牙鲆FEL1基因的表达及功能分析

凝集素(Lectin)是一类能与糖进行非共价可逆结合的蛋白质,具有凝集细胞和聚糖的作用。在牙鲆的集约化养殖过程中,会面临许多病原微生物的入侵,造成大量的经济损失,研究表明鱼卵凝集素(Fish egg lectin)是凝集素超家族中的一员,在硬骨鱼的抗菌免疫反应中发挥作用。在本研究中,克隆验证了牙鲆FEL1基因(Fish egg lectin 1,PoFEL 1),其中开放阅读框(Open reading frame,ORF)为675 bp,编码224个氨基酸,蛋白分子量为24.8 kDa。PoFEL 1组织表达分析显示,PoFEL 1在卵巢、肠以及肝脏中的表达量比较高;胚胎发育过程中PoFEL 1表达分析显示,在胚胎发育的早期PoFEL 1的表达量比较高,随着胚胎的逐渐成熟,其表达量逐渐降低,呈母源性表达。体外细胞刺激实验表明LPS、PGN、Poly(I∶C)和E.tarda刺激牙鲆卵巢细胞系后,PoFEL 1的表达上调。利用牙鲆卵巢细胞研究了PoFEL 1蛋白的亚细胞定位,证实其分布在细胞质中。用LPS刺激过表达PoFEL 1的牙鲆卵巢细胞系,发现细胞因子p38、IL-6和TNF-α的表达显著上调。通过双荧光素酶检测系统发现,过表达PoFEL 1能显著上调NF-κB报告基因的表达,从而引起机体的免疫应答,说明PoFEL 1对NF-κB通路可能具有调节作用。以上研究结果说明PoFEL 1在牙鲆先天性免疫过程中发挥作用。