致密,长度不一,不等长;孢子为暗褐色,椭圆形至宽椭圆形,表面光滑,(9.0~11.0)μm×(5.5~6.5)μm;担子(28.0~40.0)μm×(10.0~28.0)μm,具有4个担子小梗;缘囊体(20.0~50.0)μm×(10.0~25.0)μm,无其他囊状体。通过rDNA内转录间隔区(ITS)的特异性扩增、序列比对,发现该标本的序列与椰枣色孢鬼伞(Coprinus spadiceisporus)Bogart的序列相似度高达100%。基于内转录间隔区序列,采用最大似然法(ML)、贝叶斯分析法(BI)构建的系统发育树也支持此物种为椰枣色孢鬼伞(Coprinus spadiceisporus),支持值分别为100、1。综合形态学、分子鉴定以及系统发育树的分析,确定采自山西省五台山自然保护区的大型真菌标本为鬼伞属中国新记录种——椰枣色孢鬼伞。

陕西省大型真菌新记录种--吉林拟鬼伞

通过对秦岭南麓黄柏塬自然保护区中大型真菌的本底资源进行调查,以传统形态学及分子系统学相结合的方法对样品进行了鉴定,确定采集到的吉林拟鬼伞(Coprinopsis jilinensis)为陕西省新记录种。该物种的子实体小型至中型。菌盖直径3~7 cm,幼时钟型,成熟扁半球型,顶部稍脐凸,浅灰褐色;表面具丰富的菌幕,菌盖被白色纤毛,边缘具丝膜状菌幕。菌柄长3~6 cm,直径1.0~1.5 cm,中生,棒状,被白色从毛鳞片,基部有白色索状菌丝体。担孢子4.3μm×8.7μm;担子[(3.6~8.9)×(21.4~33.9)]μm,具2~4小梗。

庭院小鬼伞的培养特性及个体发育

为探讨鬼伞类真菌的培养特性和丰富个体发育研究材料,通过对采集的野生子实体进行分离培养,基于内转录间隔区间(internal transcribed spacer,ITS)进行序列鉴定,通过培养菌丝测定生物学特性,通过出菇实验观察该菌各个发育阶段的形态,采用石蜡切片法观察个体发育过程。结果表明:该野生子实体为庭院小鬼伞(Coprinellus xanthothrix);菌丝生长最适碳源为葡萄糖,最适氮源为蛋白胨,最适温度为25℃,最适pH为6~7;当培养料配方为37%木屑、33%玉米芯、18%麸皮、5%玉米粉、3%石灰、3%杨树枝及自然掉落的树叶、1%石膏时,可获得子实体;原基发育初时为菌柄菌盖发育型,很快转为同步发育型。

一株降解园林绿化废弃物的毛头鬼伞的鉴定与固体产酶发酵条件优化

本研究以试验前期筛选到的一株野生产木质纤维素酶活性的食用菌为材料,根据形态学与rDNA-ITS序列对该食用菌进行鉴定。以园林废弃物粉为主要原料,采用单因素试验及正交试验对固体产酶条件进行优化。结果表明:试验食用菌菌株为毛头鬼伞Coprinus comatus。单因素试验证明:氮源、初始pH、温度和接种量为降解木质纤维素的显著影响因子,正交试验确定毛头鬼伞产羧甲基纤维素酶活性最优条件为:pH为7、温度25℃、接种量10%、碳氮比为15:1。该研究结果为园林废弃物木质纤维素的降解提供了良好的菌种资源,同时也为后续园林废弃物木质纤维素降解方面的研究积累了相关数据。

河南的鬼伞科真菌资源研究

根据野外采集的标本，经鉴定、整理河南境内生长分布的鬼伞科（Ｃｐｏｒｉｎａｃｅａｅ）的大型真菌资源种类有１２种，分别隶属鬼伞属（Ｃｐｏｒｉｎｕｓ）、小脆柄菇属（Ｐｓａｔｈｙｒｅｌａ）和斑褶菇属（Ｐａｎａｅｏｌｕｓ）。其中食用菌７种、药用菌４种、毒菌３种。此外，还有些种类的子实体含有抗癌物质，具有抑制肿瘤的作用。

毛头鬼伞(Coprinus comatus)中一种碱性蛋白的纯化及其活性

用离子交换层析 (CM sepharoseFF)和凝胶层析 (SuperdexTM75 )方法 ,从新鲜食用菌毛头鬼伞 (Coprinuscomatus)子实体中分离纯化出一碱性蛋白y3,经SDS PAGE初步确定其分子量约为 1 4 4kD。活性检测结果显示 :当其浓度为 1 2 5 μg mL时 ,对烟草花叶病毒 (TMV)在心叶烟枯斑寄主上的侵染抑制率达 83 0 % ;y3对兔血凝集活性滴度为 2 5,对人血凝集活性滴度为 2 6,其浓度分别为 1 5 62 μg mL和 0 781 μg mL ;利用胃癌细胞株MGC 80 3检测y3体外抗肿瘤活性 ,其IC50 为 1 2 μg mL。y3N 端序列为NRDVAACARFIDDFCDTLTP ,为一新的蛋白序列。在SWISS PORT上登录号为P83477。

毛头鬼伞(Coprinus comatus)中一种抗病毒蛋白y3特性和氨基酸序列分析(英文)

食用菌中含有多种抗病毒蛋白,可用于植物保护.利用离子交换层析技术和凝胶层析技术,从食用菌毛头鬼伞中提取到抗植物病毒蛋白y3.实验结果表明,y3是一种糖蛋白,利用Western杂交方法可以在发酵菌丝体和子实体中同时检测到,说明可能是组成型表达.根据其N端氨基酸序列,使用RACE-PCR克隆技术,获得了蛋白的氨基酸序列和部分cDNA序列.浓度为2.0μg/ml时,蛋白y3对烟草花叶病毒(TMV,20μg/ml)侵染心叶烟的抑制率为50%,实验同时表明,y3还可抑制病毒在寄主普通烟Nicotiana tabacum var.K326中的复制.

毛头鬼伞多糖抗烟草花叶病毒(TMV)活性研究初报

【目的】为探讨毛头鬼伞多糖(Coprinus comatus)的生物活性,对毛头鬼伞多糖抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)活性进行测定,明确活性部位,为进一步分离纯化提供理论依据。【方法】从毛头鬼伞子实体和菌丝体提取多糖,并初步纯化,采用半叶法和叶碟法对抗病毒活性进行测定。【结果】毛头鬼伞多糖对TMV具有较强的体外抑制和抗病毒侵染作用,对TMV具有明显的体内抑制复制效果;在TMV接种前施用可以显著降低TMV侵染能力。【结论】毛头鬼伞多糖具有较好的抗TMV活性,为其进一步开发利用提供理论依据。

毛头鬼伞的红外光谱研究

利用傅里叶变换红外光谱法(FTIR)研究了人工栽培与野生的毛头鬼伞,及其液化前后的菌盖样品。毛头鬼伞的红外光谱主要由蛋白质、多糖的特征吸收峰组成。人工菌与野生菌的光谱差异表现为蛋白质和多糖的特征峰强度比,野生菌的多糖特征吸收峰要比人工菌的吸收峰明显。菌盖液化黑色物与液化前的菌盖光谱相比,多糖特征峰明显减弱,表明菌褶液化现象主要是多糖的变化。红外光谱结果为毛头鬼伞的进一步的开发研究提供了参考信息。

毛头鬼伞(Coprinus comatus)多糖的理化性质及体外抗氧化活性

毛头鬼伞(Coprinus comatus)子实体经热水浸提、乙醇沉淀、脱蛋白和真空干燥后得到毛头鬼伞多糖。经定性化学反应和光谱鉴定,毛头鬼伞多糖不含蛋白质、核酸、酚类物质和糖醛酸,为非淀粉类中性多糖,均分子量为947 kD,完全酸水解后经气相色谱分析确定其糖基组成及其摩尔组成比为葡萄糖∶甘露糖∶半乳糖=10.5∶1.7∶1。通过对脱氧核糖体系产生的羟基自由基(.OH)的清除作用和邻苯三酚自氧化系统产生的超氧阴离子自由基(O2-.)的清除作用,对毛头鬼伞多糖体外抗氧化活性进行的研究结果表明:该多糖具有一定的抗氧化活性。

丹参药渣栽培糙皮侧耳和毛头鬼伞

采用不同比例丹参（Salviae miltiorrhiza）药渣替代玉米芯对糙皮侧耳（Pleurotus ostreatus）、毛头鬼伞（Coprinus comatus）供试菌株进行栽培实验。经栽培收获两茬子实体,分别对不同配方两个菌种的菌丝长速、单位料重产量、生物学效率等指标进行统计分析。结果表明：在单位料重产量及生物学效率表现上,随培养料中所含丹参药渣比例增加而增加;在菌丝长速表现上则相反。经丹参药渣、玉米芯的碳氮比分析（28.5∶1;88.1∶1）得知,栽培料中随药渣含量的增加氮素含量相应提高（碳氮比55.27∶1~27.44∶1,氮含量为0.76%~2.43%）,成为两个菌种产量增加的主要原因。

毛头鬼伞多糖CCP60a对TMV外壳蛋白的影响

对毛头鬼伞(Coprinus comatus Muell.ex Fr.)子实体中的多糖CCP60a进行了提取分离及检测,研究了不同温度条件下CCP60a对烟草花叶病毒(TMV)外壳蛋白体外聚合的影响,并用Western blotting法研究了CCP60a对TMV外壳蛋白表达的影响。结果表明,经沸水浸提、乙醇分级沉淀、DEAE Sephadex A-25离子交换柱层析、Sepharose-6B凝胶柱层析和抗TMV活性跟踪检测可得到均一的多糖CCP60a。随温度的提高,CCP60a处理组在320nm处的吸光度值增加幅度明显小于对照组,表明CCP60a对TMV外壳蛋白体外聚合有一定的抑制作用。Western blotting检测结果显示,CCP60a可以使TMV外壳蛋白的表达明显降低。

酶法辅助提取毛头鬼伞子实体粗多糖的研究

用酶法辅助提取毛头鬼伞(Coprinus comatus)子实体粗多糖,对酶的种类、用量、酶解温度和时间进行了优化,结果表明:木瓜蛋白酶对毛头鬼伞多糖的提取效果最好,以1%的木瓜量白酶用量在50℃条件下酶解7h可使多糖得率达2.23%,约是蒸馏水提取所得的2倍;HPLC分析结果表明,酶解法更有利于毛头鬼伞多糖中低分子量组分(～10kDa)的释放;酶法辅助和水提法所得多糖均具有刺激巨噬细胞释放NO的活性。

不同产地毛：头鬼伞子实体多糖特征及其刺激巨噬细胞产生NO的活性

用水提醇沉法从6个不同产地毛头鬼伞(Coprinus comatus)子实体中获得6种粗多糖,6种粗多糖得率及多糖含量差异较大,以湖北(HB)的最高,其次为云南(YN)的;各粗多糖分子量分布相似,单糖组成均以葡萄糖为主,并含有少量半乳糖;除福建(FJ)外,其余5种粗多糖均能增强小鼠巨噬细胞RAW264.7释放NO的产量,以YN和HN的活性较好,总体来说,YN的多糖产量及活性较好。

墨汁鬼伞生物学特性研究

试验结果表明,培养墨汁鬼伞的最适碳源是葡萄糖+玉米淀粉,最适氮源是蛋白胨,最适温度为25℃,最适pH为7.0～7.5;最适料水比为1∶1.4(培养料含水量为58.3%)。

维C银翘片复方药渣栽培毛头鬼伞初探

用维C银翘片复方药渣为主料,替代常规培养料中的玉米芯,分别以熟料(药渣80%、麦麸10%、玉米粉6%、其他4%)、发酵料(药渣70%、牛粪20%、麸皮5%、其他5%)两种栽培方式栽培毛头鬼伞(Coprinus comatus).结果表明,两种栽培方式下菌丝均能正常生长发育,在菌丝长速、污染率、覆土后菌丝布满土面时间、第一茬采菇时间、子实体产量及生物学效率等方面与常规培养料差异不显著(P<0.05),因此将该复方药渣应用于实际生产具有可行性;采用发酵料栽培,菌丝满袋时间、单位袋料基质湿重产量显著优于熟料栽培(P<0.01),但菌丝长速显著(P<0.05)、生物转化率极显著(P<0.01)差于熟料栽培方式.