融合魏斯氏菌P2胞外多糖对巨噬细胞RAW264.7增殖及免疫调节活性的影响

以乳酸菌融合魏斯氏菌(Weissella confusa,W.confusa)P2为出发菌株,通过去菌体、去蛋白、乙醇沉淀和凝胶过滤层析等步骤从发酵液中获得纯胞外多糖(Exopolysaccharides,EPS),并以巨噬细胞RAW264.7为模型,采用CCK-8(Cell counting kit-8)法、中性红实验和细胞因子试剂盒探究W.confusa P2 EPS的体外免疫调节活性。结果表明,W.confusa P2 EPS可以显著促进巨噬细胞的增殖,提升巨噬细胞的吞噬能力和释放NO的能力,并在生物量水平上提高巨噬细胞中白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白介素-8(Interleukin-8,IL-8)和白介素-10(Interleukin-10,IL-10)细胞因子的含量,但不能提高单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)和白介素-6(Interleukin-6,IL-6)细胞因子的含量,说明W.confusa P2 EPS具有良好的免疫调节能力。本研究结果可为W.confusa P2 EPS的构效关系研究和免疫产品开发提供理论基础。

魏斯氏菌胞外多糖在发酵食品中的应用进展

乳酸菌的胞外多糖(exopolysaccharides,EPS)是乳酸菌在生长过程中代谢到细胞外的一种天然高分子聚合物,具有抗肿瘤、抗氧化、降胆固醇、促进肠道平衡等多种生物活性,还可以作为食品的增稠剂、乳化剂、稳定剂。魏斯氏菌(Weissiella)发现时间较短,具有较强的产EPS能力。本文主要综述了魏斯氏菌的来源、多糖的合成途径、分类和功能,以及魏斯氏菌所产EPS在发酵食品中的相关应用,旨在为魏斯氏菌和其EPS的生产和应用研究提供科学依据。

一株高产淀粉酶魏斯氏菌产酶条件优化

淀粉酶广泛存在于动物、植物、微生物中,魏斯氏菌具有高产淀粉酶的能力,本研究拟从实验室前期分离的3株魏斯氏菌中通过淀粉圈水解法筛选出一株高产淀粉酶的菌株W.confusa C13,测定其基本生物学特征,并通过单因素试验、PB试验、半陡爬坡试验和响应面对菌株的产酶条件进行优化.研究确定了碳源比例、pH、接种量是影响菌株产淀粉酶活力最显著的三个因素(P<0.05),通过响应面得到最佳酶条件为脱脂奶粉:蔗糖为4.76∶1、pH 8.07、接种量5.79%、豆粕:酵母粉为3∶1、NaCl浓度为3%、发酵温度35℃、发酵时间24 h.在该条件下淀粉酶活力可达105.48 U/mL,比未优化酶活提升了103.43%,优化效果显著(P<0.05),且在该条件下模型预测值和真实值基本吻合(相对误差为3.5%),为乳酸菌所产的淀粉酶的开发和利用提供了新的研究思路.

一株饲料鳜源魏斯氏菌的分离鉴定及其抑菌特性

为筛选具有广谱抑菌性的益生菌用于饲料鳜鱼养殖,分离定植于摄食人工配合饲料的鳜(Siniperca chuatsi)肠道优势菌并进行体外抑菌特性研究。从饲料鳜肠道中分离、培养出1株优势益生菌(命名:SJ548),对该菌进行形态学、生理生化以及16S rDNA分子鉴定,使用牛津杯法测定该优势菌对8种指示菌的抑菌活性。菌株SJ548在MRS固体培养基上呈现白色、圆形、边缘圆润的菌落,染色镜检为杆状或双杆状的革兰阳性菌;通过生理生化测试及16S rDNA基因序列分析,将菌株SJ548鉴定为食窦魏斯氏菌(Weissella cibaria)。研究发现:菌株SJ548可以抑制大肠杆菌(Escherichia coli)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、沙门氏菌(Salmonella enterica)、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、哈维氏菌(V.harveyi)、副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)、溶藻弧菌(V.alginolyticus)的生长,抑菌圈的直径为13~18 mm。本试验从饲料鳜肠道中分离获得的SJ548作为益生菌,可作为候选菌株开发为益生菌添加剂。

抗金黄色葡萄球菌融合魏斯氏菌细菌素的理化特性分析及全基因组测序分析

【目的】筛选产抗金黄色葡萄球菌细菌素的乳酸菌,分析其所产细菌素的理化特性并对其进行全基因组测序分析。【方法】本研究以金黄色葡萄球菌为指示菌株,从吉林省延边市的桔子中筛选产抑菌物质的乳酸菌。对筛选得到的菌株进行形态学观察和相似性鉴定,并构建系统发育树。通过排酸、排过氧化氢和蛋白酶敏感试验对抑菌物质进行初步分析,并测定抑菌物质对温度和紫外线的耐受性。对菌株进行全基因组测序及功能分析。【结果】筛选得到1株产抗金黄色葡萄球菌抑菌物质的乳酸菌,命名为LMM-1,在MRS固体培养基上为乳白色、光滑湿润的圆形菌落;革兰染色后在油镜下为短杆阳性菌。核酸序列经16S rRNA鉴定与融合魏斯氏菌相似性为99.86%,确定LMM-1为融合魏斯氏菌。排除有机酸试验结果显示,发酵上清液抑菌活性显著大于对照组;排除过氧化氢试验结果显示,抑菌活性几乎不变,可排除有机酸和过氧化氢的干扰。经蛋白酶处理分离菌抑菌产物对金黄色葡萄球菌的抑菌作用降低;在100℃高温、pH 2.0~8.0和2 h的紫外线照射下,仍具有良好抑菌活性。基因测序发现,LMM-1基因组长2194218 bp,共有2045个基因被预测,基因组平均GC含量为44.97%。GO功能富集分析结果显示,分子功能中的催化活性和生物过程中的代谢过程得到的基因组功能注释最多,分别为905和801个。KEGG通路富集分析结果显示,在遗传代谢、遗传信息处理和环境信息处理中有49条代谢通路,共有1050个基因得到功能注释。【结论】融合魏斯氏菌LMM-1产细菌素对金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌活性,且细菌素具有一定的耐酸碱、高温和紫外线的能力,对环境具有良好的适应性,该菌含有较多与催化活性和新陈代谢相关的基因。本研究结果可为抗金黄色葡萄球菌替抗产品的研发奠定基础。

自然发酵紫薯泥中融合魏斯氏菌的分离鉴定及安全性研究

本研究以自然发酵的紫薯为菌株来源,使用特定培养基从中分离纯化出菌株ZS-1,结合菌落特征、个体形态特征以及分子生物学鉴定确定其为融合魏斯氏菌(Weissella confusa)。通过生长特性分析发现,ZS-1菌株具有稳定的生长状态与良好的产酸能力,该菌株对碳源的要求较低,能有效利用甘露醇、乳糖、麦芽糖和葡萄糖,生存空间大。通过吲哚实验、明胶液化实验、溶血性实验及药敏实验进行安全性分析,结果表明该菌株不具有产生溶胶酶以及分解色氨酸的能力,但存在溶血性,能引起β-溶血现象,不宜在食品领域中进一步应用。ZS-1菌株对多种抗生素表现出敏感性,包括红霉素、四环素、氯霉素、克林霉素、利福平、青霉素、氨苄西林和头孢曲松等,这些抗生素能够有效抑制该菌的生长和繁殖。关于融合魏斯氏菌在食品领域的安全性,目前的研究尚需进一步深化,本研究为未来对融合魏斯氏菌的深入研究与应用提供了宝贵的参考依据。

3株魏斯氏菌的分离鉴定与生物学特性研究

目的 对泡菜发酵初期魏斯氏菌进行分离鉴定,并探究其安全特性和益生特性。方法 采用平板对细菌进行分离,进行分离菌株生理生化鉴定和16S rDNA测序鉴定,检测其代谢产物毒性,抗生素敏感性,耐药基因,评价细菌的耐酸、耐胆盐、耐人工肠液、黏附能力、对胆固醇及甘油三酯的降解能力、抗氧化能力以及抑菌能力。结果 共筛选出3株魏斯氏菌,命名为融合魏斯氏菌C13、食窦魏斯氏菌G232和W212;3株菌代谢产物无毒性,对14类21种抗生素表现出不同程度耐药,耐药基因检测C13携带四环素类耐药基因(tetM), G232和W212携带磺胺类耐药基因(sulⅡ);3株菌能耐受pH 2~4和3.0 g/L以下的胆盐,在人工肠液中3 h后存活率超过76.80%;3株菌的黏附能力好,疏水性为60.47%~62.69%,自凝聚率为43.76%~52.55%,共凝聚率为43.20%~61.58%;对胆固醇及甘油三酯的降解主要在前15 h;表现出一定的抗氧化能力,对1,1-二苯基-2-三硝基苦肼自由基清除率较高(清除率25.69%~58.12%),对超氧阴离子自由基清除率相对较低(10.08%~35.29%);3株菌对志贺氏菌、大肠杆菌等致病菌抑菌活性好(抑菌圈直径18.22~42.18 mm)。结论 本研究结果表明筛选的3株魏斯氏菌有较好的安全性和一定的益生特性,为将来魏斯氏菌在实际生产的应用提供基础数据。

1株牦牛乳源产细菌素融合魏斯氏菌ZW21全基因组测序及序列分析

融合魏斯氏菌(Weissella confusa)ZW21是1株具有良好抗菌活性的牦牛乳源乳酸菌,为探索其抗菌机理,分析其全基因组序列并挖掘该菌株的抗菌等功能特性基因。本研究基于Illumina NovaSeq PE150平台对W.confusa ZW21进行全基因组测序分析,并采用基因功能、京都基因与基因组百科全书、蛋白质直系同源簇、非冗余蛋白、碳水化合物活性酶数据库、转运蛋白分类数据库进行基因组基本功能注释。结果表明:W.confusa ZW21的基因组大小为2.44 Mb,GC含量45.66%;预测到2175个编码基因,编码基因总长度为1947771 bp,平均长度为896 bp;通过功能数据库对该菌株基因组基本功能注释和代谢通路基因信息注释可知,基因组中含有8种细菌素(如大肠菌素V和乳球菌素)相关基因、3种与抗氧化活性相关基因,以及可调控免疫和炎症信号通路(如核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白受体信号通路、过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路)和编码抗叶酸的基因。综上,W.confusa ZW21全基因组测序及分析为研究其抗菌机理提供基础。

饲料提取物对食窦魏斯氏菌耐酸性的影响

微生物发酵饲料以其诸多优势成为近几年饲料行业的研究热点,为了筛选更适合动物胃肠消化道的菌种,将耐酸性食窦魏斯氏菌W25、F6、E37置于酸化的生理盐水缓冲溶液中,研究麦麸、豆粕和玉米提取物及其所含的膳食组分(还原糖和游离氨基氮)对其耐酸性的影响,以确定提高菌株存活能力的理化因素,为日后生物发酵饲料菌种筛选提供依据。结果表明:麦麸、豆粕和玉米提取物对菌株的耐酸能力都具有保护作用,在同一浓度饲料原料提取物对菌株在酸环境下耐受性均W25>F6>E37;进一步的单因子分析表明,葡萄糖对菌株的耐酸能力具有保护作用,并随着浓度的增加而增强,酵母膏对菌株的耐酸能力无影响。

两株魏斯氏菌的益生特性比较

以分离自泡菜的2株魏斯氏菌为研究对象,对其耐酸、耐胆盐、耐人工肠液、抑菌、降解胆固醇和甘油三酯、表面特性的益生特性进行了比较研究。实验结果表明:绿色魏斯菌ZY-6的耐酸特性好于希腊魏斯菌WS-419,pH值为2时的存活率分别为45.18%和24.65%,pH为3和4时,存活率>100%;在质量浓度3g/L的胆盐浓度中存活率分别为75.89%和72.05%,都显示出较好的胆盐耐受性;2株菌对人工肠液具有一定的抗性,3h后的存活率在80%左右;ZY-6的抑菌活性稍好于WS-419,两者对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌的抑菌圈直径分别为22.61、27.02、30.53mm和22.59、25.82、27.96mm;2株魏斯菌降解胆固醇的能力相似,降解率分别为32.79%和32.13%;WS-419对甘油三酯的降解率好于ZY-6,两者分别为42.80%和26.70%;2株菌的表面疏水性和表面凝集性皆大于60%,显示出较好的表面特性。绿色魏斯菌ZY-6和希腊魏斯菌WS-419的益生性能较好,可作为功能性食品开发的候选菌株。

魏斯氏菌在发酵食品中的应用

魏斯氏菌是一类存在于酱油、泡菜、豆豉、香肠等多种发酵食品的乳酸菌。它是参与食品发酵的重要微生物,在发酵食品中具有广泛应用价值。在食品发酵过程中,魏斯氏菌对食品中有机酸、酯类及短链脂肪酸等风味物质的合成具有重要作用。此外,魏斯氏菌属的有些菌株具有合成细菌素、低聚糖、胞外多糖和纤维素等特性,具有潜在的益生菌特性。该文主要对魏斯氏菌的分离鉴定、生理生化特性以及菌株在发酵食品中的应用特性等几方面的研究进展进行了综述。

一株抗真菌食窦魏斯氏菌AT6的特性分析及培养条件优化

对食窦魏斯氏菌AT6的抑菌特性进行了研究，并采用响应面法对其培养条件进行优化。结果表明AT6发酵液在酸性pH条件下对白色念珠菌等具有较好的抑制效果，在pH4时，抑制率78％～86％。通过响应曲面优化食窦魏斯氏菌最佳培养条件为：培养基初始pH5．5，34℃条件下培养40h，其抑菌率较优化前可提高16．36％。

环境胁迫下食窦魏斯氏菌的耐受性评价

本研究以分离自新鲜竹笋表面的16株食窦魏斯氏菌(Weissella cibaria)为研究对象,评价其对低酸、温度和渗透压胁迫下的耐受力,筛选出具有良好耐受性的菌株,并对所得良好耐受性的菌株进行体外人工胃液和胆盐耐受力评价。结果表明,低酸、温度、渗透压胁迫下实验菌株的耐受力各不相同,综合比较得出5株食窦魏斯氏菌的耐受力均较好,分别是HSG 08、HSG 09、HSG 10、HSG 11和HSG 15。pH3.0人工胃液实验结果表明,5株食窦魏斯氏菌中,HSG 08、HSG 09和HSG 11对人工胃液中的存活率均较高,其中HSG 08的存活率最大;胆盐胁迫实验结果表明,在0.1%胆盐时,HSG 08的生长效率最高。综上所述,HSG 08在不同环境胁迫下的耐受性均较好,可用于下一步益生性食窦魏斯氏菌的研究。

辣白菜中分离含内源性质粒的魏斯氏菌及其鉴定

为了探讨魏斯氏菌在辣白菜中起的作用和获得与明串珠菌相关乳酸细菌的质粒,从辣白菜中分离了魏斯氏菌。辣白菜是朝鲜民族的传统食品,在低温条件下大白菜经过乳酸细菌发酵而成的。将辣白菜汁液均匀涂布在含2%(m/v)CaCO3的MRS平板上,30℃恒温培养箱中培养24h～36h,在中国内地首次分离获得了魏斯氏菌。通过对该菌进行镜检、生理生化特性检测以及16S rDNA序列的系统发育树分析确定其分类地位。结果表明其属于Weissella cibaria,命名为kimshi006,在NCBI上的登录号为HM369807。这一魏斯氏菌菌株含有2条内源性质粒,其大小分别为大约3000bp和8000bp。

绿色魏斯氏菌对单增李斯特菌毒力特性的影响

[目的]本文旨在研究绿色魏斯氏菌与单增李斯特菌共存对单增李斯特菌的生长能力、毒力基因表达及细胞黏附能力的影响,揭示乳酸菌与单增李斯特菌之间的交互作用机制。[方法]采用膜隔离装置,取4℃贮藏条件下放置0、12、24、48和96 h的菌悬液分别测定单增李斯特菌和绿色魏斯氏菌的数量,同时提取单增李斯特菌的RNA进行反转录和荧光定量PCR,分析单增李斯特菌6种主要毒力基因(hly A、prf A、bsh、act A、sig B和inl A)的表达情况。利用Caco-2细胞进行绿色魏斯氏菌与单增李斯特菌的竞争、排斥和置换试验,观察单增李斯特菌对Caco-2细胞的黏附效果。[结果]产细菌素绿色魏斯氏菌C1可降低单增李斯特菌的数量,而不产细菌素绿色魏斯氏菌C2对单增李斯特菌的生长影响不大。C1和C2的代谢产物使单增李斯特菌6种毒力基因表达量下调,且C1导致的下调趋势比C2大。C1主要通过置换和竞争作用来抑制单增李斯特菌对Caco-2细胞的黏附,而C2的作用较弱。[结论]产细菌素绿色魏斯氏菌C1比不产细菌素绿色魏斯氏菌C2能够更好地控制单增李斯特菌的生长,抑制相关毒力基因的表达,并主要通过置换和竞争作用来抑制单增李斯特菌对Caco-2细胞的黏附。产细菌素绿色魏斯氏菌C1可作为单增李斯特菌的防控菌株。

魏斯氏菌的研究现状

魏斯氏菌（Weissella）属于乳酸菌（lactic acid bacteria）,其在微生物学、医药学、发酵、工业及食品加工等方面的作用近年来开始受到研究者的关注。本文主要对魏斯氏菌中的质粒、β-葡糖苷酶、噬菌体及其益生作用等作一综述。1魏斯氏菌的主要特征目前GenBank数据库中（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/）魏斯氏菌属已命名的有15个种。

超高压协同温度处理对绿色魏斯氏菌的失活动力学

为了建立超高压协同温度处理对绿色魏斯氏菌在低温烟熏火腿中的失活模型,采用40、45、50℃结合200～500 MPa对接种10~8～10~9 CFU/mL绿色魏斯氏菌的烟熏火腿进行5、10、15、20、25、30 min的超高压处理,同时做相同条件的离体实验进行对比。采用薄层平板计数,以时间为横坐标,亡菌数量级为纵坐标作失活曲线,选择一级线性模型和非线性模型(Weibull和Logistic)进行模型的拟合,用模型的评价因子相关系数R^2、准确因子A_f和均方差验证方程的拟合度。结果表明:经热压结合处理后,接种于烟熏火腿中的绿色魏斯氏菌比相同条件下离体状态的绿色魏斯氏菌的失活更缓慢,可能因为火腿基质中存在一些大分子物质(如蛋白质、脂肪等)对菌体的保护作用。Logistic方程最适合描述绿色魏斯氏菌在两种状态下的失活情况,为预测绿色魏斯氏菌在烟熏火腿中的失活提供了理论依据。

一个融合魏斯氏菌隐蔽质粒的序列分析

从融合魏斯氏菌(Weissella confusa QJ012)中发现一个隐蔽质粒(p QJ012),测序结果显示该质粒大小为1489 bp,碱基G+C含量为42.8%。BLAST结果显示该质粒的核苷酸序列同pJY33和pKLCA的同源性分别为93%、92%。ORF1编码一个282个氨基酸残基的复制蛋白(Rep),其氨基酸序列与质粒pJY33和pKLCA的同源性分别为91%、85%。根据复制蛋白、dso和sso的序列特征,推定pQJ012的复制方式为滚环复制,是滚环复制pT181家族成员。质粒pQJ012可能构建为良好的表达载体。

乳酸乳球菌和魏斯氏菌的分离及鉴定

试验以生牛奶、自制泡菜水、青贮料、市售奶酪为样品,进行乳酸乳球菌和魏斯氏菌的筛选与鉴定。通过培养基中菌落形态观察和镜检细胞形态观察,共筛得6株疑似乳酸球菌(分别命名为ST1、ST2、ST6、ST7、ST8、ST9)。经生理生化、耐盐性、耐热性试验以及16S rD NA序列分析鉴定,这6株菌分属两个属:ST1、ST2、ST7、ST9为乳酸乳球菌(Lactococcus lac tis),其中ST2为乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcus lactis subsp.Cremoris),ST7为乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp. Lactis);ST6、ST8属于魏斯氏菌属(Weissella),其中ST6为食窦魏斯氏菌(Weissella cibaria)。研究表明,生牛奶和泡菜水分别是乳酸乳球菌和魏斯氏菌的优良生活环境,传统方法与分子生物技术相结合可更准确快速地分离及鉴定菌株。

绿色魏斯氏菌ORC4的抗氧化、降胆固醇作用

从风干香肠中分离得到一株生长良好的乳酸菌ORC4,菌株能产乳酸、革兰氏染色阳性、接触酶阴性。经系统发育分析,结合菌落形态、细胞形态、生化反应试验,确定菌株ORC4为绿色魏斯氏菌。绿色魏斯氏菌ORC4的完整和破碎细胞对O2-·、DPPH·和·OH的清除率都与细胞浓度呈正相关。在细胞浓度为5×108CFU/m L时,菌株ORC4破碎细胞对O2-·、DPPH·和·OH的清除率都高于完整细胞,分别为45.17%、56.17%和54.01%。菌株ORC4还能清除培养基中最多为35.87μg/m L的胆固醇,单位细胞干重的胆固醇清除率为19.89μg/mg。