桂枝加龙骨牡蛎汤对魄不安于肺不寐大鼠脑组织Caspase-3、Bcl-2、Bax水平的影响

目的:探讨桂枝加龙骨牡蛎汤对魄不安于肺不寐大鼠脑组织Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响及其治疗魄不安于肺不寐可能的作用机制。方法:32只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药组和西药组,每组8只。采用水环境小平台法干预9 d建立魄不安于肺不寐大鼠模型,造模成功后,中药组予以桂枝加龙骨牡蛎汤7.6 g·kg-1·d-1灌胃,西药组予以右佐匹克隆片0.1 mg·kg-1·d-1灌胃,对照组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续14 d,测量体质量。采用免疫组织化学法及蛋白质免疫印迹法检测脑组织中Caspase-3、Bcl-2、Bax表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠体质量减轻(P<0.01),免疫组化检测结果显示,大鼠脑组织Bcl-2的表达显著减少(P<0.01),Caspase-3、Bax表达显著增加(P<0.01),Bcl-2/Bax比率显著减少(P<0.01);Western blot结果显示大鼠脑组织Bcl-2相对表达量显著减少(P<0.01),Bax、Caspase-3相对表达量显著增加(P<0.01)。与模型组比较,中药组及西药组大鼠体质量显著增加(P<0.01),免疫组化检测结果显示,大鼠脑组织Bcl-2表达增加(P<0.05),Caspase-3、Bax表达减少(P<0.05),Bcl-2/Bax比率显著升高(P<0.01);Western blot结果显示大鼠脑组织中Bcl-2相对表达量增加(P<0.05),Bax、Caspase-3相对表达量显著减少(P<0.01)。结论:桂枝加龙骨牡蛎汤改善魄不安于肺不寐大鼠的睡眠可能与增加其脑组织Bcl-2、降低Caspase-3、Bax表达水平有关。

桂枝加龙骨牡蛎汤改善魄不安于肺型不寐大鼠记忆的作用机制

目的探讨桂枝加龙骨牡蛎汤改善魄不安于肺型不寐大鼠学习记忆的作用机制。方法将48只SD雄性大鼠按照随机数字法分为造模组(36只)和正常组(12只)。造模组采用多组不稳定平台浅水环境法部分剥夺睡眠42 d。在第15 d随机分为模型组、右佐匹克隆组(西药组)、桂枝加龙骨牡蛎汤组(中药组),每组12只,再相应干预28 d。以水迷宫实验评价模型大鼠学习记忆功能及干预后的疗效,以脑电监测评价模型大鼠的快速动眼睡眠时间(REM)、非快速动眼睡眠时间(NREM)、觉醒次数、睡眠片段平均时间及各干预组的疗效。以尼氏染色观察大鼠海马齿状回多形层神经元的变化,以免疫组化法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)及IL-6的变化。结果与正常组比较,模型组第2、3、4、5 d逃避潜伏期显著延长(P<0.05),穿越平台总次数显著减少(P<0.05),NREM、REM、平均睡眠片段长度显著缩短(P<0.05),觉醒次数显著增加(P<0.05),神经元尼氏体数量变少,胶质细胞增多,脑TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平均显著升高(P<0.05)。与模型组比较,西药组第3 d和中药组第2、3、4、5 d逃避潜伏期均缩短(P<0.05),西药组和中药组穿越平台总次数均增加(P<0.05),NREM、REM、平均睡眠片段时间均显著增加(P<0.05),觉醒次数均显著降低(P<0.05),尼氏体增多,胶质细胞下降,脑TNF-α、IL-1β、IL-6相对表达水平均显著降低(P<0.05)。与西药组比较,中药组虽然逃避潜伏期均值较低,但无统计学差异(P>0.05),穿越平台总次数显著增加(P<0.05),REM、觉醒次数显著增加(P<0.05),平均睡眠片段长度显著下降(P<0.05),海马神经元较多,胶质细胞明显减少,脑TNF-α、IL-1β、IL-6显著下降(P<0.05)。结论桂枝加龙骨牡蛎汤能够显著改善魄不安于肺型不寐大鼠的睡眠及学习记忆功能,其部分机制可能与下调脑TNF-α、IL-1β和IL-6等炎症因子的水平有关。

桂枝加龙骨牡蛎汤对魄不安于肺不寐大鼠焦虑样行为的镇静机制

目的:从方剂组成上考察桂枝加龙骨牡蛎汤对魄不安于肺不寐大鼠焦虑样行为的作用及其镇静机制。方法:将72只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、右佐匹克隆组(西药组)、桂枝加龙骨牡蛎汤组(中药组)、中药组去龙骨牡蛎组、中药组去牡蛎组、中药组去龙骨组、龙骨牡蛎组,前4组每组12只,后4组每组6只(只进行活体功能检测)。采用自制狭长多平台浅水环境法剥夺除正常组外的其他各组大鼠睡眠42d。第15-42天进行相应干预后进行肺功能检测、高架十字迷宫实验和睡眠监测。以尼氏染色观察前4组扣带回神经细胞变化,以免疫组化法检测前4组脑扣带回γ-氨基丁酸A受体γ2(GABAARγ2)、氮甲基天冬氨酸受体(NMDAR)和谷氨酸代谢型受体1(mGluR1)蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组潮气量、每分通气量、吸气峰值流速、开放臂进入次数和停留时间、开放臂停留时间比例、NREM和REM、平均睡眠片段时间、GABAARγ2蛋白均显著降低(P<0.01,P<0.05);呼吸频率、觉醒次数、NMDAR和mGluR1蛋白表达均显著升高(P<0.01);神经元尼氏体变小,排列紊乱,胶质细胞增多。与模型组比较,西药组和中药组开放臂进入次数和停留时间、开放臂停留时间比例、REM、NREM、睡眠片段平均时间、GABAARγ2蛋白表达显著升高(P<0.01,P<0.05);呼吸频率、觉醒次数、NMDAR和mGluR1蛋白表达显著下降(P<0.01),神经元尼氏体较多;与西药组比较,中药组开放臂停留时间和比例、REM、mGluR1蛋白表达显著升高(P<0.01),神经元尼氏体增多明显,排列整齐,胶质细胞少。中药组去龙骨牡蛎组、中药组去牡蛎组、中药组去龙骨组、龙骨牡蛎组与模型组呼吸功能监测和高架十字迷宫实验结果比较均存在差异有统计学意义的指标,但指标改善相对弱于中药组。结论:桂枝加龙骨牡蛎汤对魄不安于肺不寐大鼠具有显著疗效,且该疗效与桂枝汤调和阴阳营卫和龙骨牡蛎相须安肺魄的协同作用有关。

志不安于肾和魄不安于肺不寐大鼠脑γ-氨基丁酸变化的机制

目的:比较志不安于肾和魄不安于肺不寐大鼠脑谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸脱羧酶(GAD)、γ-氨基丁酸转运体(GAT)通路分子水平的差异。方法:将36只雄性SD大鼠随机分为正常组、志不安于肾组、魄不安于肺组,每组12只。正常组正常饲养,志不安于肾组以“久坐湿地,强力入水”法、魄不安于肺组以水平台法分别干预42 d制备不寐模型。以红外夜视摄像机观察大鼠白天觉醒次数和觉醒时间,以戊巴比妥钠诱导大鼠睡眠的潜伏期和睡眠时间作为睡眠评价指标,以水迷宫实验评价学习记忆功能,以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠中段脑Glu和GABA水平,以免疫组化法检测大鼠中段脑GAD和GAT的水平。结果:魄不安于肺组白天起身走动次数增多,志不安于肾组下午处于不停的活动状态,提示单一主诉睡眠轻浅易醒及早醒分别复制成功。与正常组比较,两模型组睡眠时间均显著缩短(P<0.01),睡眠潜伏期显著延长(P<0.01);与正常组比较,两模型组第2、3、4天学习过程中逃避潜伏期显著延长(P<0.01),穿台次数显著减少(P<0.01);与正常组比较,两模型组中段脑GABA和Glu均显著下降(P<0.01),且志不安于肾组显著低于魄不安于肺组(P<0.01)。与正常组比较,两模型组各个脑区GAD表达均下降,且志不安于肾组部分脑区GAD表达显著低于魄不安于肺组(P<0.01);志不安于肾组各个脑区GAT表达均显著升高,魄不安于肺组部分脑区GAT表达显著升高,且魄不安于肺组各个脑区GAT表达显著低于志不安于肾组(P<0.01)。结论:志不安于肾和魄不安于肺不寐脑GABA下降和Glu升高的程度不同,与GAD下降及GAT升高的程度有关,说明志不安于肾不寐和魄不安于肺不寐二者差异的机制与GABA通路分子水平的变化有关。

魄不安于肺不寐大鼠褪黑素及其相关受体的变化

目的:探讨魄不安于肺不寐大鼠血清生物钟分子血清褪黑素(MT)、脑褪黑素相关受体(GPR50)和松果体的变化。方法:将24只SD大鼠随机分为模型组和正常组,每组12只。采用狭长多平台浅水环境法剥夺大鼠深睡眠42 d制备慢性睡眠剥夺模型。称取大鼠体质量,进行水迷宫检测、戊巴比妥钠诱导的睡眠实验和脑肌电监测,以E L I SA检测血清M T水平,以免疫组化法检测脑和脑干G P R50的水平,透射电子显微镜观察松果体的病理变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠体质量显著减少(P<0.05,P<0.01)、上台潜伏期显著延长(P<0.05)、穿越原平台上方次数显著减少(P<0.05);戊巴比妥钠致睡眠潜伏期显著延长(P<0.05)、睡眠时间显著缩短(P<0.05);脑电图慢波睡眠第2期及快动眼睡眠比例显著减少(P<0.01);血清MT显著降低(P<0.05);脑及脑干GPR50表达显著升高(P<0.01,P<0.05);松果体超微结构出现明显病理变化。结论:狭长多平台浅水环境法可以剥夺大鼠部分深睡眠,引起大鼠记忆、睡眠行为改变,褪黑素和GPR50及松果体超微结构的变化。上述模型指标的变化可以用于研究魄不安于肺型不寐时参考。