抗肿瘤药鬼臼毒素衍生物构效关系的研究

目的：探讨鬼臼毒素衍生物的三维定量构效关系 (three- dimensional quantitative structure- activity relationship,3D- QSAR)及活性部位。方法：用比较分子力场分析 (comparative molecular field analysis, CoMFA)方法对鬼臼毒素 23个衍生物进行了三维定量构效关系研究，然后用 AM1(Austin model 1)方法进行计算，讨论它们的 3D- QSAR及活性部位。结果：以 CoMFA方法建立了一个有较强预测能力的 QSAR模型。在对体外 L1210白血病细胞生长的抑制活性上， C4位为改变活性的有效修饰位点；其 B环是药物分子接受电子部分，对保持此类药物的生物活性有重要作用； E环及其含氧取代基是分子的负电中心。结论：所得 CoMFA模型可预测该类化合物的活性，化合物 B环及 E环是重要的活性部位。

4′-去甲表鬼臼毒素衍生物4β-取代结构修饰研究进展

在保留反式内酯环及 C- 4′游离酚羟基的基础上 ,对 C- 4位取代氧原子或其电子等排体同系物 S、N、Se的β-构型取代基的变换修饰是国内外学者近年来主要的研究方向 ,显示出良好的前景。基于 DNA拓扑异构酶结构的 4′-去甲表鬼臼毒素衍生物的设计和合成将更加有助于寻找高效、低毒的新化合物。

鬼臼毒素衍生物的研究进展

目的对鬼臼毒素衍生物的研究概况进行综述,为鬼臼毒素衍生物的深入研究提供依据。方法通过阅读近5年来29篇相关文献报道,从鬼臼毒素衍生物的抗癌作用机制、合成、构效关系等方面对其目前的研究概况进行综述。结果鬼臼毒素衍生物的合成目前仍以鬼臼毒素C4位修饰为主,最新的文献研究表明与C4位有含氧取代基的鬼臼毒素衍生物相比,相应位置没有取代基的鬼臼毒素类似物细胞毒活性更强。结论为鬼臼毒素衍生物的合成提供参考数据。

二醇及氨基醇类鬼臼毒素衍生物的合成

以天然产物鬼臼毒素(1)为原料,合成了四种二醇及氨基醇类鬼臼毒素衍生物:4-O-乙基表鬼臼苦醇(4),(1R,2S,3R,4S)-1-3’,4’,5’-三甲氧基苯基-2-氨甲基-3-羟甲基-4-乙氧基-6,7-亚甲二氧基-1,2,3,4-四氢萘(5),(1R,2S,3R,4S)-1-3’,4’,5’-三甲氧基苯基-3-羟甲基-2-氨基-4-乙氧基-6,7-亚甲二氧基-1,2,3,4-四氢萘(6)和4-O-异丙基表鬼臼苦醇(7)。4～7及中间产物8～11都是新化合物。

4-S-(5"-烃基-4"-氨基-1",2",4"-三唑-3"-基)-4-去氧-4'-去甲基表鬼臼毒素衍生物的合成及抗肿瘤活性

许多有显著抗肿瘤活性的鬼臼毒素类化合物，其母核Ｃ４侧链上往往连接有刚性较强的脂环或芳香环结构，而且侧链多含有一定数量的杂原子［１～３］。另外，三氮唑类化合物大都有广泛的生物活性，如抗菌［４～５］、抗病毒［６］、抗肿瘤［７］等，据此，我们设计并合成了...

新型鬼臼毒素衍生物LGN体外诱导人肺腺癌细胞A549凋亡

目的研究新型鬼臼毒素衍生物LGN体外诱导人肺腺癌细胞A549凋亡的作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝法检测LGN抑制人肺腺癌细胞株A549增殖的情况,利用Giemsa染色、Hoechst染色、流式细胞仪、DNA ladder检测LGN诱导人肺腺癌细胞株A549凋亡的情况,利用反转录-聚合酶链反应检测凋亡相关基因半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、原癌基因bcl-2、促凋亡基因bax、p53等。结果 LGN对A549细胞有良好的抑制活性,半数抑制率明显优于阳性对照药依托泊苷,差异有统计学意义(P<0.05)。LGN可诱导A549细胞产生显著凋亡,并可增加A549细胞中p53、caspase-3及bax的mRNA表达,同时降低bcl-2的mRNA表达,并有良好的量效关系。结论鬼臼毒素新衍生物LGN可以诱导A549细胞发生凋亡,其机制可能与调节凋亡相关基因表达有关。

去甲基脱氧鬼臼毒素衍生物DPPC诱导A549细胞凋亡的研究

目的探讨鬼臼毒素衍生物L-N-甲酰-4'-去甲基脱氧鬼臼-甲硫-4-N-哌嗪酰胺(DPPC)抑制人非小细胞肺癌A549细胞的增殖作用,阐述DPPC诱导A549细胞凋亡的相关分子机制。方法体外培养A549细胞,Hochest33258检测DPPC处理A549细胞后细胞凋亡现象;Annexin V-FITC/PI双染定量检测DPPC处理后细胞凋亡数量;蛋白免疫印迹实验检测凋亡基因p53、caspase-3、Bax的表达。并与依托泊苷(阳性对照组)和未给予任何药物处理的A549细胞做对照。结果 DPPC组A549细胞中γ-H2AX的表达量较阴性对照组和阳性对照组都有明显的增加。荧光显微镜下见DPPC处理后的A549细胞核呈现萎缩,并出现细胞凋亡小体。与阴性对照组比较,不同浓度DPPC处理A549细胞后,抑制肿瘤发生发展的p53基因表达增加,并呈剂量依赖性,其下游的凋亡相关蛋白caspase-3以及Bax表达增加(P<0.05,P<0.01)。相同浓度的DPPC和依托泊苷抑制凋亡相关蛋白有明显的差异(P<0.05)。结论DPPC能够引起A549细胞DNA损伤,并诱导细胞凋亡,DPPC能够使细胞内凋亡相关蛋白表达异常,抑制A549细胞增殖;此外,DPPC体外表现出优越的抗肿瘤细胞增殖作用。

一类鬼臼毒素衍生物抗癌(KB细胞)活性的三维定量构效关系

采用比较分子场分析(CoMFA)和比较分子相似因子分析(CoMSIA)方法,对99个鬼臼毒素衍生物的抗癌活性系统地作了三维定量构效关系研究,均得到了较为理想的模型.CoMFA所得模型的交叉验证系数q^2=0.644,非交叉验证相关系数r^2=0.930,标准偏差S=0.134,F=161.325,立体场与静电场贡献分别为64.6%和35.4%.CoMSIA所得模型的q^2=0.764,r^2=0.964,S=0.096,F=324.112,立体场、静电场、疏水场、氢键给体场、氢键受体场贡献分别为9.5%,22.0%,21.9%,23.9%和22.7%.两模型的等值面图为改造此类化合物的结构、提高药物活性提供了理论依据和研究方向.

鬼臼毒素衍生物CIP-36诱导KBV200细胞凋亡

目的研究鬼臼毒素衍生物CIP-36对多药耐药人口腔鳞状上皮癌细胞KBV200的抗肿瘤活性及其作用机制。方法MTT法考察CIP-36对KBV200体外增殖的抑制作用;Giemsa染色、DNAladder和流式细胞仪等方法进行细胞凋亡检测;免疫荧光法观察CIP-36对细胞骨架的作用;West-ernblot法检测CIP-36对KBV200细胞P-glycoprotein表达的影响。结果CIP-36对KBV200细胞有明显的抑制作用,IC50值为(2.06±0.38)μmol.L-1,能够诱导细胞产生凋亡小体和DNAladder。流式细胞检测到了细胞凋亡峰,并观察到细胞周期出现S/G2+M期阻滞。Westernblot结果显示P-gp表达降低,并且观察到CIP-36可破坏KBV200细胞的细胞骨架。结论CIP-36可能通过降低P-gp的表达,破坏细胞骨架等多靶点克服KBV200细胞株的多药耐药性。

鬼臼毒素衍生物LN-13诱导多药耐药细胞K562/A02凋亡及其机制

目的研究新型鬼臼毒素衍生物LN-13对多药耐药肿瘤细胞株K562/A02产生的凋亡作用及潜在机制。方法MTT法测定LN-13和阳性对照药VP-16抑制K562/A02细胞48 h后的生长情况及其IC50值,Hoechst 33342、PI双染色观察LN-13作用K562/A02细胞48 h后的形态变化,流式细胞术测定LN-13作用K562/A02细胞48 h的凋亡情况,RTPCR检测LN-13作用K562/A02细胞后Bcl-2、Bax、Caspase-3、mdr-1基因表达的影响,Western blot检测LN-13作用K562/A02细胞后P-gp的表达情况。结果 LN-13对K562/A02细胞生长有显著地抑制,IC50值3.32μmol·L^(-1),Hoechst 33342、PI双染色观察到LN-13作用后,K562/A02细胞发生明显凋亡形态。流式细胞术检测LN-13(2、4、8μmol·L^(-1))作用K562/A02细胞48 h后,出现剂量递增趋势的凋亡比例,分别达到15.0%、48.0%、68.96%。另外,随着LN-13剂量增加,K562/A02细胞的Bax、Caspase-3基因表达增加,mdr-1基因表达减少,另外也下调了P-gp表达,差异有统计学意义。结论 LN-13可诱导多药耐药肿瘤细胞K562/A02产生凋亡作用,其机制可能是通过抑制P-gp蛋白表达及凋亡相关基因表达。

新型酰胺类鬼臼毒素衍生物的合成及体外抗肿瘤活性

目的:通过对鬼臼毒素母核进行结构改造,以获得高效、低毒、抗多药耐药的新型鬼臼毒素衍生物。方法:将4β-氨基-4-脱氧表鬼臼毒素的C-4位经酰胺化分别引入对位取代的苯甲酸和对位取代的肉桂酸化合物,得到4-甲酰基苯甲酸及4-甲酰基肉桂酸的鬼臼毒素类衍生物,通过MTT法筛选,并对K562和Hela细胞进行药理活性评价。结果:合成得到两个系列共8个化合物,所有化合物都经过HR-ESI-MS和1HNMR验证,其中化合物1d、2b具有较强的体外抗肿瘤活性。结论:在C-4位引入4-甲酰基苯甲酸以及4-甲酰基肉桂酸基团可增加鬼臼毒素类衍生物的抗肿瘤活性。

鬼臼毒素衍生物SQW-76诱导人骨肉瘤细胞凋亡及其机制

目的:研究鬼臼毒素衍生物SQW-76对人骨肉瘤U-2 OS细胞的抗肿瘤活性并探讨其机制。方法:噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)法检测SQW-76及阳性对照药物依托泊苷(VP-16)和阿霉素(adriamycin,ADM)对U-2 OS细胞和成纤维细胞体外增殖的抑制作用及对U-2 OS细胞生长曲线的影响;异硫氰酸荧光素-碘化丙啶(fluorescein isothiocyanate-propidium iodide,FITC-PI)双染行流式细胞术测细胞凋亡;聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测SQW-76对U-2 OS细胞凋亡相关基因表达的影响;caspase总抑制剂及caspase-3抑制剂对SQW-76诱导U-2 OS细胞凋亡的影响;JC-10线粒体膜电位检测法测SQW-76对U-2 OS细胞凋亡线粒体通路的影响;检测Caspase-3蛋白活性。结果:SQW-76在体外对U-2 OS细胞抑制作用明显,IC50值为(6.18±0.3)μmol/L,流式细胞术检测SQW-76通过凋亡途径抑制细胞,PCR发现给药后Caspase-3、caspase-9 mRNA表达水平上调,加入Caspase总抑制剂可明显抑制细胞凋亡,加入Caspase-3抑制剂可轻微抑制细胞凋亡,给药后线粒体膜电位降低,Caspase-3蛋白活性增高。结论:SQW-76在体外试验抗骨肉瘤细胞作用明显且体细胞毒性低于阳性药物VP-16、ADM,其可能通过影响caspase-9、caspase-3相关基因诱导线粒体凋亡通路诱导U-2 OS细胞凋亡。

吲哚草酰类鬼臼毒素衍生物的合成及其抗肿瘤活性

目的:获得高活性且具有抗多药耐药活性的抗肿瘤新化合物。方法:5-甲氧基吲哚与氯代物或酰氯反应得到一位氮取代的5-甲氧基吲哚。将其与草酰氯反应,再以4β-氨基-4’-去甲表鬼臼毒素为原料,经缩合反应得到目标化合物。体外活性采用Hela细胞筛选模型进行评价。结果:通过草酰桥成功将吲哚和去甲表鬼臼毒素拼接,并对吲哚一位进行改造,合成了8个新化合物。结论:合成的8个化合物中部分具有良好的抗肿瘤活性,其中化合物7a、7b的活性优于阳性对照依托伯苷。

鬼臼毒素衍生物GP-14对HL-60细胞凋亡及端粒酶活性的影响

目的 观察自旋标记鬼臼毒素衍生物 4 β -N -〔4″- (2″,2″ ,6″ ,6″ -四甲基 - 1″ ,2″ ,5″,6″ -四氢吡啶 - 1″ -氮氧自由基 ) -酰胺基〕 - 4′ -去甲基表鬼臼毒素 (GP - 14 )对人白血病细胞系HL - 6 0的作用及对端粒酶活性的影响。方法 采用MTT法、电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测GP - 14对HL - 6 0细胞的作用 ;TRAP -ELISA法测定端粒酶活性。结果 GP - 14可明显抑制HL - 6 0细胞增殖。在一定剂量和时间范围内 ,GP - 14主要诱导HL - 6 0细胞凋亡 ,5 0 μmol/L处理 4 8小时凋亡率为 4 3 8% ;并可使端粒酶活性下降。 结论 GP - 14能特异地诱导HL - 6 0细胞凋亡 ,抑制细胞端粒酶活性 ,对端粒酶活性的抑制作用比同等浓度的VP - 16强。为进一步开发其临床价值提供了依据。

鬼臼毒素衍生物Lg-2对人肝癌细胞系HepG-2凋亡的诱导作用

目的研究N-(1-烃氧基-2,2,6,6-四甲基-4-哌啶基氧羰基)-L丙氨酸-4'-去甲-4-脱氧鬼臼酯(Lg-2)对人肝癌细胞系HepG-2的诱导凋亡作用及机制。方法分别设阴性对照组(只加HepG-2细胞)、VP-16处理组及Lg-2处理组3组,采用MTT法检测Lg-2对HepG-2细胞生长的影响,流式细胞术检测Lg-2对HepG-2细胞周期和凋亡的影响,荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)技术检测Lg-2对HepG-2细胞凋亡相关基因p53、Bax、Bc1-2、p21、Caspase 3表达的影响;设阴性对照组及Lg-2处理组2组,Hoechs33258染色检测Lg-2对HepG-2细胞形态学的影响。结果 MTT法证实Lg-2对HepG-2细胞增殖有明显的抑制作用,药物处理48 h,随药物浓度增加(同一时间时)抑制效应增强,Lg-2处理组各浓度HepG-2抑制率均高于VP-16处理组(P<0.05)。随药物作用时间的延长(同一浓度时)抑制效应增强,Lg-2处理组各作用时间HepG-2抑制率均高于VP-16处理组(P<0.05)。流式细胞术显示,Lg-2作用于HepG-2细胞24和48 h时,Lg-2处理组S期细胞比例与阴性对照组及VP-16处理组比较均明显增高,而G2/M期细胞显著减少。qRT-PCR检测细胞凋亡相关基因,结果表明Lg-2处理组与VP-16处理组相比Bc1-2 mRNA的表达显著降低(P<0.05),而p53、Bax、p21、Caspase3 mRNA的表达显著增高(P<0.05)。Hoechst33258染色显示Lg-2处理组细胞核固缩、碎裂,呈凋亡样改变。结论 Lg-2可抑制肝癌细胞增殖,使细胞阻滞在G2/M期,该过程可能与其上调p53、bax、p21、caspase3表达和下调bc1-2基因的表达有关。

鬼臼毒素衍生物Z-26-2诱导K562/A02细胞凋亡实验研究

【目的】研究鬼臼毒素衍生物Z-26-2对多药耐药肿瘤细胞株K562/A02的促凋亡作用。【方法】体外培养K562/A02细胞,经Z-26-2作用后,应用SRB法测定GI50及生长曲线;Giemsa染色、荧光染色、DNA ladder、流式细胞术观察Z-26-2诱导K562/A02细胞凋亡作用。【结果】Z-26-2对K562/A02细胞促凋亡作用显著,呈现典型的"DNAladder",流式细胞术发现经不同浓度的Z-26-2(1μm、2μm)作用K562/A02细胞12h、24h后,出现明显的凋亡峰,且凋亡细胞的比例随着Z-26-2浓度的升高而增加,呈一定的剂量依赖性,并可将细胞周期阻断在S期。【结论】Z-26-2通过调控细胞周期驱动机制使细胞发生周期阻滞,对多药耐药肿瘤细胞k562/A02具有明显抑制作用。

鬼臼毒素衍生物CIP-36抗肿瘤多药耐药的机制

研究鬼臼毒素衍生物CIP-36对耐药人口腔鳞状上皮癌细胞KBV200的抗肿瘤活性及其作用机制。采用MTT法观察CIP-36对多种肿瘤细胞和正常细胞的体外抑制作用以及对KB和KBV200细胞生长曲线的作用,Hoechst荧光染色进行细胞凋亡检测,RT-PCR检测CIP-36对KB及KBV200细胞p53、p21、caspase-3、bax、mdr-1和bcl-2的mRNA表达的影响,免疫组织化学检测观察CIP-36对KBV200细胞P-gp表达的影响。结果表明,CIP-36对多种肿瘤细胞均有较好的抑制作用,且对耐药株细胞均有明显抑制作用。荧光染色结果显示,CIP-36可诱导KBV200细胞凋亡。同时CIP-36可剂量依赖性地增加KBV200及KB细胞的p53、p21、caspase-3及bax的mRNA表达,同时降低mdr-1和bcl-2的mRNA表达,与对照组比较差异均有统计学意义。免疫组织化学检测结果显示,CIP-36显著降低KBV200的P-gp表达。提示CIP-36可能通过影响多个与肿瘤耐药相关基因和蛋白的表达来克服肿瘤细胞株的多药耐药性。

鬼臼毒素衍生物QW-83对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响及其机制研究

目的：研究鬼臼毒素衍生物QW-83对人宫颈癌He La细胞凋亡的影响及其机制。方法：以0（阴性对照）、0.01、0.1、1、10μmol/L QW-83和阳性药物依托泊苷（VP-16）分别培养人宫颈癌He La细胞48 h后,采用MTT法测定细胞的增殖抑制率和半数抑制浓度（IC50）;以0（阴性对照）、2.5、5、10μmol/L QW-83培养细胞48 h后,采用Hochest 33342染色观察细胞形态,采用流式细胞术测定细胞凋亡率,采用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测细胞中凋亡相关基因P53、Bax、Casepase-3、Casepase-8、Casepase-9和Bcl-2 m RNA的表达。结果：与阴性对照比较,1、10μmol/L VP-16和QW-83对He La细胞增殖有明显的抑制作用（P〈0.05或P〈0.01）,IC50值分别为（5.11±0.43）、（4.96±0.54）μmol/L;染色结果显示,QW-83作用后细胞凋亡明显,细胞固缩;流式细胞检测结果显示,QW-83作用后细胞凋亡率呈浓度依赖性升高,为16.89%~62.56%;RT-PCR结果显示,QW-83作用后细胞中P53、Bax、Casepase-3、Casepase-8、Casepase-9 m RNA的表达增强,Bcl-2 m RNA的表达减弱,Bax/Bcl-2比例升高（P〈0.05）。结论：鬼臼毒素衍生物QW-83能诱导人宫颈癌He La细胞的凋亡,其机制可能与调控凋亡相关基因m RNA的表达有关。

鬼臼毒素衍生物NY-3诱导HeLa细胞凋亡及其机制探究

【目的】研究鬼臼毒素衍生物NY-3对人宫颈癌HeLa细胞的抗肿瘤活性并探讨其机制。【方法】MTT法检测NY-3及阳性对照药物VP-16(依托泊苷)对HeLa细胞体外增殖的抑制作用及对其生长曲线的影响;Hoechst 33342/PI双染、琼脂糖凝胶电泳技术和流式细胞术等方法进行细胞凋亡检测;RT-PCR检测NY-3对HeLa细胞凋亡相关基因表达的影响;动物移植肿瘤模型研究NY-3体内抗肿瘤作用。【结果】NY-3在体外对HeLa细胞具有明显的抑制作用,IC50值为(2.73±1.28)μmol/L,优于VP-16,其诱导细胞产生凋亡小体并呈现典型的"DNA ladder",流式细胞术检测出细胞被阻断在G2/M期,发现NY-3可以上调HeLa细胞Bax/Bcl-2比值及Caspase-3 mRNA表达水平,小鼠体内抗肿瘤研究NY-3在肿瘤抑制率、动物存活率等方面均优于阳性药物VP-16。【结论】NY-3在体外及体内实验表现均优于成熟阳性药物VP-16,其可能通过影响Bcl-2、Bax、Caspase-3等凋亡相关基因表达诱导HeLa细胞凋亡。